上海市自然科学基金(11ZR1430600)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：万延民徐建青胡志东任晓楠王婧更多>>
- 相关机构：复旦大学上海市公共卫生临床中心中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HIV-1B`/C、A／E重组亚型pol基因DNA疫苗的构建及其免疫原性研究被引量：1
- 2012年
- 目的构建表达中国BYC和A／E重组亚型HIV-1pol基因的DNA疫苗，并比较其免疫原性。方法按哺乳动物密码子使用频率对HIV-1CN54（BYC重组亚型）与AE2f（A／E重组亚型）的pol基因进行序列优化，构建DNA疫苗，通过Westernblotting验证其体外表达效率。通过肌肉注射途径免疫小鼠，然后无菌分离小鼠脾淋巴细胞并分别在ConsensusBPol和HIV-1AE2f Pol肽库刺激下，采用酶联免疫斑点技术（ELISPOT）检测抗原特异性IFN-γ的分泌情况，观察比较两个DNA疫苗免疫原性特征。结果DNA测序结果表明两个pol基因重组质粒构建正确，且两个DNA疫苗均能在体外有效表达。ConsensusBPol肽库刺激后，pSVAE—Pol活化的总T细胞免疫反应为（636±178）个斑点形成细胞数／10。个脾淋巴细胞，pSVCN—Pol活化的总T细胞免疫反应为（468±265）个斑点形成细胞数／10^6个脾淋巴细胞（P=0．412）；HIV-1 AE2fPol肽库刺激后，pSVAE—Pol活化的总T细胞免疫反应为（1378±611）个斑点形成细胞数／10^6个脾淋巴细胞，pSVCN—Pol活化的总T细胞免疫反应为（713±61）个斑点形成细胞数／10^6个脾淋巴细胞（P=0．134）。将总T细胞反应按肽池分解后发现，pSVAE—Pol活化的特异性T细胞反应主要集中于Pol 1肽池；而pSVCN—Pol除了能够活化针对Pol1的T细胞反应之外，也可以较好地活化针对ConsensusBPol2肽池的T细胞反应。结论两个亚型PolDNA疫苗中以AE-Pol的免疫原性更强，但其所活化的T细胞表位识别谱不及CN—Pol广泛。HIV-1疫苗可能需将两者结合在一起。
- 万延民任艳琴王婧任晓楠胡志东仇超徐建青
- 关键词：HIVT淋巴细胞
- HIV-1CN54膜抗原Gp145去糖基化修饰对其免疫效果的影响被引量：1
- 2013年
- 目的构建表达Ⅰ型艾滋病病毒(human immunodeficiency virus-1type,HIV-1)CN54膜蛋白Gp145去糖基化突变体的DNA疫苗和重组痘病毒疫苗,并对其进行抗原改造和免疫原性测试。方法采用分子生物学方法构建了表达HIV-1CN54膜蛋白Gp145或其突变体(Gp145dG,去除了V1/V2区的6个糖基化位点)的DNA疫苗(SV145、SV145dG)和重组痘病毒疫苗(rTTV145、rTTV145dG)。运用DNA初免-重组痘病毒疫苗加强的方式接种雌性BALB/c小鼠,免疫结束后,分别采用IFN-γ酶联免疫斑点技术(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)和酶联免疫吸附测定技术(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)对Gp145特异性细胞免疫反应和抗体反应进行检测。结果 SV145初免-rTTV145加强所活化的特异性T细胞反应强度为(1 949±1 307)斑点形成细胞数(spotforming cells,SFCs)/106个脾淋巴细胞,对数抗体滴度为(4.020±0.346);SV145dG初免-rTTV145dG加强所活化的特异性T细胞反应强度为(1 192±540)SFCs/106个脾淋巴细胞,对数抗体滴度为(3.300±0.298)。结论表达HIV-1CN54膜蛋白Gp145的DNA疫苗和重组痘病毒疫苗具有良好的免疫原性,去除V1/V2区的糖基化位点无助于提高其免疫原性。
- 冯晏萌万延民刘连兴张宁邵一鸣
- 关键词：HIV-1病毒包膜蛋白质类
- 表位竞争可削弱针对非优势表位的T细胞应答
- 2013年
- 目的阐明表位竞争对特异性T细胞应答强度和功能特征的影响。方法利用pSV—gag92和pSV-env203两个单表位DNA疫苗和pSV-gag／env融合基因疫苗免疫C57BL／6小鼠。免疫结束后，通过细胞内细胞因子染色的方法检测Gag92和Env203特异性T细胞反应，并比较其差异。结果pSV—gag92所活化的Gag92特异性IFN—γ＋CD8T细胞占总CD8T细胞比例[（0．41500±0．04588）％]显著高于pSV—gag／env[（0．05867±0．01964）％]。同时，我们发现pSV—gag／onv所活化的Gag92特异性TNF-α-—IFN-^γ’CD8T细胞平均荧光强度（296．70±14．08）显著低于Env203特异性TNF-（It—IFN-^γ＋CD8T细胞的平均荧光强度（818．00±49．34）。结论表位竞争能够显著降低针对非优势表位的T细胞反应频率和平均强度。
- 任晓楠任艳琴王婧胡志东万延民徐建青
- 关键词：T细胞反应
- 针对我国HIV-1流行株的AIDS疫苗研究策略与进展——国家传染病重大专项进展介绍
- 2013年
- 虽然RV144 AIDS疫苗临床试验观察到了部分保护效果,但远未达到临床应用的要求,其保护水平有待进一步提高。鉴于抗体反应和T细胞反应在抵抗和控制HIV-1感染过程中的重要作用,我们认为可以通过同时活化有效的抗体反应和T细胞反应来提升AIDS疫苗的保护效果。在国家传染病重大专项课题的资助下,本实验室设计了一套针对我国HIV-1流行株的AIDS疫苗策略,本文简要介绍我们的设计方案及主要研究进展。
- 万延民徐建青
- 关键词：疫苗获得性免疫缺陷综合征HIV-1
