国家重点基础研究发展计划(001CB1089-06)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 相关作者：王耀萍王煌平周会娜赵颖黄巨富更多>>
- 相关机构：中国科学院中国科学院植物研究所福建师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学理学更多>>
- 固氮酶CrFe蛋白和MnFe蛋白的空间晶体生长(英文)被引量：2
- 2003年
- 从分别生长于含Mn和Cr培养基中的棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii Lipmann)突变种UW3分离纯化出MnFe和CrFe蛋白。为适应包括固氮酶在内的氧敏感蛋白的空间晶体生长的要求,应用简易而适用的厌氧加样装置代替固氮酶实验室所用的笨重厌氧箱(dry box),在地面进行厌氧加样。在充满氮气的简便有机玻璃箱内厌氧加样的所有样品中,分别用液/液扩散法和汽相扩散的坐滴法都可在一周内使MnFe和CrFe蛋白在宇宙飞船上从溶液中结晶出来。在所用的数种蛋白沉淀剂中,飞船上形成的所有晶体都为单晶,而地面上在多数沉淀剂中都生成大量孪晶。在相同沉淀剂中用液/液扩散法,飞船上生成CrFe蛋白的最大晶体比地面生成的最大晶体大1倍。而在相同沉淀剂中用汽相扩散的坐滴法,飞船上生成的MnFe蛋白最大晶体却没有地面生成的最大晶体大。这种差异也许是由不同结晶方法而不是不同蛋白所引起的。
- 赵颖赵剑峰吕玉兵黄巨富王耀萍仓怀兴毕汝昌
- 关键词：固氮酶棕色固氮菌
- 缺失nifZ棕色固氮菌突变株(DJ194)钼铁蛋白的金属原子簇的组成与分布被引量：1
- 2005年
- 经DEAE 52, Q-Sepharose和Sephacryl S-200柱的厌氧层析, 从缺失nifZ基因的棕色固氮菌突变株(DJ194)中纯化得到固氮酶钼铁蛋白(ΔnifZ Av1). 厌氧天然电泳后的Western blotting和SDS-变性凝胶电泳显示, ΔnifZ Av1的电泳迁移率、分子量和亚基组成等与野生种钼铁蛋白(OP Av1)相似; 而且ΔnifZ Av1的Mo含量、EPR信号(g ≈ 4.3, 3.65和2.01)及660 nm附近的圆二色摩尔消光系数(Δε)也都与OP Av1较相似, 表明ΔnifZ Av1除具有α2β2四聚体结构组成外, 还含有与OP Av1数量相当的、具有3/2自旋态的还原FeMoco. 然而, ΔnifZ Av1的Fe含量和对底物 (C2H2, H+和N2)的还原活性都较低, 分别约为OP Av1的74%和46%～50%, 而反映P-cluster状况的450 nm附近的Δε也明显低于OP Av1, 说明ΔnifZ Av1与OP Av1的差别在于P-cluster, 而不在于FeMoco, 而且是在于ΔnifZ Av1中P-cluster数目的减少(约50%), 而其组成或氧还状态并未改变. 据此推测ΔnifZ Av1(DJ194)的结构为: 一个αβ亚基对含有一个FeMoco和一个P-cluster, 而另一个αβ亚基对只含FeMoco, 无P-cluster. 由于nifZ基因的缺失只造成了钼铁蛋白中2个P-cluster中的一个不能组装, 因此推测P-cluster的组装可能不是受单一基因产物的影响并由此提出了NifZ的可能作用机理.
- 周会娜张纯喜赵颖赵颖边少敏王煌平任飞
- 关键词：棕色固氮菌钼铁蛋白突变株金属原子簇圆二色自旋态
- 棕色固氮菌突变种UW45的固氮酶钼铁蛋白(NifB-Av1)结晶(英文)被引量：1
- 2003年
- 经两次DE52和Sephacryl S-300柱层析,从棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii Lipmann)突变种UW45粗提液(37 677 mg蛋白)中纯化得到628 mg的NifB^-Av1。经考马斯亮蓝R-250染色的SDS凝胶电泳分析表明,该蛋白基本达到SDS凝胶电泳纯,组成它的亚单位的种类与Av1(α和β亚单位)相似。NifB^-Av1不能与NifB^-Av2重组成具放氢活性的固氮酶,但可使与其保温重组的FeMoco显出高活性。在合适条件下,NifB^-Av1可在结晶溶液中析出棕色短斜四棱柱晶体,目前所得最大晶体的二维边长均为0.1mm。能否出现晶体以及出晶时间、晶体数目、大小、质量和形状等,与沉淀剂溶液各组分的种类和浓度、结晶方法、实验操作等因素密切相关。初步结果表明,所得晶体为NifB^-AV1单晶。
- 赵颖吕玉兵赵剑峰周军贤潜忠兴王耀萍黄巨富
- 关键词：棕色固氮菌突变种固氮酶
- Cr介质中生长的棕色固氮菌突变株UW3的固氮酶CrFe蛋白的特性
- 2006年
- 经DEAE-52,Q-Sepharose和Sephacry S-200柱厌氧层析,从在含Cr的培养基中生长良好的棕色固氮菌突变株UW3纯化得到CrFe蛋白制备物．与从野生型固氮菌OP的MoFe蛋白(OP Av1)相比,该制备物中-50％的蛋白具有与之相似的亚基组成,并可与OP Av1的抗体发生免疫交叉反应．该制备物还具有-40％的OP Av1 C2H2,H+和N2(以在氩气和氮气下放氢的差值表示)还原活性,并具与OP Av1相似的电子对比率．金属分析表明,此蛋白制备物含有Fe,Cr和Mo．与OP Av1相比,该制备物在450 nm的圆二色谱(CD)与之相似,但在3个相同g值处(g≈4．3,3．7和2．0)出现的EPR信号相对强度则不相同．根据EPR计算的结果表明,(i)CrFe蛋白制备物的Mo/Cr和Fe／(Cr+Mo)的比率分别为0．4和15．0,暗示在该制备物中的含Cr蛋白与MoFe蛋白之比约为2．5;(ii)该制备物活性与Fe及Cr的比率都分别接近于OP Av1活性与Fe和与Mo的比率;(iii)该制备物的上述3个g处的EPR信号强度与Cr含量的比率分别为Op Av1信号强度与Mo含量之比的-83％,0％和-40％．以上结果表明,CrFe蛋白也许是一种新的固氮酶组分Ⅰ蛋白,除以Cr代替Mo外,它的功能和包括金属原子簇在内的结构都可能与MoFe相似。
- 张志刚赵颖张纯喜边少敏周会娜王煌平殷红黄巨富
- 关键词：AZOTOBACTER金属原子簇
