国家教育部博士点基金(20104433120015)
- 作品数：3 被引量：20H指数：2
- 相关作者：范宏英龙北国姜容曾桂芬吴娴波更多>>
- 相关机构：南方医科大学中国人民解放军第一八一医院中国人民解放军更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金广州市科技计划项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- GⅡ.4型诺如病毒GZ121株P蛋白的表达及其结合HBGA受体特征被引量：1
- 2013年
- 目的建立我国流行优势株GⅡ-4型诺如病毒（GZ121）P蛋白（包括P颗粒和P二聚体）的原核表达系统，并明确其结合HBGAs受体的能力和方式。方法从GⅡ．4型诺如病毒GZ121株基因组中克隆P区域基因片段，通过构建P区域氨基酸序列进化树，确定其基因簇。构建含铰链Hinge-P和不含铰链P-CDCRGDCFC的pGEX-4T-1原核表达质粒，将构建的原核表达载体导入大肠杆菌（Ecoli）BL21，用0．6mmol／LIPTG（isoProPyhhio-β-D-galaetoside）过夜诱导P颗粒（不含铰链）和P二聚体（含铰链）在B1221中表达。目的重组蛋白经溶血酶酶切和FPLC鉴定分析，用EIA法检测P颗粒和P二聚体与HBGAs的结合特征。结果GZl21株诺如病毒为GⅡ．4基因型2004簇（GⅡ．4／2004cluster）。SDS．PAGE分析确定P颗粒和P二聚体相对分子质量（Mr）约为36×10^3，大小与报道相符。重组P颗粒经FPLC证实，其在M，约为830×10^3处形成特异的P颗粒波峰，Westernblot技术证实了重组P蛋白的特异性。EIA分析结果表明，GZ121株P蛋白与A、B、O型唾液均能结合，与非分泌型唾液不结合，而P颗粒结合HBGAs受体能力是P二聚体的80～100倍，与96簇VA387P颗粒相比，其结合O型能力增强，而结合A型能力稍弱。结论我国优势流行株GII．4型诺如病毒P蛋白的表达成功及其与HBGAs受体结合模型的建立，为今后研究我国诺如病毒的流行进化规律及疫苗的开发研究奠定了实验基础。
- 张绪富吴娴波戴迎春
- 关键词：诺如病毒原核表达系统
- LAMP和PCR法检测痢疾志贺菌的特异性和灵敏性比较被引量：15
- 2012年
- 目的建立环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测痢疾志贺菌,并对其特异性、灵敏度与传统PCR进行比较。方法以痢疾志贺菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)为靶序列,设计6条特异性引物(内引物、外引物和环引物各2条),优化LAMP反应体系及反应条件,检测LAMP反应的灵敏度、特异性及模拟样品,同步与PCR进行比较。结果 LAMP法和PCR均能特异性地扩增出志贺菌靶DNA,而其他非志贺菌均未扩增出特有条带。检测细菌纯培养物和模拟食品的灵敏度LAMP法分别为5.3×101cfu/ml、6.8×101cfu/ml,PCR法分别为5.3×102cfu/ml和6.8×102cfu/ml。结论利用LAMP技术,可快速、灵敏、简便地检测痢疾志贺菌,与PCR方法比较,特异性强、操作简便、检测成本低、耗时短,有望发展成为快速检测痢疾志贺菌的有效手段。
- 曾桂芬龙北国姜容刘行超廖韫婕范宏英
- 关键词：环介导等温扩增技术痢疾志贺菌IPAH基因
- 检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7的环介导等温扩增和PCR法比较被引量：7
- 2012年
- 目的建立基于环介导等温扩增(LAMP)技术的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7快速简便检测方法,并与PCR进行比较。方法针对EHEC O157:H7保守的rfbE基因序列,设计特异性引物,建立LAMP和PCR检测技术并优化其反应条件,比较这两种检测方法的灵敏度、特异性和对实际样品的检测结果。结果成功建立了LAMP和PCR检测体系,灵敏度检测结果显示,LAMP检测限低至10 cfu/ml,PCR检测限为102cfu/ml,LAMP检测灵敏度高于PCR;对39株近源菌进行检测,结果显示,LAMP法仅7株EHEC O157:H7得到阳性结果,非EHEC O157:H7菌株均为阴性,PCR产物则出现非特异性条带,LAMP法特异性比PCR法高。对于32份猪肉样品的检测,LAMP和PCR与常规检测结果一致,3份样品检测阳性。结论 LAMP检测技术的特异性和灵敏度较PCR高,并且操作简便、检测成本低,耗时短,更有望发展成为快速准确检测EHEC O157:H7的有效手段。
- 姜容龙北国曾桂芬王丹范宏英吴娴波
- 关键词：肠出血性大肠埃希菌O157:H7环介导等温扩增技术PCR技术
