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骨形态发生蛋白-7诱导人肾成纤维细胞间质-上皮转化的研究被引量：1: 2008年; 目的探讨骨形态发生蛋白-7(bone morphogenic protein-7,BMP-7)能否诱导人肾成纤维细胞出现间质-上皮的转化。方法原代培养获得人肾间质成纤维细胞,传至第3代用于本实验。培养液中添加1000ng/L BMP-7 72h后,观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖,ELISA法测定上清Ⅰ胶原含量,Western blot分析E-cadherin和Pax2蛋白表达。结果细胞与BMP-7孵育72h后,出现细胞聚集类似小管细胞团块。与对照组相比,成纤维细胞增殖活性减低,Ⅰ型胶原分泌下降,上皮标志物E-cadherin和肾发生的标志分子Pax2表达增加。结论肾成纤维细胞至少保持部分它胚胎时的印迹和可塑性,BMP-7可诱导人肾成纤维细胞呈现间质-上皮的转化。; 黄云剑王梓华赵景宏张静波; 关键词：BMP-7 肾成纤维细胞

Smad7而非Smad6基因可抑制TGF-β诱导肾小管上皮-间充质转分化被引量：10: 2008年; 目的:观察Smad6和Smad7基因能否抑制TGF-β诱导肾小管上皮-间充质转分化。方法:构建产生表达Smad6和Smad7基因的无辅毒腺相关病毒载体,再将病毒颗粒分别转染入人肾小管上皮细胞(HKC),细胞随机分为正常对照、TGF-β1组、Smad7组、LacZ组、TGF-β1+Smad7或Smad6组、TGF-β1+LacZ组。10μg/LTGF-β1添加入培养液孵育15、30、60、120min和3d。Western blot测定TGF-β1和Smad6或Smad7基因转染对细胞p-Smad2、E-cadherin、α-smooth muscle actin(α-SMA)表达的影响,ELISA法测定培养上清羟脯氨酸的含量的变化,倒置显微镜观察细胞形态变化。结果:与未加TGF-β1细胞相比,添加TGF-β1后15、30、60、120min胞内Smad2磷酸化水平明显增加,30min时表现最大。10μg/LTGF-β1与HKC孵育72h后,细胞α-SMA和羟脯氨酸量合成增加,E-cadherin表达减少;细胞形态变长,呈纺锤状细胞,失去鹅卵石样的形状。Smad7基因转染可抑制TGF-β1诱导Smad2磷酸化,抑制细胞α-SMA和羟脯氨酸合成,增加E-cadherin表达,维持培养细胞的上皮样形态,相反,Smad6没有这样的作用。结论:Smad7而不是Smad6基因转染能抑制TGF-β1诱导肾小管上皮-间充质转分化,这些作用可能与Smad7阻断Smad2磷酸化有关。; 黄云剑王梓华张静波梁莉陈枫赵景宏; 关键词：SMAD7 SMAD6 上皮-间充质转分化 TGF-Β

马兜铃酸对人肾小管上皮细胞损伤的体外实验研究被引量：1: 2009年; 目的研究马兜铃酸(aristolochic acid,AA)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)的损伤及可能机制。方法将细胞分为4组:正常对照组与AA30、60、120μmol/L组(n=6),分别作用于HK-2细胞培养48h后,倒置相差显微镜观察细胞形态,CCK8试剂盒(Cell Counting Kit-8)检测增殖,流式细胞仪检测凋亡,Western blot分析激活型Caspase-3的表达,全自动生化检测仪测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG酶)的含量,激光共聚焦扫描荧光显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)观察α-平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,α-SMA)和E-钙黏连蛋白(E-cadherin)的表达,ELISA测定上清液中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和Ⅲ型胶原的分泌。结果HK-2分别在30、60、120μmol/L AA作用48h后,出现增殖抑制,凋亡增加,激活型Caspase-3表达增多,LDH和NAG酶升高,均呈剂量依赖性。60μmol/L浓度的AA还表现E-cadherin表达减弱,α-SMA表达增强,TGF-β1和Ⅲ型胶原分泌明显增加(P<0.05)。结论AA可引起HK-2细胞明显的增殖抑制、凋亡和上皮-间充质转分化呈一定的浓度依赖性。; 王梓华黄云剑; 关键词：马兜铃酸肾小管上皮细胞转分化凋亡

骨髓间充质干细胞移植与肾脏病被引量：1: 2011年; 骨髓间充质干细胞是目前广受关注的一群成体干细胞,具有取材容易,增殖能力强,生物学特性稳定,可以跨胚层分化,低免疫源性,参与受损组织修复等优点,随着组织工程的兴起和发展以及其自身所特有的生物学特性,人们逐渐认识到将骨髓间充质干细胞作为肾脏病移植治疗的种子细胞具有良好的应用前景。本文就骨髓间充质干细胞的生物学特性及其在肾脏病移植治疗中的进展做一综述。; 卫静袁发焕黄云剑; 关键词：间充质干细胞肾脏病

转染腺相关病毒对骨髓间充质干细胞分化潜能的影响: 2008年; 目的:探讨转染腺相关病毒对骨髓间充质干细胞分化潜能的影响。方法:运用密度梯度离心法分离骨髓问充质干细胞;将pAAV-GFP、pAAV-RC、pHelper用磷酸钙法共转染HEK-293细胞,得到rAAV-GFP,转染骨髓间充质干细胞,进行成骨诱导分化,观察rAAV-GFP对骨髓间充质干细胞分化潜能的影响。结果:与未转染rAAV-GFP的间充质干细胞相比较,转染rAAV-GFP后,骨髓间充质干细胞分化潜能未见改变,均表现为细胞浆蓝紫色,核周明显。结论:转染腺相关病毒对骨髓间充质干细胞分化潜能未见明显影响,为基因修饰腺相关病毒转染骨髓间充质干细胞进行体内移植提供了实验基础。; 卫静袁发焕候卫平李芙蓉黄云剑; 关键词：间充质干细胞腺相关病毒分化潜能

BMP-7基因修饰的骨髓间充质干细胞在小鼠肾脏内的表达被引量：3: 2008年; 目的构建BMP-7基因腺相关病毒,转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),移植入小鼠体内,观察其在肾脏的定植情况。方法采用分子克隆技术,构建重组质粒pAAV-BMP-7。采用磷酸钙沉淀法,重组质粒与pAAV-RC、pHelper共转染HEK-293细胞,产生具有传染性的病毒颗粒。将此病毒颗粒转染BMSCs后,经尾静脉注射入小鼠体内,免疫组化方法检测其在肾脏的定植情况。结果成功构建了BMP-7基因腺相关病毒,可以高效转染BMSCs,移植入小鼠体内后,该细胞可在肾脏内定植。结论BMSCs能稳定、高效表达外源基因BMP-7,并可在肾脏内定植。; 卫静袁发焕周剑峰侯卫平李芙蓉黄云剑; 关键词：BMP-7 腺相关病毒骨髓间充质干细胞

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