中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(0032007023)
- 作品数：4 被引量：50H指数：3
- 相关作者：杨爱国王元英陈帅刘贯山罗成刚更多>>
- 相关机构：中国农业科学院烟草研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家烟草专卖局基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用正交设计优化烟草SRAP反应体系被引量：39
- 2008年
- 利用正交设计L16(45)对烟草SRAP-PCR反应体系的五因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)在四个水平上进行优化试验,PCR结果用统计软件SPSSV13.0分析,得出如下结论:各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中Taq酶量影响最大;筛选出各反应因素的最佳水平,建立烟草SRAP-PCR反应的最佳体系(25μL)为:Taq酶1.0U,Mg2+1.5mmol/L,模板DNA30.00￣120.00ng,dNTP0.1mmol/L,引物0.40μmol/L。最后,应用烟草SRAP-PCR最佳反应体系对PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了筛选,得出SRAP-PCR扩增以52℃退火温度、35个循环次数为最佳。这一优化系统的建立为今后利用SRAP标记技术对烟草进行基础研究提供了一个标准化的程序。
- 陈万胜王元英罗成刚杨爱国蒋彩虹范静苑
- 关键词：烟草SRAP正交设计
- 受PVY诱导的烟草NtERD1的基因分离与表达分析被引量：5
- 2010年
- 通过抑制差减杂交和cDNA芯片法从受PVY诱导的烟草抑制差减杂交文库中筛选得到一段长为745 bp的基因EST片段,经Blast同源性比对分析,该序列与植物脱水诱导早期应答基因(ERD)在核苷酸和氨基酸水平上高度同源。ORfinder分析表明,该序列包含一个492 bp的开放读码框,编码163个氨基酸。氨基酸Blastp比对显示,该氨基酸序列与其他植物脱水诱导早期应答蛋白具有很高的同源性。所以筛选得到的这个新基因属于烟草脱水诱导早期应答基因,被命名为NtERD1(GenBank登录号为GU144573)。实时荧光定量PCR分析表明,NtERD1在PVY接种早期上调表达,因此NtERD1受PVY侵染诱导,可能对烟草抗病毒具有重要作用。
- 陈帅刘贯山杨爱国王元英孙玉合
- 关键词：烟草实时荧光定量PCRPVY
- 烟草抗马铃薯Y病毒病相关基因NtPsaN的克隆及表达分析被引量：7
- 2010年
- 【目的】从高抗PVY烟草品种VAM中克隆抗病相关基因,分析该基因的序列特征、进化关系和表达特性,研究其在烟草抗PVY防御反应中的作用,为培育抗PVY烟草新品种奠定基础。【方法】利用SSH结合cDNA芯片筛选出来的病害诱导特异表达基因片段,通过RACE技术克隆烟草抗病相关基因;生物信息学分析该基因保守结构域以及序列特征;采用MEGA4.0软件构建系统进化树;利用实时荧光定量RT-PCR技术研究该基因的表达特性。【结果】克隆了1个烟草抗病相关基因,命名为NtPsaN,该基因具有PsaN基因家族保守结构域,OFR长度507bp,编码168个氨基酸;构建了PsaN亚基系统进化树;实时荧光定量RT-PCR结果显示接毒之后该基因表达与不接毒对照相比有明显上调趋势。【结论】克隆得到一个烟草PVY抗病相关基因NtPsaN,其表达受PVY侵染诱导,该基因可能在烟草抵御PVY病害侵染过程中起重要作用。
- 周佳李凤霞陈帅罗成刚刘贯山蒋彩虹杨爱国苏振刚王元英
- 关键词：PVY进化树基因表达
- 受PVY诱导的烟草天冬氨酸蛋白酶基因Ntasp的克隆与分析被引量：3
- 2010年
- 【目的】通过筛选并克隆烟草抗马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)相关基因,分析其在不同诱导时间的相对表达量,揭示烟草抗病毒诱导的分子机理,以期为烟草抗病毒病育种奠定基础。【方法】通过抑制差减杂交和cDNA芯片从PVY诱导的抑制差减杂交文库中筛选上调表达(Ratio>2)的基因中间片段,用RACE技术克隆其cDNA全长,并利用实时荧光定量PCR分析其在不同诱导时期的相对表达量。【结果】从受PVY诱导的烟草叶片中筛选一条595bp的基因中间片段并克隆得到一个全长为1770bp的天冬氨酸蛋白酶基因Ntasp(GenBank登录号为GU144571),该基因编码506个氨基酸。多序列比对结果显示,该基因的编码产物与其它植物天冬氨酸蛋白酶家族成员具有高度的同源性,具有植物天冬氨酸蛋白酶典型的结构特征。实时荧光定量PCR分析表明,Ntasp在PVY接种早期上调表达。【结论】克隆得到一个烟草天冬氨酸蛋白酶基因Ntasp,其表达受PVY侵染诱导。
- 陈帅刘贯山周佳杨爱国王元英孙玉合
- 关键词：烟草天冬氨酸蛋白酶RACE马铃薯Y病毒
