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北京市自然科学基金(5063040)

作品数：3 被引量：3H指数：1
相关作者：刘福生柴奇金贵善苏伟朱贵东更多>>
相关机构：首都医科大学附属北京天坛医院北京市神经外科科研究所更多>>
发文基金：北京市自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 3篇中文期刊文章

领域

  • 3篇医药卫生

主题

  • 3篇细胞
  • 3篇慢病毒
  • 3篇慢病毒载体
  • 3篇病毒载体
  • 2篇神经干
  • 2篇神经干细胞
  • 2篇胶质
  • 2篇胶质瘤
  • 2篇胶质瘤细胞
  • 2篇干细胞
  • 2篇C6胶质瘤
  • 2篇C6胶质瘤细...
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  • 1篇荧光蛋白
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  • 1篇生物学特性
  • 1篇生物学特性观...

机构

  • 2篇首都医科大学...
  • 1篇北京市神经外...

作者

  • 3篇金贵善
  • 3篇柴奇
  • 3篇刘福生
  • 2篇朱贵东
  • 2篇苏伟
  • 1篇车树圣
  • 1篇王建交

传媒

  • 3篇中华神经外科...

年份

  • 2篇2009
  • 1篇2007
共 3 条 记 录，以下是 1-3
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排序方式：
慢病毒介导的稳定表达绿色荧光蛋白的C6胶质瘤细胞株的建立及其生物学特性观察被引量：2
2007年
目的建立稳定表达绿色荧光蛋白(EGFP)的C6胶质瘤细胞株。方法用含有CMV和EF1α两个启动子的慢病毒转染C6细胞,经流式细胞仪进行克隆筛选,荧光显微镜下观察EGFP阳性细胞,PCR及DNA测序鉴定基因组中EGFP的整合,并通过形态学检查、细胞增殖能力测定及致瘤性评价等进行了转染C6细胞的生物学特性分析。结果慢病毒转染率高达40%;通过流式细胞仪筛选,建立了一种稳定、长期表达EGFP的C6/EGFP细胞株;PCR及DNA测序证实EGFP基因已成功整合入C6细胞;生物学特性分析表明转染前后的C6细胞没有明显改变。结论以EGFP为生物标记物的C6/EGFP细胞株成功建立,可为将来研究脑胶质瘤提供理想的材料。
金贵善刘福生柴奇王建交车树圣
关键词：慢病毒载体增强型绿色荧光蛋白C6胶质瘤细胞
VP22修饰的CD基因工程化神经干细胞治疗大鼠C6脑胶质瘤体外实验研究
2009年
目的探讨病毒蛋白VP22在胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase，cD）基因工程化神经干细胞治疗大鼠C6胶质瘤中的作用。方法质粒pAdTrack-CMV-CD中PCR获取CD片段，克隆到慢病毒（1entivims）质粒pHIV-EGFP和pHIV-VP22-EGFP载体上，获得重组质粒pHIV—CD—EGFP和pHIV—VP22-CD—EGFP，采用酶切和PCR技术进行鉴定。病毒包装采用三质粒系统共同转染293T细胞。CD基因的表达采用逆转录一聚合酶链式反应（RT—PCR）方法鉴定。Lentivirus-EGFP、lentivirus-CD-EGFP、lentivirus-VP22-EGFP和lentivirus—VP22-CD-EGFP四种慢病毒感染经体外原代培养、扩增的sD大鼠胎脑神经干细胞（Nerualstem cells，NSCs），体外与C6细胞按1：1比例共培养，并加入终浓度100mg／L的5-氟胞嘧啶（5-FC）培养3d后，MTT比色法测定细胞存活率。结果酶切和PCR证实，重组的慢病毒中含有CD基因。慢病毒lentivims-EGFP、lentivims—CD—EGFP、lentivirus—VP22-EGFP和lentivirus—VP22-CD—EGFP分别感染NSCs后与C6细胞共培养，在5-FC作用下，其细胞存活率分别为（95．57±4．83）％，（49．96±7．19）％，（94．254-4．32）％和（28．064-6．26）％。统计学处理，转染lentivirus—CD—EGFP和lentivirus—VP22-CD—EGFP组的细胞存活率明显低于其相应对照组lentivirus—EGFP和lentivirus—VP22-EGFP（P〈0．01）；其中转染lentivirus-VP22-EGFP组的细胞存活率又明显低于lentivirus-EGFP组（P〈0．01）。结论VP22能够在体外增强CD基因修饰的NSCs抗C6胶质瘤疗效。
金贵善刘福生柴奇苏伟朱贵东
关键词：慢病毒载体神经干细胞C6胶质瘤细胞
慢病毒载体VP22-EGFP的构建及其对大鼠神经干细胞转染及表达的研究被引量：1
2009年
目的研究VP22穿梭蛋白对神经干细胞（neural stem cell，NSC）转染效率的影响。方法通过酶切质粒pUIA9ep获得VP2：片段后克隆到含有增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）的慢病毒（Lentivirus）pHIV-EGFP质粒载体上，并采用PCR及基因测序技术对VP22基因进行鉴定。病毒包装采用三质粒系统共转染293T细胞后感染经体外原代培养、扩增的SD大鼠胎脑NSC，荧光显微镜下观察EGFP在NSC中的表达，流式细胞仪检测EGFP的表达，PCR检测基因组中VP22-EGFP基因的表达，MTT法测定转染前后单纯NSC、含有EGFP及含有VP22-EGFP的NSC的增殖活性。结果PCR和DNA测序证实，外源基因VP22成功插入到质粒载体pHIV—EGFP的骨架结构中的启动子CMV和EGFP序列之间；荧光显微镜下均见有绿色荧光蛋白的表达；流式细胞仪测定结果：Lentivirus-EGFP及Lentivims-VP22-EGFP转染的NSC的EGFP的表达率分别为（23．1±1．8）％及（34．9±2．9）％（P〈0．01）；PCR结果显示VP22整合入NSC的基因组DNA中；MTr结果显示转染前后单纯NSC、含有EGFP及含有VP22-EGFP的NSC的细胞生长曲线无明显改变。结论VP22能够提高慢病毒对NSC的转染效率，且不影响其生长特性。表明VP22作为一种短链蛋白可以与编码的治疗基因形成融合蛋白增强基因治疗的疗效，在基因修饰的工程化干细胞中具有良好应用前景。
金贵善刘福生柴奇苏伟朱贵东
关键词：慢病毒载体转染效率神经干细胞
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