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禽主要病毒感染的比较蛋白质组学研究进展被引量：1: 2011年; 比较蛋白质组学是蛋白质组学的一个重要分支,现已广泛应用于生命科学和医药学的各个领域,尤其在重大疾病研究、治疗和靶向药物的筛选方面得到了更为广泛的应用。比较蛋白质组学在兽医学领域研究的重点在于揭示病毒与宿主细胞的相互作用机制和病毒的分子致病机制,为动物病毒病的诊断、防控和新型疫苗的开发提供新的思路。本文从比较蛋白质组学的研究内容和主要研究技术、在兽医学研究中的应用以及在禽主要病毒感染中的研究进展进行综述。; 段志强王郁杨开妍胡顺林刘秀梵; 关键词：比较蛋白质组学蛋白质组学病毒感染

基于Z曲线的新城疫病毒基因组生物信息分析: 2010年; Z曲线是DNA序列信息的一种几何学表示形式。利用Z曲线坐标所对应的生物学含义,可以对DNA序列的生物信息进行系统分析。本文对40株自测序和从GenBank下载的新城疫病毒(NDV)全基因组序列,利用网络提供和自开发的Z曲线分析系统,对NDV生物信息进行了比较分析,构建了NDV全基因组的X、Y、Z分量沿序列的分布曲线和三维Z曲线,比较了不同基因型NDV基因组Z曲线的特征。结果显示,在NDV全基因组中A、G碱基或A、C碱基是占优势的,在基因组的前1/3序列中,G、C含量大于A、T的含量。不同基因型NDV全基因组的Z曲线(从ClassI到ClassII的I-VIII型)有向Z轴靠拢的趋势。; 曹永忠顾敏刘文博张小荣刘秀梵; 关键词：新城疫病毒 Z曲线分子进化

荧光定量RT-PCR检测H5亚型禽流感病毒方法的建立与验证被引量：5: 2011年; 根据H5亚型禽流感病毒HA基因上的保守序列,设计合成引物,以H5亚型禽流感病毒HA基因重组质粒为标准品绘制标准曲线,建立了荧光定量逆转录聚合酶链反应检测方法。结果表明,本试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.995,灵敏度约为8拷贝/μL,相当于8个AIV颗粒,对新城疫病毒和其他禽病病毒无交叉反应,特异性好、重复性佳,为H5亚型禽流感病毒检测提供了一种特异、敏感、快速、低成本、高通量、生物安全性好的定量检测方法。对178份临床泄殖腔棉拭子样品的检测,该方法结果与经典病毒分离方法符合率大于90.0%,在禽流感病毒临床样品快速筛检、流行病学监测等方面显示了良好的应用前景。; 曹军平陆桂平徐向明顾敏徐全刚刘武杰彭大新刘秀梵; 关键词：H5亚型禽流感病毒荧光定量RT-PCR

实时荧光定量RT-PCR方法检测禽流感病毒被引量：10: 2010年; 根据禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)M基因上的保守序列,合成引物和荧光标记探针,以阳性AIVM基因质粒为标准品做标准曲线,建立了荧光定量逆转录聚合酶链反应(RRT-PCR)检测方法。结果表明,本试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.999,灵敏度约为5拷贝/μL,相当于5个AIV颗粒,对新城疫病毒和其他禽病病毒无交叉反应,特异性好、重复性佳,为AIV检测提供了一种特异、敏感、快速的定量检测方法。对500份临床泄殖腔棉拭样品的检测,其结果阳性?阴性数与经典病毒分离方法符合率分别为91.2%?99.4%。在AIV临床样品筛检、流行病学监测等方面显示良好的应用前景。; 曹军平赵国顾敏彭宜张小荣彭大新刘秀梵; 关键词：禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR

Rescue and Preliminary Application of a Recombinant Newcastle Disease Virus Expressing Green Fluorescent Protein Gene: 2007年; 把 ZJI 紧张基于纽卡斯尔疾病病毒(NDV ) 的完全的染色体顺序，七份教材被设计为构造 plasmid pNDV/ZJI 放大 cDNA 碎片，它包含了 NDV ZJI 紧张的全身的 cDNA。与三助手 plasmids， pCIneoNP， pCIneoP 和 pCIneoL， pNDV/ZJI 当时是进表示 T7 RNA 聚合酶的 BSR-T7/5 房间的 cotransfected。在进受胎的鸡肉的 transfected 房间文化上层清液的接种以后，从 specific-pathogen-free (SPF ) 的鸡蛋结队，传染 NDV ZJI 紧张成功地被救。格林荧光灯蛋白质(GFP ) 基因被放大并且插入了到 NDV 全身的 cDNA 产生标注 GFP 的 recombinant plasmid pNDV/ZJIGFP。在进 BSR-T7/5 房间的结果的 plasmid 和三支持 plasmids 的 cotransfection 以后， recombinant NDV， NDV/ZJIGFP，被救。特定的绿荧光在 BSR-T7/5 和鸡胚胎成纤维细胞(CEF ) 房间 48h 被观察感染以后，显示 GFP 基因被表示在一相对高级。NDV/ZJIGFP 被 oculonasal 线路接种进 10-day-old SPF 鸡。四天感染以后的、强壮的绿荧光能在肾和 tracheae 被检测，显示标注 GFP 的 NDV 能是的 recombinant 为 NDV 传播和致病的分析的一个很有用的工具。关键词纽卡斯尔疾病病毒(NDV )- 格林荧光灯蛋白质(GFP )- 营救 - 表示 CLC 数字 S831.7 基础条款：给中国(No.30630048 ); Shun-lin HU Qin SUN Qu-zhi WANG Yu-liang LIU Yan-tao WU Xiu-fan LIU; 关键词：RESCUE

鸭源新城疫病毒P基因遗传变异分析被引量：2: 2009年; 为分析2002-2007年分离的鸭源弱毒新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）磷蛋白（P）基因的分子特征,以及在新城疫病毒演化过程中所起的作用,采用RT-PCR方法扩增NDV弱毒分离株的P基因,进行测序,并应用生物信息学软件（SNAP和CODEML）研究了作用于NDV P基因的选择压力。根据P基因序列的遗传发生分析表明,NDV I类（Class I）2型毒株与德国鸭源毒株DE/R49-99和美国株亲缘关系较近,而3b型毒株与其他I类病毒遗传关系较远,具有地区特色,形成一个独特的分支;NDV II类（Class II）中基因Ib型与中国广泛使用的基因I型疫苗毒Qeensland V4（QV4）以及I型代表株亲缘关系较远。生物信息学软件分析表明,P基因不同片段受到正选择压力的作用不一样,P基因的两端受到负选择压力的作用不易发生变异,而中间（aa62~113和137~198）片段多个位点受到正选择压力的作用。可见,I类病毒中3b具有地域特色,不同基因型P蛋白之间变异较大,而且P蛋白不同位置变异不均匀。; 刘晓文王晓泉吴双胡顺林刘秀梵; 关键词：新城疫病毒

鹅源新城疫病毒M蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定: 2011年; 为了筛选鹅源新城疫病毒(JS/5/05/Go)M蛋白与鸡胚成纤维细胞作用的靶蛋白,应用酵母双杂交技术构建M蛋白的诱饵载体pGBKT7-M。采用RT-PCR方法从鹅源新城疫病毒中扩增了M基因片段,将其克隆到pGEM-T载体中,经测序鉴定正确后,定向克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组诱饵载体转化酿酒酵母Y187,并验证其在酵母细胞中有无自激活和毒性作用。结果显示,成功构建了诱饵载体pGBKT7-M,并证明其对报告基因无自激活作用,且对酵母细胞无毒性。表明诱饵载体pGBKT7-M可用于酵母双杂交系统寻找与M蛋白相互作用的蛋白质。; 段志强王郁杨朱艳梅开妍胡顺林刘秀梵; 关键词：新城疫病毒 M蛋白酵母双杂交诱饵载体自激活作用

Establishment of a Real-time Fluorescent Quantitative RTPCR Method for Detecting NP Gene of Class Ⅰ Newcastle Disease Virus(NDV): 2018年; Newcastle disease( ND) is one of the most serious infectious diseases that infect the poultry industry.There is only one serotype of Newcastle disease virus( NDV),but NDVs can be divided into two distinct classes( class Ⅰ,and class Ⅱ) according to their genetic relationship.To develop a method for rapid quantitative detection of class Ⅰ NDV,a pair of primers and a TaqM an probe were designed and synthesized according to the conservative sequence of NP gene of class Ⅰ NDV.The positive recombinant plasmid harboring NP gene of JS-18-05 isolate was used as a positive template to establish the standard curve.A real-time fluorescent quantitative RT-PCR method was established for rapid detection of class Ⅰ NDV with strong specificity,high sensitivity and good repeatability.The established method exhibited a good linear relationship within the concentration of 102 to 108 copies of NDV,by which 1 μl of 10 copy of NDV nucleic acid could be detected in the initial template.Compared with conventional virus isolation methods,the established method had similar sensitivity and led to the same results in detecting33 class Ⅰ,class Ⅱ NDV isolates.The study provided the basis for rapid quantitative detection of class Ⅰ NDVs and further clarification of their pathogenicity and pathogenic mechanism in poultry.; Junping CAOXiaoquan WANGHan CHENGXiaowen LIUXiufan LIU; 关键词：CLASS NUCLEOCAPSID FLUORESCENT

新城疫病毒分离株的生物学特性鉴定及F蛋白基因序列分析被引量：12: 2009年; 通过部分生物学特性鉴定、RT-PCR及F基因的序列测定与遗传进化分析,对2005~2006年从我国江苏省和广西省部分地区的发病鸡群和鹅群中分离到的20株新城疫病毒(NDV)进行了研究。各分离株经典毒力测定结果显示:MDT在45.3h^58.2h之间,ICPI在1.61~2.00之间,均为新城疫病毒强毒株特征。血凝解脱及血凝素热稳定性试验显示:各分离株的血凝解脱时间短,血凝素热稳定性较差,符合NDV强毒株的特征。F基因的序列测定表明,分离株之间的核苷酸序列具有79.7%~100%的同源性,与疫苗株LaSota的同源性为78.1%~83.4%;与国内标准强毒株F48E8同源性为80.2%~90.1%。推导其氨基酸序列分析表明,各分离株的F蛋白的裂解位点氨基酸组成为112R-R-Q-R/K-R-F117,具有NDV强毒株特征,与毒力测定结果相符。根据序列所绘制系统进化发生树,表明20株NDV分离株中有18株为基因Ⅶd型,2株为基因Ⅲ型。; 姚春峰刘文博胡顺林马怀良薛峰刘慧谋刘秀梵; 关键词：新城疫病毒生物学特性 F基因

2006～2008年华东地区新城疫病毒HN基因序列分析被引量：2: 2010年; 为研究新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）的HN（血凝素-神经氨酸酶，hemagglutinin—neuraminidase）基因分子流行病学规律，利用RT—PCR扩增了2006～2008年间分离自我国华东地区的43株NDV的HN基因片段。基因序列分析显示，分离株中基因Ⅰ型2株，基因Ⅱ型3株，基因Ⅵ型1株，其它37株都属于基因Ⅶd亚型。根据遗传发生进化树可将基因Ⅶd亚型进一步分为Ⅶd1和Ⅶd2两个亚型，基因Ⅶd1亚型HN蛋白的第102、118、443位氨基酸分别为T，A和T，而基因Ⅶd2亚型则分别为I，E和M。另外，研究表明HN蛋白线性表位发生E347K突变的变异株的分离率在我国呈上升趋势。; 吴双胡增磊王伟伟王晓泉胡顺林刘秀梵; 关键词：新城疫病毒变异株

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