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猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究被引量：16: 2008年; 为研制新型猪囊尾蚴疫苗,将猪带绦虫六钩蚴阶段编码TSOL18的基因定向克隆于真核表达质粒pVAX1,经筛选、鉴定及DNA序列分析正确后,将重组质粒pVAX1/TSOL18转染BHK-21细胞,通过SDS-PAGE、Western blotting、免疫荧光试验等方法检测细胞中表达的TSOL18抗原。结果表明,重组真核质粒pVAX1/TSOL18可在BHK-21细胞中表达TSOL18目的蛋白,表达蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。动物免疫试验表明,真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫和体液免疫应答,这为猪囊尾蚴病基因疫苗的研究奠定了良好基础。; 郭爱疆才学鹏房永祥贾万忠骆学农刘红霞; 关键词：猪带绦虫免疫原性

猪细胞因子cDNA表达文库的构建及其基因的克隆鉴定被引量：1: 2006年; 为克隆和研究猪细胞因子及相关基因，应用建库试剂盒成功构建了猪细胞因子cDNA表达文库。采取健康猪外周血及淋巴结，分离单个核细胞，经LPS＋PHA联合刺激不同时间后，提取总RNA。将各组样品混合，分离纯化mRNA。反转录合成cDNA第一链和第二链，与EcoRⅠ和HindⅢ接头连接。酶切和过柱分级分离后，与λSereen载体连接，经体外包装转染E．coli ER1647宿主菌，进行文库容量测定和扩增。以扩增文库的DNA为模板，利用已知基因引物克隆猪IL-2和IL-4的cDNA并进行测序。结果表明，成功构建了猪细胞因子cDNA文库，文库原始库容量为8×10^5，插入片段在300～2000bp，扩增得到特定的IL-2和IL-4基因，说明文库质量高、代表性强，为进一步从文库中筛选未知细胞因子及相关基因提供了有效的工具。; 夏小慧景志忠王勤窦永喜; 关键词：细胞因子 CDNA文库基因克隆

CpG DNA重组质粒对猪囊尾蚴抗原的免疫佐剂效应研究被引量：3: 2006年; 用CpG基序寡核苷酸的重组质粒(CpGDNA)与猪囊尾蚴抗原制备疫苗免疫小鼠,检测小鼠抗囊尾蚴总抗体和IgG2a抗体亚类以及体外诱导免疫脾细胞分泌白介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)的含量,观察其免疫佐剂效应。发现CpGDNA重组质粒中无论插入CpG基序多或少都能增强小鼠抗囊尾蚴总抗体和IgG2a抗体亚类含量,都具有免疫佐剂效应,但其免疫强度有差别,其中CpG2的佐剂效应最强;此外,CpGDNA重组质粒能与铝胶、206佐剂配伍发挥免疫增强协同作用。; 景志忠蒙学莲王佩雅窦永喜李辉骆学农郑亚东才学鹏; 关键词：CPG 佐剂效应 TH1型

猪囊尾蚴AgB基因的克隆表达及其免疫学特性分析被引量：1: 2008年; 目的克隆猪囊尾蚴AgB基因并在大肠杆菌中表达,为研制猪囊尾蚴病诊断试剂和基因工程疫苗奠定基础。方法从猪囊尾蚴虫体中提取总RNA,利用反转录聚合酶链式反应及重叠延伸PCR法扩增AgB完整序列,并克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌中诱导表达。通过SDS-PAGE、Western-blotting检测AgB的表达和免疫反应活性。通过对包涵体的洗涤、纯化及变复性研究,纯化目的蛋白。采用ELISA法检测纯化蛋白检出猪囊尾蚴阳性血清率和免疫小鼠血清中抗猪囊尾蚴抗体的水平。结果测序证实扩增出AgB基因序列并正确插入到原核表达载体。表达质粒在大肠杆菌BL21中高效表达。纯化的目的蛋白,具有良好的抗原性和免疫原性。结论成功扩增了全长AgB基因并得到了高效表达,纯化了具有免疫性的重组蛋白,为进一步开展AgB的诊断试剂和重组疫苗研究奠定了基础。; 郭爱疆才学鹏海岗窦永喜贾万忠骆学农张少华景志忠; 关键词：原核表达纯化

猪白介素家族重要基因的克隆、表达及其结构与功能预测分析: 白介素(interteukin,IL)是由单核-巨噬细胞及淋巴细胞经激活后转录表达和分泌的一类小分子多肽的生物活性物质,在机体免疫应答、炎症反应以及抗感染等方面具有重要功能,是机体的主要细胞因子之一。本研究以猪白介素基因...; 景志忠窦永喜罗启慧陈国华蒙学莲郑亚东骆学农才学鹏; 关键词：白介素基因家族同源性分析; 文献传递

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国家高技术研究发展计划(2003AA241111)