吉林省自然科学基金(20101590)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：张立春曹阳金海国于永生朴庆林更多>>
- 相关机构：吉林省农业科学院延边大学吉林农业大学更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项吉林省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 转bFat-1基因载体及牛胚胎成纤维转基因细胞系构建
- 2013年
- 为了获取转bFat-1基因牛胎儿成纤维细胞系,试验采用酶切连接方法构建pIRES2-eGFP-bFat-1载体,采用脂质体转染、G418筛选、荧光显微镜观察、基因组PCR和RT-PCR鉴定方法构建重组转bFat-1基因牛胚胎成纤维细胞。结果表明:SacⅠ和ApaⅠ双酶切和测序验证pIRES2-eGFP-bFat-1载体构建正确;经脂质体转染,G418筛选去除未转染细胞,最后通过荧光显微镜观察,基因组PCR和RT-PCR鉴定获得了4株既高表达绿色荧光蛋白又高表达bFat-1基因的牛胚胎成纤维转基因细胞株。说明已成功构建了转bFat-1基因载体并构建出转基因细胞系。
- 张立春金海国刘铮郭振刚曹阳于永生朴庆林王晓阳
- 草原红牛胎儿成纤维细胞的分离培养及性别鉴定被引量：4
- 2012年
- 为了获得高质量的草原红牛胎儿成纤维细胞,试验以发育40 d的草原红牛胎儿为材料,采用组织块贴壁法及胶原酶消化法分离纯化草原红牛胎儿成纤维细胞,并绘制生长曲线,再以SRY基因为模板设计性别鉴定引物,通过对已知性别草原红牛血液基因组PCR扩增检验所设计引物的性别特异性,最后采用基因组PCR方法鉴定分离得到的成纤维细胞的性别。结果表明:成功分离纯化出草原红牛胚胎成纤维细胞,经基因组PCR检验该细胞株性别为雄性。
- 张立春张国梁于永生朴海仙曹阳金海国
- 关键词：草原红牛胚胎成纤维细胞体外培养性别鉴定
- 线虫Fat-1基因密码子的优化及其真核表达载体构建被引量：2
- 2012年
- 目的:为使线虫Fat-1基因能够在牛中高效表达,通过密码子优化及全基因合成方法制备Fat-1基因,并构建其转基因表达载体。方法:通过生物信息学手段,将来源于线虫的Fat-1基因以牛为表达宿主进行密码子优化,将优化后的Fat-1基因命名为bFat-1;通过全基因合成方法获得bFat-1基因,构建pcDNA3.1-bFat-1真核表达载体。结果:通过密码子优化,影响Fat-1基因在牛中表达的密码子适应指数、优势密码子频率及GC含量等各项指标均有显著改善;全基因合成、克隆及测序结果显示已获得bFat-1基因;构建并鉴定了pcDNA3.1-bFat-1载体。结论:获得了适合牛体表达的Fat-1基因并构建了其转基因载体,为获得高效表达Fat-1基因的转基因牛细胞系奠定了基础。
- 张立春刘晓辉曹阳于永生朴庆林金海国王晓阳
- 关键词：线虫密码子优化
- 转Fat-1基因体细胞克隆草原红牛研究被引量：3
- 2012年
- Fat-1基因的转基因动物克隆,为研究ω-3多不饱和脂肪酸的功能提供了高效、准确的医学、营养学动物模型。试验成功建立了草原红牛耳部成纤维细胞系,将Fat-1基因转染到草原红牛成纤维细胞,获得转基因阳性细胞克隆。以转基因细胞为核供体,体外成熟牛卵母细胞为核受体构建转基因克隆囊胚,比较未转基因与转基因克隆胚胎的体外发育情况。结果表明,体细胞重构胚体外囊胚率分别为26.04%和26.04%,两者之间无显差异著(P>0.05)。转Fat-1基因的草原红牛重构桑葚胚或早期胚胎移植到延边黄牛子宫内,有7头妊娠,但没能够获得妊娠足月个体。
- 康锦丹高威威高青山张立春
- 关键词：体细胞克隆草原红牛
