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胸部肿瘤放射治疗不同体位固定技术摆位误差分析研究被引量：6: 2014年; 目的探讨两种不同体位固定技术在胸部肿瘤放射治疗中的摆位误差，分析并比较其摆位准确性。方法选择本院2011年12月至2013年6月64例胸部肿瘤患者，所有患者均接受放射治疗。按随机数字表法将患者均分为两组，每组32例。低温热塑体膜组采用热塑体膜方法固定体位，真空负压袋组则采用真空负压袋法固定体位。对比分析两组在左右方向（X轴）、前后方向（Z轴）、头足方向（Y轴）和三维方向（I）上的摆位误差。结果低温热塑体膜组可显著降低前后方向的摆位误差（1．13±0．33VS2．33±1．24，P＜0．05），两组在左右、头足和三维方向摆位误差比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论低温热塑体膜固定技术有助于降低胸部肿瘤放射治疗体位的固定，减少前后方向的摆位误差，提高了其摆位的精准度。; 王如芹高振东孙国超周鹏云; 关键词：胸部肿瘤放射疗法体位

抗CD5单链抗体的基因构建、蛋白纯化及活性鉴定: 2011年; 目的构建高表达的抗CD5单链抗体(scFv anti-CD5)工程菌,为开展以抗CD5单链抗体为构件的肿瘤免疫治疗研究奠定基础。方法从Genbank中获得抗CD5单克隆抗体H65的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的基因序列,用连接肽的编码序列连接,用重叠PCR技术获得目的基因,酶切后插入pET22b(+)构成重组质粒。测序正确的重组质粒转入E.coliBL21(DE3)诱导表达,产物经Ni-NTA柱纯化后复性,流式细胞术和Western blot-ting检测活性。结果获得序列正确的重组质粒,工程菌表达量高,产物复性后具有识别CD5抗原的活性。结论成功构建了高表达scFv anti-CD5的工程菌,为scFv anti-CD5的应用奠定了基础。; 林晓思许健王生育颜江华; 关键词：CD5 单链抗体基因

靶向Neuropilin-1的抗肿瘤研究进展被引量：3: 2012年; Neuropilin-1(NRP-1)又称神经鞭毛素蛋白,是一个大小为130～140 kD的非酪氨酸激酶跨膜蛋白,参与脊椎动物胚胎的神经和心血管系统发育。它作为一个多功能受体调节VEGF(血管内皮生长因子),PDGF(血小板衍生生长因子),bFGF(成纤维生长因子)等细胞因子的信号通路,与肿瘤血管新生和肿瘤转移密切相关。NRP-1被认为是一个新的肿瘤治疗靶点,近年来针对NRP-1为靶点的药物研究有不少新进展。本文主要介绍NRP-1的生物学特征,对肿瘤作用以及相关药物研究。; 曾凡伟曹畅吕莎颜江华罗芳洪; 关键词：NEUROPILIN-1 癌症靶点信号通路

CREKA/tTF融合蛋白表达及活性鉴定被引量：1: 2010年; 目的制备用于靶向肿瘤血管中的凝血血浆蛋白的CREKA/tTF融合蛋白,并鉴定其生物学活性。方法利用PCR技术构建CREKA与tTF的融合基因,克隆至表达载体pET22b(+),在E.coli BL21中表达,镍亲和色谱柱纯化,梯度透析复性。利用凝血时间,结合荧光定量测定等实验在体外鉴定该融合蛋白的活性。结果获得序列正确的CREKA/tTF/pET22b(+)重组子,融合蛋白在E.coli BL21中高效表达。纯化后的融合蛋白具有引起血液凝固的功能,且能与凝血血浆蛋白结合。结论成功构建CREKA/tTF/pET22b(+)重组子,CREKA/tTF融合蛋白具有TF凝血活性及CREKA的结合活性。; 苏毅颜江华王生育何杰叶民; 关键词：TTF 肿瘤血管靶向融合蛋白

抗人NRP-1单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞株的促凋亡作用: 2014年; 目的:研究抗人神经菌毛素1(neuropilin1,NRP-1)单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞的促凋亡作用。方法:小鼠腹水法制备抗NRP-1单克隆抗体(NRP-1 MAb)并用rProtein A亲和柱纯化,间接ELISA检测抗体的滴度水平。细胞免疫荧光检测NRP-1蛋白在结肠癌细胞株LOVO上的表达,MTT法检测NRP-1 MAb对LOVO的生长抑制作用,DAPI荧光显微镜法观察细胞凋亡形态,ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测NRP-1 MAb诱导LOVO细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase-3、cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:SDS-PAGE和间接ELISA检测纯化的NRP-1 MAb纯度为95%、效价为2.56×10-5;细胞免疫荧光染色显示NRP-1定位于LOVO细胞膜;MTT法检测和ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测结果显示,NRP-1 MAb对LOVO细胞有生长抑制作用和促凋亡作用;DAPI染色·荧光显微镜观察发现,NRP-1MAb可以诱导LOVO细胞核浓缩与碎裂;Western blotting检测到在NRP-1 MAb作用下,LOVO细胞裂解液cleaved caspase-3条带信号增强、caspase-3条带信号减弱。结论:纯化的NRP1 MAb能抑制LOVO细胞的生长并诱导其凋亡。; 曹畅吕莎李哲王显江杨云罗芳洪王生育颜江华史涛; 关键词：单克隆抗体 LOVO细胞株促凋亡作用

抗人NRP1单克隆抗体的活性鉴定及初步应用被引量：6: 2012年; 目的鉴定抗人神经菌毛素1(neuropilin1,NRP1)单克隆抗体的生物活性并利用该抗体检测常见肿瘤细胞株NRP1蛋白的表达情况。方法腹水法制备4株抗NRP1单克隆抗体并用rProtein A亲和柱纯化抗体,间接ELISA检测4株抗体的滴度水平,Western blot分析4株抗体结合NRP1蛋白的特异性,流式细胞术分析4株抗体结合NRP1蛋白的亲和力,共聚焦免疫荧光实验进一步验证抗体结合NRP1蛋白的能力;细胞免疫组织化学染色检测14株肿瘤细胞表达NRP1蛋白的情况。结果 4株抗体均能特异结合NRP1蛋白,其中A6结合NRP1能力最强,能结合在表达NRP1蛋白的细胞膜表面。细胞免疫组织化学染色结果显示NRP1在HepG2、C6、HEK293、BEL-7402、MDA-MB-453呈高水平表达,在U87、MGC803、MCF7、MDA-MB-231中表达水平相对较弱,而在U251、BGC823、H6、HT-29的表达介于两者之间,在SMMC-7721细胞中未检测到表达。结论 4株抗NRP1单克隆抗体均能特异结合NRP1蛋白,多种肿瘤细胞株均不同程度表达NRP1蛋白,为进一步探讨NRP1蛋白与肿瘤发生发展的关系奠定了基础。; 倪二茹曾凡伟王生育曹畅吕莎张海鹏颜江华; 关键词：NRP1 单克隆抗体特异性免疫细胞化学染色

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国家自然科学基金(30973485)