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人THAP11慢病毒载体的构建及表达研究被引量：2: 2010年; 目的构建人死亡相关蛋白11(THAP11)基因的慢病毒载体,并建立其慢病毒表达系统。方法 PCR方法获得人THAP11基因,限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒pBPLV-THAP11-myc,并通过转染HEK293细胞观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达以及Westernblot检测其表达。在脂质体介导下将重组质粒与包装质粒pLP1和pLP2、包膜质粒pLP/VSVG共转染293FT细胞包装产生慢病毒。结果构建的质粒经PCR,酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293FT细胞获取的5.5×106TU/ml慢病毒滴度。结论成功构建了人THAP11基因慢病毒载体质粒THAP11-myc-pBPLV,并建立了其慢病毒表达系统,为后续的应用研究奠定了基础。; 黄先红李长燕詹轶群王治东许望翔杨晓明汪思应; 关键词：质粒

新型GATA-1相互作用蛋白质及其在造血调控中的作用被引量：1: 2009年; GATA-1在造血干细胞的谱系分化中起关键的调控作用，为红系和巨核系发育成熟必不可少，对肥大细胞系及嗜酸性粒细胞系发育也有一定的调控作用。GATA-1的转录活性受到多层次的精确调节，其调控不同谱系分化的功能大多通过与不同的蛋白质相互作用来实施。近年来，多种新的GTAT-1相互作用蛋白质被确定，特别是GATA-1复合体的研究，揭示了GATA-1转录活性及其调控造血分化的新机制。; 丁亚丽李长燕杨晓明; 关键词：GATA-1

慢病毒颗粒包装、浓缩及对脐带血CD34^+细胞感染被引量：2: 2009年; 目的:建立慢病毒包装、浓缩及感染脐带血CD34+细胞的条件方法。方法:采用第3代慢病毒系统包装病毒上清,结合超滤和超速离心两种方法对病毒进行浓缩。联合应用体外扩增培养,促进静止期细胞进入细胞周期、感染过程中促进细胞黏附和固定及重复感染等方法促进病毒感染。结果:CD34+细胞体外培养48h,细胞表面CD34标志物表达水平没有明显改变,通过两步法浓缩后,病毒滴度可达5.06×107/ml,对脐带血CD34+细胞的感染效率可达37.7%。结论:通过上述方法可以获得滴度为107/ml以上的慢病毒上清,实现对脐带血CD34+细胞的有效感染。; 王治东葛常辉许望翔詹轶群李长燕曹萌萌董波杨晓明; 关键词：慢病毒感染脐带

NLK以激酶非依赖的方式抑制Smad4的转录活性: 2014年; 目的验证Nemo样激酶(NLK)与Smad4之间的相互作用并探讨NLK对Smad4功能的影响。方法应用免疫共沉淀和谷胱甘肽硫基转移酶(GST)沉降技术检测NLK与Smad4之间相互作用,GST沉降技术确定Smad4与NLK相互作用的结构域,荧光素酶报告基因实验检测NLK及NLK激酶活性突变体-NLK(KM)对Smad4转录活性的影响,体内磷酸化实验检测NLK对Smad4磷酸化的影响。结果免疫共沉淀和GST沉降的结果显示,NLK与Smad4在体内和体外存在相互作用。GST沉降的结果显示Smad4通过MH2结构域与NLK结合。荧光素酶报告基因实验的结果显示,NLK和NLK(KM)均可抑制Smad4的转录活性,且抑制程度相同。体内磷酸化的结果显示,NLK不能磷酸化Smad4。结论 NLK与Smad4相互作用,以激酶非依赖的方式抑制Smad4的转录活性,NLK抑制Smad4的分子机制有待进一步探讨。; 张力民李围杨晓明; 关键词：蛋白激酶 SMAD4 转录活性

酵母双杂交系统筛选GATA-1相互作用蛋白质及功能验证被引量：2: 2010年; 目的利用酵母双杂交技术从人脑cDNA文库中筛选与人GATA-1相互作用的蛋白质.方法从人K562细胞中扩增出全长GATA1基因,设计引物将其3段截断体亚克隆入酵母表达载体pDBLeu中,转化至AH109感受态酵母中,利用酵母双杂交技术筛选人脑cDNA文库中与其相互作用的蛋白质,阳性克隆通过回转及免疫共沉淀试验进行验证,利用3xGATA荧光素酶报告基因对相互作用蛋白质进行功能验证.结果成功构建出酵母诱饵蛋白表达质粒pDBLeu-GATA1（1）,pDBLeu-GATA1（2）,pDBLeu-GATA1（3）,筛到34个阳性克隆,用生物信息学分析及回转验证得到5个与GATA-1相互作用的候选蛋白,通过免疫共沉淀试验进一步验证,获得3个蛋白质能与GATA-1相互作用,分别是ECSIT,EFEMP1和GPS2.荧光素酶试验表明这3个蛋白质均能对GATA1的转录活性产生影响,证实它们之间的相互作用具有影响GATA1转录的功能.结论应用酵母双杂交技术及免疫共沉淀试验,从人脑cDNA文库中成功获得3个与GATA-1相互作用并对其转录活性具有调节作用的蛋白质,为研究GATA1蛋白质的功能提供了新的线索.; 冯志伟李长燕陈慧金超智唐刘君张卜兮原艳芝詹轶群王建杨晓明; 关键词：GATA-1 酵母双杂交蛋白质相互作用免疫共沉淀

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国家自然科学基金(30630035)