国家科技重大专项(2009ZX09103-629)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：杲修杰赵云钱令嘉武磊冷雪更多>>
- 相关机构：军事医学科学院华北煤炭医学院北京双鹤药业股份有限公司更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
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- 重组人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶的表达纯化和鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的对重组人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(recombinant human betaine-homocysteine S-methyltrans-ferase,rhBHMT)进行表达纯化和鉴定。方法采用基因重组技术在原核系统表达BHMT蛋白,镍螯合亲和层析和Sephacryl S200层析进行纯化。产物经SDS-PAGE、HPLC、N端氨基酸序列检测与活性验证。结果终产物rhBHMT纯度达97.9%。相对分子质量为45 000,N端氨基酸序列与理论序列一致。结论从工程菌中获得具有活性的高纯度rhBHMT,产物均一,工艺稳定,为中试放大提供可靠依据。
- 商艳芬杨仲璠赵云杲修杰吴彦卓徐明波钱令嘉
- 关键词：基因表达纯化
- 人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(BHMT)表达及抗体制备被引量：2
- 2011年
- 目的重组表达及纯化人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(betaine-homocysteine methyltransferase,BHMT)蛋白,制备BHMT多克隆抗体并对其性质进行研究。方法 TRizol法提取人HepG2细胞总RNA,RT-PCR获得BHMT基因,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切,构建重组表达载体pET-28a-BHMT,经0.5 mmol/L IPTG诱导表达,表达产物通过Ni柱亲和纯化获得重组蛋白;以重组BHMT蛋白免疫兔,获得兔多克隆抗体,并对抗体进行纯化,应用Western印迹方法分析其识别人天然BHMT蛋白的能力。结果经测序证明,RT-PCR得到的人BHMT基因与Gen-Bank中人的BHMT基因完全一致;构建的BHMT原核表达载体可稳定地表达可溶性人BHMT蛋白;重组BHMT蛋白免疫兔后,兔血清抗体纯化获得高纯度BHMT抗体,此抗体可以特异性地识别人肝癌组织中的天然BHMT蛋白。结论成功重组表达并纯化人BHMT蛋白,所获得的BHMT多克隆抗体可以应用于人BHMT蛋白的检测,为研究BHMT在高同型半胱氨酸血症中的作用机制奠定基础。
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- 关键词：克隆免疫印迹
