国家自然科学基金(31370875)
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- 人清道夫受体A胞外段的原核表达
- 2014年
- 目的获得具有生物学活性的人清道夫受体A(SRA)胞外段蛋白。方法从人外周血单个核细胞(PBMC)中提取RNA,逆转录为cDNA,采用PCR技术从PBMC-cDNA中扩增出目的基因片段,将其克隆至原核表达载体pET41a(+),经PCR、限制性酶切和测序确证后,以IPTG诱导其在大肠杆菌中的表达。包涵体经变性、复性后以Ni-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,以SDS-PAGE、Western blotting进行分析鉴定。FCM及ELISA方法检测SRA胞外段对Con A诱导PBMC细胞增殖及分泌细胞因子IL-2的影响。结果 PCR扩增得到长约1 100 bp的目的基因片段,插入pET41a(+)载体所获重组表达载体pET41a-SRAECD的酶切图谱和序列与预期的一致。重组子经诱导表达,表达产物主要以包涵体形式存在。以Ni-NTA亲和层析柱纯化获得约75 000 Mr的SRA胞外段融合蛋白。纯化的人SRAECD蛋白能与抗人SRA单克隆抗体特异性结合并具有活性,可抑制T细胞增殖及细胞因子IL-2的分泌。结论获得了具有生物学活性的人SRA胞外段蛋白,为进一步探索SRA的效应功能提供了实验材料。
- 陈莺马迪卢晓左大明陈政良
- 关键词：清道夫受体A胞外段原核表达T淋巴细胞
