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高密度培养重组菌生产鸡传染性支气管炎DNA疫苗被引量：3: 2006年; 目的：高密度、高质粒拷贝数培养工程菌生产重组DNA疫苗pCDNA-M。方法：应用20L自控发酵罐，采用补料分批培养技术，控制补料的补加使溶氧控制在30％～60％，pH值控制在7左右。结果：重组菌E．coli JM109／pCDNA-M发酵液OD600达到45。经纯化后最终质粒DNA得率为100mg/L，质粒没有发生丢失现象。结论：该实验为禽传染性支气管炎DNA疫苗的大规模生产奠定了基础。; 汪洋易力王红宁王淑芳李宏伟; 关键词：DNA疫苗发酵

禽传染性支气管炎脂质体、壳聚糖/DNA疫苗免疫效果比较研究被引量：8: 2006年; 将制备的禽传染性支气管炎脂质体／DNA疫苗和壳聚糖／DNA疫苗，分别以肌肉注射（i．m）和滴鼻、点眼（i．n）两种途径免疫健康雏鸡，以裸DNA疫苗为对照，采用流式细胞仪（FACS）及间接ELISA分别对免疫鸡外周血中CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞数及特异性IBV血清抗体IgG的动态变化进行检测，并于免疫后35d进行攻毒，结果显示：（1）CD4^＋T淋巴细胞数，所有试验组在免疫后1～3周左右均高于对照组（P〈0．01或P〈0．05），各试验组间，脂质体／DNA疫苗肌肉注射途径在免疫后10d后高于壳聚糖／DNA疫苗，但仅在第15天差异显著（P〈0．05），而滴鼻、点眼途径则相反；（2）所有试验组CD8^＋T淋巴细胞数仅在免疫后第15天与对照组差异显著（P〈0．05），各试验组间无显著差异；（3）所有组间特异性IBV血清抗体IgG动态变化差异不显著；攻毒后脂质体／DNA疫苗肌肉注射组无鸡只死亡，其他试验组有4％或8％死亡率，均显著低于对照组（12％）。由此可见，脂质体和壳聚糖均为DNA疫苗良好的佐剂或载体，且脂质体／DNA疫苗肌肉注射的免疫效果优于壳聚糖／DNA疫苗。; 李晓英王红宁黄勇柳萍胡慧琼白天; 关键词：DNA疫苗脂质体壳聚糖体液免疫

禽传染性支气管炎病毒S1、M、N基因真核表达质粒的构建: 本研究根据国内外及本课题组前期工作已在GenBank中登录的IBV S1、M、N的基因序列设计用于扩增IBV S1、M、N基因的三对引物,上游引物加上HindⅢ酶切位点,下游引物加上XhoI酶切位点,以本研究已克隆的S1...; 王红宁周生胡慧琼黄勇李春杨帆柳萍; 关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1基因 M基因 N基因真核表达质粒; 文献传递

应用不连续密度梯度离心纯化禽传染性支气管炎冠状病毒被引量：2: 2007年; 陈萍王红宁胡慧琼黄勇柳萍; 关键词：冠状病毒传染性支气管炎密度梯度离心纯化病毒提纯分子生物学

转猪轮状病毒VP6基因烟草植物的获得被引量：7: 2006年; 根据G enB ank中轮状病毒VP 6序列设计1对引物,从pGEM-T-VP 6质粒中扩增VP 6 PCR产物。将VP 6克隆到PB I121质粒中,转化根癌农杆菌LBA 4404,挑取阳性菌落的质粒进行酶切鉴定。用叶盘法转化烟草,获得再生苗,用RT-PCR、PCR和PCR-sou thern杂交方法进行鉴定,结果表明,VP 6基因已成功地转入烟草中。; 张二芹李世访王春凤钱爱东成卓敏; 关键词：猪轮状病毒 VP6基因烟草植物疫苗

禽传染性支气管炎病毒SAIBk株全基因组的分段克隆、测序及分析被引量：9: 2007年; 根据GenBank上公布的IBV基因组序列，经多重比较后设计19对引物，用RT-PCR方法对禽传染性支气管炎病毒致肾病变型分离株SAIBk株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定。测序结果表明：SAIBk株基因组序列全长27520 bp，A＋T的含量占61．74％，具有典型的冠状病毒基因组结构。基因组内碱基的插入和缺失主要分布在3 220-3470位、20560-20810位、25310-25600位和27150—27220位。与GenBank上公布的5株IBV基因组序列Beaudette、Mass41、Ca199、BJ、KQ6的同源率分别为87．2％、87．6％、87．2％、85．6％和87．5％。SAIBk株基因组不同区域的同源性分析结果表明，3＇UTR和5＇UTR是基因组中最为保守的区域，同源率在90．9％～97．7％，而S1基因是基因组中变异最大的区域，同源率在74．8％～83．2％。系统进化分析结果表明SAIBk株与国内分离株S14、LX4、BJ的亲缘关系较近。; 周生王红宁唐梦君黄勇柳萍; 关键词：禽传染性支气管炎病毒基因组

桑子叶与胚轴不同区段离体再生植株的研究被引量：10: 2005年; 以桑的子叶、下胚轴作为外植体,并将子叶等分为子叶尖部、子叶中部、子叶基部(靠近胚芽的一段),将下胚轴等分为下胚轴上段(靠近胚芽的一段)、中段、下段,置于培养基中培养。结果表明:子叶基部与下胚轴的上段离体再生效果好,子叶基部的离体再生成苗率可以达到63.5%,下胚轴上段的离体再生成苗率为47.1%。同时还发现分区子叶和分段下胚轴都是越接近胚芽生长点的部位用作外植体,其诱导出芽的时间短,并且能很好地分化再生成苗。; 王茜龄余茂德徐立吴福安任世儒敬成俊吴存容; 关键词：桑树子叶胚轴

四川山地乌骨鸡IL-1β真核表达质粒构建及对IBV DNA疫苗免疫佐剂效应研究: 根据Genebank上鸡IL-1β序列(Y15006)设计引物对,采用RT-PCR法从四川山地乌骨鸡的外周血淋巴细胞RNA中克隆ChIL-1β基因,将其克隆到PMD18-T载体测定序列,双酶切后,插入真核表达载体pcDN...; 徐永莉王红宁黄勇张毅余协中唐梦君鲜凌谨向青封浪叶满玉刘蕊娜; 关键词：山地乌骨鸡; 文献传递

禽传染性支气管炎病毒S1基因自杀性DNA疫苗研究: 前言：禽传染性支气管炎是由禽传染性支气管炎病毒引起的一种禽高度接触性、急性呼吸道疾病。以呼吸道症状、肾病变、产蛋性能下降为主要特征。目前多采用弱毒苗及多价灭活苗免疫,但存在免疫效果不好; 鲜凌瑾王红宁阳泰李玉玲赵素君王丽焕; 文献传递

四川山地乌骨鸡IL-2、IL-15真核表达质粒构建及对疫苗的佐剂效应研究: 本试验用RT-PCR方法从ConA刺激的四川山地乌骨鸡的外周血淋巴细胞和脾淋巴细胞总RNA分别扩增了鸡IL-2和IL-15的cDNA。将分离的cDNA片段克隆到PMD18-T载体,进行序列测定分析。结果表明:鸡IL-2基...; 胡慧琼王红宁周生李晓英黄勇柳萍徐永莉; 关键词：鸡白细胞介素2 白细胞介素15 IBV HI抗体; 文献传递

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国家高技术研究发展计划(2003AA241120)