国家自然科学基金(30470681)
- 作品数：5 被引量：16H指数：3
- 相关作者：张军李闻捷黄才国汪佳祺薛炼更多>>
- 相关机构：第二军医大学济南军区总医院成都军区昆明总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SD大鼠βB_2-晶体蛋白的克隆、表达与纯化被引量：1
- 2005年
- 目的 得到大量纯的βB2 -晶体蛋白,为研究其生物学特性及潜在的生理功能打下基础.方法 从SD大鼠晶状体中抽提总RNA ,用RT -PCR法克隆βB2 -晶体蛋白的cDNA ,装入原核表达载体pGEX - 4T - 1后用萘啶酮酸(IPTG)诱导表达;用GST纯化系统纯化并用蛋白水解酶对融合蛋白进行酶切.结果 βB2 -pGEX重组质粒经测序及限制性内切酶分析等鉴定,与预期结果一致;IPTG诱导后,蛋白质在大肠杆菌BL2 1中得到高效表达.纯化酶切后,经Westenblot方法验证,得到了高纯度的βB2 -晶体蛋白.结论 成功构建了βB2 -pGEX原核表达载体,高效表达了βB2-GST融合蛋白,经纯化和酶切得到了高纯度的βB2 -晶体蛋白,为进一步研究其生物学特性及潜在的生理功能打下基础.
- 刘梦蕾李闻捷蔡刚张燕张军
- 关键词：克隆纯化大肠杆菌
- βB2晶体蛋白基因敲除与小鼠年龄相关性白内障被引量：4
- 2009年
- 目的:研究βB2晶体蛋白基因敲除对于小鼠晶状体功能的影响。方法:采用胚胎干细胞打靶技术,培育出基因敲除小鼠。用裂隙灯显微镜观察小鼠晶状体的病变;透射和扫描电镜观察晶状体的超微结构;观察该基因敲除后晶状体形态和功能改变。结果:βB2晶体蛋白基因敲除后,新生的小鼠晶状体发育正常;随年龄增长,小鼠晶状体的质量、直径和正常小鼠比较明显减少;小鼠在生后数月内发生皮质性白内障,其程度随年龄增长而加重;电镜观察显示晶状体细胞纤维排列异常。结论:小鼠βB2晶体蛋白基因敲除导致年龄相关性白内障的发生。
- 薛炼姚雯颖张军高莉付清李闻捷
- 关键词：基因敲除白内障
- 二硫苏糖醇对大鼠硒性白内障的抑制作用被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨自行配制的二硫苏糖醇(DTT)滴眼液对SD大鼠硒性白内障(模拟老年性白内障)的抑制作用。方法:对出生后12d的SD乳鼠(约25g)行皮下注射Na_2SeO_3(0.2ml/次,隔天注射1次,共计3次,累计剂量约210μg),注射开始后6d,将发生硒性白内障大鼠左眼设为对照组,右眼作药物干预组,滴眼4次/d(分别滴入生理盐水及25mmol/L的DTT),每次1滴,持续用药3周;定时对大鼠双眼散瞳作裂隙灯检查,以游标尺测量大鼠眼晶状体核性斑块最大直径变化。另取硒性白内障乳鼠分别设为DTT(n=89)、吡诺克辛(PDE,n=22)及吡诺克辛钠(PSED,n=24)干预组及生理盐水对照组(n=45),分别使用25mmol/LDTT、日本产吡诺克辛滴眼液、国产吡诺克辛钠滴眼液。滴眼4次/d(同组乳鼠左、右眼滴相同的药物或生理盐水),每次每只眼1滴(约40μl),持续用药3周。定时散瞳后,用裂隙灯检查大鼠双眼皮质病变、混浊程度。结果:(1)DTT滴眼液可以明显抑制白内障大鼠晶状体核性混浊斑块的发展;(2)DTT滴眼液可以有效降低白内障大鼠晶状体伴发皮质混浊的发生率;(3)DTT滴眼液抗硒性白内障晶状体混浊的效果优于其他临床常用的抗老年性白内障药物PDE和PSED。结论:DTT滴眼液对SD大鼠硒性白内障具有良好的抑制作用。
- 彭亚军耿宇张军谢伯林李静李闻捷
- 关键词：二硫苏糖醇白内障硒
- βB2晶体蛋白基因敲除小鼠模型的建立被引量：8
- 2006年
- 目的:建立βB2晶体蛋白基因敲除小鼠模型。方法:采用美国iGTL实验室的技术构建打靶载体,建立基因敲除小鼠模型。采用PCR对小鼠基因型进行鉴定,Western印迹法对晶体蛋白的表达进行鉴定。结果:PCR成功检测出3种基因型;纯合子基因敲除的小鼠未检测到βB2晶体蛋白的表达。结论:成功构建了βB2晶体蛋白基因敲除的小鼠模型。
- 张军黄才国李闻捷Wei Weng汪佳祺
- 关键词：小鼠基因敲除
- 大鼠老化进程中晶状体蛋白水溶性向水不溶性的转变被引量：2
- 2007年
- 目的:研究大鼠老化进程中晶状体蛋白由水溶性向水不溶性的转变特性,探讨对老年性白内障形成的可能作用。方法:采用双向电泳法,分析SD大鼠在老化进程中不同阶段(出生后1,8d;2,8wk;8mo;1.5a)晶状体蛋白α,β,γ由水溶性向水不溶性的时相性转变特性。结果:各年龄组大鼠晶状体蛋白水溶性及水不溶性成分的双向电泳图谱模式有较大相似性。结构蛋白αA2,αB2,βB2随老化进程,其水溶性成分均呈升高趋势;水不溶性成分中αA2,βB2含量亦随年龄增长而升高,αB2在大鼠出生8mo后呈明显升高。晶状体蛋白自出生后8wk起,即发生明显的翻译后修饰(蛋白斑点增加),尤其伴侣蛋白αA2,αB2,同时也是结构蛋白)随老化其修饰成分增加十分明显,在水不溶性成分图谱中表现更为突出。出生后8wk前,βB2晶状体蛋白无论在水溶性或水不溶性成分中含量均极少;发育渐趋成熟该蛋白含量快速增加;出生8mo后成为晶状体蛋白中的主要成分,1.5a起成为含量最高的成分。结论:在大鼠老化进程中,不同晶状体蛋白其水溶性及水不溶性成分的变化趋势呈现不同特性。同种晶状体蛋白在不同年龄段存在量和/或质的变化。大鼠成长过程中晶状体蛋白变性显见于出生后8wk,其程度随老化而加重。
- 黄才国张军李闻捷毛积芳
- 关键词：晶状体蛋白水溶性水不溶性
