天津市高等学校科技发展基金计划项目(20040106)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
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- 发文基金：天津市高等学校科技发展基金计划项目国家自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
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- 葡萄糖转运的胰岛素敏感性以及forskolin,dipyridamole和pentobarbital对三种L6骨骼肌细胞葡萄糖转运的抑制作用
- 2007年
- 用稳定过表达并带有myc表位的葡萄糖转运子1(glucose transporter1,GLUT1)或葡萄糖转运子4(glucose transporter4,GLUT4)的L6骨骼肌细胞株定征GLUT1和GLUT4对胰岛素的响应.所筛选的L6-GLUT1myc细胞克隆分化前后的葡萄糖摄取量均在线性范围.100nmol/L胰岛素使L6-GLUT1myc和L6-GLUT4myc肌原细胞膜上GLUT1或GLUT4的量分别达到基础组的(1.58±0.01)倍和(1.96±0.11)倍,2-脱氧葡萄糖摄取量分别达到了(1.53±0.09)倍和(1.86±0.17)倍,此作用可被渥曼青霉素(wortmannin)抑制.胰岛素刺激了此2种细胞中的Akt磷酸化.L6-GLUT1myc肌原细胞的葡萄糖摄取量对胰岛素浓度呈剂量依赖性,但与野生型细胞相比,其对胰岛素的敏感性和最大响应没有改变.但L6-GLUT4myc肌原细胞的葡萄糖摄取量对胰岛素的敏感性和最大响应均增加.以前的研究提示毛喉素(forskolin)可能影响胰岛素刺激的GLUT4转位.本研究表明,在L6-GLUT4myc细胞中,毛喉素使胰岛素刺激的葡萄糖摄取减少了65%,此作用是由它对GLUT4的直接抑制而不是由其对GLUT4转位的影响造成的.毛喉素和dipyridamole对GLUT4比对GLUT1有更强的抑制作用,而戊巴比妥(pentobarbital)对GLUT1的抑制作用强于GLUT4.应用这些抑制剂的结果表明、L6肌原细胞中基础状态下和胰岛素刺激状态下的葡萄糖主要由过表达的GLUT1或GLUT4转运.因此,L6-GLUT1myc和L6-GLUT4myc细胞株为筛查对肌肉细胞GLUT1或GLUT4的活性或转位有不同作用的化合物提供了一个平台.
- 牛文彦Philip J BilanMichiko Hayashi笪宇蓉姚智
- 插入到细胞膜上的葡萄糖转运子4可不暴露其被光化学法标记的活性位点被引量：1
- 2006年
- 胰岛素刺激骨胳肌产生磷脂酰肌醇3,4,5三磷酸(PI(3,4,5)P3),它是促进葡萄糖转运子4(GLUT4)与细胞膜融合的必要条件.向肌肉细胞内导入PI(3,4,5)P3可以模拟胰岛素刺激GLUT4与细胞膜融合的作用,但不足以增加细胞摄取葡萄糖的量.本研究目的是探讨PI(3,4,5)P3与胰岛素作用不同的机制.在骨骼肌细胞株(L6-GLUT4myc)中,应用免疫反应方法检测细胞膜片上与特异性抗体反应的GLUT4的胞浆区羧基末端表位和胞外区myc表位的可用性;使用不能渗透到细胞内的甘露糖-生物素衍生物Bio-LC-ATB-BMPA,结合亲和光化学标记法检测GLUT4胞外区的活性位点.相对于基础组,100nmol/L胰岛素和10μmol/LPI(3,4,5)P3分别使与myc结合的抗体量增加1.64倍和1.58倍.胰岛素还使细胞膜上GLUT4的光化学标记量和细胞膜片上与羧基末端表位结合的抗体量分别增加了2.47倍和2.04倍,而PI(3,4,5)P3则无此作用.在胰岛素作用下,细胞膜片上与羧基末端表位结合的抗体量大于与myc表位结合的抗体量(分别为2.04和1.64倍).结果表明:(i)尽管PI(3,4,5)P3能使GLUT4与细胞膜融合,但不能使GLUT4胞外区的活性位点暴露;(ii)GLUT4胞外区活性位点的可用性与胞浆区羧基末端的可用性相关;(iii)除了能刺激GLUT4与细胞膜融合,胰岛素还使封闭GLUT4羧基末端的蛋白脱离.推论胞浆内某种蛋白封闭羧基末端,同样阻止甘露糖-生物素衍生物对GLUT4活性位点的标记,并可能妨碍GLUT4转运葡萄糖.
- 牛文彦Manabu IshikiPhilip J Bilan姚智
- 胰岛素调节骨骼肌细胞葡萄糖转运子4内在活性的研究被引量：2
- 2006年
- 目的探讨胰岛素刺激骨骼肌摄取葡萄糖的机制。方法观察GluT4转位和葡萄糖摄取对SB203580和Wortmannin的响应,以及胰岛素在分化前后的细胞中对两者的作用,研究胰岛素信号通路。结果胰岛素分别增加GluT4转位和葡萄糖摄取2.5±0.2倍和2.2±0.1倍;但t1/2不同,分别为3.3min和6.0min;且两者对Wortmannin的敏感性不同,IC50分别为43nmol/L和3nmol/L。SB203580分别抑制64%和62%胰岛素刺激的葡萄糖摄取和细胞膜上GluT4的标记,但不影响GluT4转位;胰岛素刺激前骨骼肌细胞葡萄糖摄取增加的倍数(1.7±0.1倍vs对照组)小于GluT4转位增加的倍数(2.3±0.1倍vs对照组)。结论成熟骨骼肌细胞中存在两个胰岛素信号转导途径,分别介导GluT4的转位和活化,胰岛素利用这两条信号通路达到最大的刺激细胞摄取葡萄糖的作用。
- 牛文彦姚智
- 关键词：葡萄糖转运子4葡萄糖摄取转位
- p38 MAPK及其抑制剂在胰岛素调节GLUT4活性中的作用被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及其抑制剂SB203580在胰岛素调节葡萄糖转运子4(GLUT4)活性机制中的作用。方法:分别测定胰岛素和SB203580孵育条件下骨骼肌细胞p38 MAPK的磷酸化水平和活性;检测p38 MAPK或SB203580是否与GLUT4直接结合;并测定SB203580对光化学标记细胞膜上的GLUT4的影响。结果:与胰岛素孵育0min时相比,100nmol/L胰岛素使p38 MAPK磷酸化水平增加,最大值为0min时的(2.43±0.21)倍;胰岛素还使p38α和p38βMAPK的活性分别增加了(10.13±0.48)和(7.92±2.17)倍;SB203580可抑制胰岛素的作用;p38 MAPK在体内不与GLUT4直接结合;SB203580仅抑制胰岛素刺激下的GLUT4光化学标记。结论:p38MAPK或SB203580不直接与GLUT4结合;对SB203580敏感的分子参与了胰岛素调节GLUT4活性的作用。
- 李敏刘琳娟姚智牛文彦
- 关键词：丝裂原激活蛋白激酶类骨骼胰岛素
