国家自然科学基金(30640065)
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：第三军医大学首都医科大学第三军医大学西南医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 登革病毒2型非结构蛋白NS2B的原核表达、纯化及其抗体的制备被引量：1
- 2008年
- 目的原核表达登革病毒(Dengue Virus,DV)NS2B蛋白并纯化,制备NS2B的小鼠多克隆抗体。方法RT-PCR扩增DV2全长的NS2B基因序列,构建表达带有6×His标签的NS2B的原核表达载体,进行表达与纯化,免疫Balb/c小鼠,制备NS2B多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,Western-blot及免疫荧光染色检测其特异性。结果成功构建原核表达载体pQE-31/NS2B,进一步获得相对分子质量为16000的纯化蛋白及多克隆抗体,ELISA显示抗体效价达1∶25600。Western-blot和免疫荧光染色显示多克隆抗体与NS2B蛋白特异性结合。结论本研究获得了纯化的DV2NS2B蛋白,成功地制备了NS2B多克隆抗体,为进一步研究NS2B的作用机制奠定了基础。
- 刘丽梅陈宗涛田衍平陈炜江雯徐小峰高娜安静
- 关键词：登革病毒PROTEIN原核表达载体多克隆抗体
- CHO细胞中稳定表达人整合素β3对登革2型病毒感染的影响被引量：1
- 2009年
- 目的检测CHO细胞中稳定表达人整合素β3对登革2型病毒(Dengue virus serotype 2,DV2)感染的影响。方法将表达人整合素β3的质粒转染CHO细胞,通过G418筛选、流式细胞学检测和间接免疫荧光实验,建立稳定表达整合素β3的CHO细胞株;利用该细胞株进行感染实验,检测人整合素β3稳定表达对DV2易感性的影响。结果共获得了C9、C10、F8和H6 4个高表达整合素β3的细胞克隆,其中克隆F8中整合素β3的表达水平最高,是对照组的1.89倍。感染实验结果显示,进入整合素β3高表达细胞株的病毒数量均有所增高,增高的比例与整合素β3的表达增高趋势基本一致,进入F8细胞株的病毒量最高,是对照细胞的2.63倍,说明整合素β3有助于DV2进入细胞。结论在CHO细胞中外源性表达整合素β3可以提高DV2的感染率。
- 张俊磊高娜陈炜陈宗涛徐小峰安静
- 关键词：登革病毒整合素Β3CHO细胞
- Myosin-Vc特异性片段的原核表达及其抗血清的制备被引量：2
- 2008年
- 目的原核表达Myosin-Vc(Myo5c)蛋白并纯化,制备小鼠、家兔多克隆抗体,为探索Myo5c在病毒感染中的作用提供研究工具。方法采用RT-PCR方法从人胃粘膜组织中克隆编码Myo5c特异性蛋白的基因片段,构建该片段与6×His标签的融合蛋白表达质粒pQE-31/Myo5c,原核表达与蛋白纯化后,分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,制备Myo5c抗血清。采用ELISA检测抗体效价,Westernblot和间接免疫荧光染色检验抗体特异性。结果获得Myo5c特异性片段约42×103的纯化蛋白。ELISA检测小鼠和家兔抗血清效价分别为1∶12800、1∶6400。Westernblot和间接免疫荧光染色显示所制备的抗体能特异性识别Myo5c。结论获得Myo5c特异性蛋白,并成功地制备了Myo5c特异性的小鼠和家兔抗血清。
- 陈宗涛刘丽梅徐小峰田衍平张俊磊王嘉丽安静
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 重组Rab8截短体蛋白的原核表达、纯化和抗体制备被引量：2
- 2008年
- 目的获得Rab8纯化蛋白,制备多克隆抗体,为深入研究Rab8在病毒感染宿主细胞过程中的作用奠定基础。方法首先从HepG2细胞中克隆Rab8基因,然后从Rab8质粒中亚克隆Rab8C端编码122个氨基酸的基因片段,构建Rab8与6His的融合蛋白原核表达质粒。原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备Rab8多克隆抗体。采用ELISA法检测其效价,Western检验抗体特异性,间接免疫荧光染色法验证其免疫组化特性。结果克隆了人Rab8编码基因,构建了表达Rab8C端编码122个氨基酸的原核表达质粒pQE31-Rab8-122,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,获得相对分子量约15000的融合蛋白,免疫Balb/c小鼠后收获抗血清。ELISA显示抗体效价达1/20000。Western blot和免疫荧光染色结果显示此多克隆抗体能够与原核表达的Rab8蛋白发生特异性反应,并能够识别HepG2细胞中内源性Rab8蛋白。结论本研究获得原核表达的Rab8纯化蛋白,成功的制备了Rab8多克隆抗体,为进一步研究Rab8参与病毒感染宿主细胞提供了重要的实验材料。
- 徐小峰田衍平陈宗涛陈炜江雯刘丽梅安静
- 关键词：原核表达抗体制备
- 登革2型病毒NS1-NS2a基因真核表达载体的构建及鉴定
- 2009年
- 目的构建登革2型病毒NS1-NS2a基因真核表达质粒。方法RT-PCR扩增NS1-NS2a基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名为pRe-NS1-NS2a;重组质粒转染Vero细胞后,间接免疫荧光染色显示细胞质中有登革2型病毒特异性蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pRe-NS1-NS2a。
- 陈炜王嘉丽高娜田衍平陈宗涛徐小峰张俊磊刘丽梅江雯安静
- 关键词：登革2型病毒真核表达
- Dynamitin真核表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建pRe-dyn真核表达质粒,为研究dynein-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法RT-PCR扩增dynamitin基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名为pRe-dyn;重组质粒转染Vero细胞后,间接免疫荧光染色显示胞浆中有dyanimtin蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pRe-dyn,为后续研究dynamitin在病毒感染过程中的作用积累了有价值的实验资料。
- 陈炜高娜王嘉丽田衍平陈宗涛徐小峰张俊磊刘丽梅江雯安静
- 关键词：病毒微管骨架
