广东省自然科学基金(5001708)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 替普瑞酮对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用
- 2008年
- 目的探讨替普瑞酮对。肾脏缺血再灌注损伤的保护作用和可能机制。方法应用替普瑞酮（400mg／kg）诱导雄性SD大鼠肾脏高表达热休克蛋白72（HSP72）。以钳夹大鼠左肾蒂45min后，松开血管夹并切除右肾，建立大鼠缺血再灌注肾脏损伤模型。假手术组为打开腹腔，分离肾血管周围组织，但不钳夹血管。模型建立后24h处死大鼠，留取血清测血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）。肾组织石蜡切片行PAS染色，以损伤肾小管所占百分比评分法评估肾组织肾小管损伤程度。TUNEL法检测缺血再灌注损伤时肾脏细胞凋亡的发生情况。Western印迹检测X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）的水平。结果缺血再灌注损伤可导致急性肾衰竭，表现为血Scr、BUN明显升高（P〈0．01）；PAS染色显示外髓部有大片肾小管坏死，甚至出现基底膜裸露；TUNEL染色中肾小管上皮细胞TUNEL阳性细胞数明显增多（P〈0．01）；Western印迹结果显示，肾组织XIAP蛋白水平明显降低（P〈0．01）。替普瑞酮处理后，肾组织HSP72表达水平明显增高（P〈0．01）；缺血再灌注所致的。肾脏损伤明显改善，包括肾小管的损伤、细胞凋亡以及‘肾功能。此外，替普瑞酮可稳定。肾组织XIAP的蛋白水平（P〈0．05）。结论替普瑞酮可诱导肾脏高表达HSP72。替普瑞酮可能通过减少肾脏XIAP蛋白的降解，抑制细胞凋亡，减轻缺血再灌注的肾脏损伤。
- 张白玉毛海萍陈崴李志坚李志莲安欣余学清
- 关键词：再灌注损伤热休克蛋白质类替普瑞酮肾小管上皮细胞
- 替普瑞酮对大鼠梗阻性肾病间质纤维化的影响被引量：2
- 2007年
- 目的探讨替普瑞酮（GGA）对大鼠梗阻性肾病模型（UUO）肾间质纤维化的影响和可能机制。方法15只SD大鼠随机分成3组：假手术组、UUO模型组和GGA治疗组，每组5只。从建立UUO模型前1d开始，GGA治疗组和模型组分别给予400mg／kgGGA和溶媒（0．05％阿拉伯树胶＋0．008％维生素E）灌胃，每天1次，术后第7天处死大鼠。常规染色观察肾脏组织病理改变。间接免疫荧光和Western印迹检测肾脏E-钙黏蛋白（E—cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的水平。TUNEL染色和PCNA免疫组织化学染色分别观察肾小管上皮细胞的凋亡和增生情况。结果GGA能诱导肾脏特异性高表达热休克蛋白72（HSP72）。与UUO模型组相比，GGA治疗组肾小管损伤和肾问质纤维化的程度明显减轻『肾小管损害百分比（48．7％±1．3％比65．8％±7．3％）；肾间质损害分值（0．40±0．08比1．36±0．50），P均〈0．05】；E—cadherin蛋白水平增加，α-SMA蛋白水平降低（P均〈0．05）；每高倍视野中TUNEL阳性和PCNA染色阳性的细胞数显著减少（分别为6．78±1．25比2．81±0．63，57．61±5．42比17．66±1．38，P均〈0．05）。结论GGA可能通过抑制肾小管上皮细胞的凋亡，延缓大鼠梗阻性肾病肾间质纤维化的进程。
- 李志莲周怡毛海萍陈崴李志坚安欣张白玉骆宁聂静余学清
- 关键词：替普瑞酮热休克蛋白72梗阻性肾病纤维化细胞凋亡
- Smac／Diablo与X-连锁凋亡抑制蛋白在ATP耗竭再恢复诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用被引量：1
- 2006年
- 目的研究线粒体蛋白Smac／Diablo和细胞X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在ATP耗竭及再恢复导致肾小管上皮细胞凋亡中的作用和机制。方法应用代谢抑制剂暂时性阻断人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)内ATP的生成,再换用含糖的培养液使细胞内ATP再恢复,诱导肾小管上皮细胞凋亡。应用Hoechst33342检测肾小管上皮细胞凋亡的发生。用间接免疫荧光检测Smac／Diablo在细胞内的分布。分别提取胞质蛋白和细胞总蛋白,以Western印迹检测胞质中Smac／Diablo、XIAP和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3前体(pro-caspase-3)的蛋白水平。结果肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时,Hoechst33342染色可见HK-2细胞核固缩和凋亡小体的形成;间接免疫荧光可见Smac／Diablo由线粒体释放至胞质;Western印迹可见胞质内Smac／Diablo的含量增多(P<0．01);XIAP和pro-caspase 3的蛋白水平降低(P<0．05)。结论肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时,Smac／Diablo释放至胞质,XIAP蛋白水平降低,进而激活caspase 3,介导肾小管上皮细胞凋亡。
- 张白玉毛海萍李志坚李志莲安欣尹培达余学清
- 关键词：凋亡SMAC/DIABLOX-连锁凋亡抑制蛋白肾小管上皮细胞腺苷三磷酸
- 肾小管上皮细胞ATP耗竭再恢复时热休克蛋白72与Paxillin的相互作用被引量：1
- 2006年
- 目的研究肾小管上皮细胞ATP耗竭再恢复时热休克蛋白(HSP)72与桩蛋白(Paxillin)的相互作用和意义。方法应用代谢抑制剂暂时性阻断肾小管上皮细胞ATP的生成,引起细胞内的ATP耗竭;换用含10 mmol／L葡萄糖的DMEM培养液,使细胞内ATP再恢复;以热处理细胞或编码HSP72 RNA的腺病毒感染细胞,诱导细胞高表达HSP72。Western印迹检测HSP72水平;间接免疫荧光和Western印迹检测Paxillin在细胞内的分布变化。免疫共沉淀观察HSP72与Paxillin的相互作用。结果肾小管上皮细胞ATP耗竭再恢复时,对照组细胞内的Paxillin由局部黏附结构区域向细胞浆内弥散分布;HSP72由细胞浆转移至细胞膜。细胞高表达HSP72后,HSP72在细胞浆和细胞膜中的蛋白含量均增加(P<0．05);Paxillin由细胞浆向细胞膜的转移明显减少(P<0．05);Paxillin在细胞内的正常分布改善;HSP72和Paxillin之间的相互作用显著增加(P<0．05)。结论肾小管上皮细胞ATP耗竭再恢复时,HSP72可保持Paxillin在细胞内的正常分布特点和区域,其机制可能是HSP72增加与Paxillin的相互作用,发挥分子伴侣的功能。
- 毛海萍李志坚余学清J.H.SchwartzS.C.Borkan汪一汗
- 关键词：热休克蛋白桩蛋白细胞骨架腺苷三磷酸肾小管
