国家自然科学基金(30730068)
- 作品数：23 被引量：66H指数：6
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- 猪FcγRⅠ真核表达载体的构建及稳定表达细胞系的建立
- 2010年
- 本研究旨在建立稳定表达猪FcγRⅠ的Marc-145细胞系。从猪肺泡巨噬细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅠ和γ链cDNA,并分别构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅠ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300μg.mL-1)和G418(400μg.mL-1)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅠ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环和流式细胞术对细胞系进行鉴定。结果表明成功构建了猪FcγRⅠ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪FcγRⅠ的细胞系,且表达于转染细胞表面的poFcγRⅠ受体分子能与猪IgG特异结合。本研究为进一步研究奠定了基础。
- 史平玲邬成业乔松林张改平王爱萍肖治军祁艳华卜丹
- 关键词：共转染MARC-145细胞
- PRRSV河南株ORF7基因的克隆表达及条件优化被引量：4
- 2011年
- 从猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)河南分离株(HN07-1、HN07-2)的细胞培养物中提取RNA,根据参考株IAF-exp91 N蛋白基因序列设计出2对引物,成功克隆出ORF7全长基因,并连接至pMD-19T载体。基因测序结果表明,2株PRRSV河南分离株ORF7基因序列完全相同;该序列与HB-4(hs)同源性为100%,与标准美洲株VR-2332和我国早期分离的BJ-4株同源性为93.8%。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1后,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达条件进行优化。SDS-PAGE和Western-blot结果表明,成功表达了约40 kD的融合蛋白;使用1.0 mmol/L的IPTG在2×YT培养基中诱导8 h可获得最大表达量。
- 刘明张改平肖治军郭军庆乔松林王丽史西保刘运超游雷鸣王爱萍
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征反转录克隆WESTERN-BLOT
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体研究进展被引量：4
- 2010年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是引起猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病原,对PRRSV细胞受体的研究将有助于揭示PRRSV的感染途径、复制过程、致病机理和疫病预防及控制等一系列问题,细胞受体的研究已经成为目前PRRSV研究中的重要领域。论文从硫酸乙酰肝素受体、唾液酸黏附素受体、CD163分子、波形蛋白等方面综述了PRRSV细胞受体研究进展。
- 李清州达龙珠鲍登克陈海燕杨春英刘毓霞乔松林
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒硫酸乙酰肝素波形蛋白
- 猪繁殖与呼吸综合征免疫学研究进展被引量：4
- 2009年
- 综述了近年来PRRSV感染后免疫学方面的最新研究进展。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后,机体能产生快速强烈的体液免疫反应,但早期产生的抗体不仅不能产生免疫保护,反而会通过介导抗体依赖增强作用产生危害,而具有中和作用的抗体产生缓慢。在PRRSV的免疫应答中,体液免疫和细胞免疫反应都很特别。
- 冯丽丽张改平乔松林张丽萍
- 关键词：PRRSV细胞免疫体液免疫毒力变异疫苗研究
- 家畜IgG Fc受体研究进展被引量：6
- 2010年
- IgG Fc受体(Fcγreceptors,FcγRs)是一类重要的免疫细胞表面分子,对细胞反应的正向和负向调节发挥重要的免疫学功能,是治疗过敏和自身免疫性疾病理想的药物靶标。综述了FcγRs亚类的生物学特性及家畜FcγRs的研究进展,并对FcR(Fc受体)免疫学功能也进行了阐述。
- 史平玲王爱萍乔松林张改平邬成业鲍登克
- 关键词：FC受体免疫调节激活型受体
- 脂多糖对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β及TNF-α的影响被引量：12
- 2009年
- 研究了脂多糖的浓度、刺激时间对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响。分别用不同浓度的脂多糖和不同的刺激时间处理猪肺泡巨噬细胞，收集细胞，提取RNA，用实时荧光定量PCR方法检测IL-1、TNF-αmRNA表达水平；同时收集培养上清，用ELISA检测试剂盒检测IL-1β、TNF-α蛋白表达水平。结果表明，脂多糖浓度（1-1000ng／mL）对IL-1β、TNF-α影响显著（P％0．05）；刺激时间（1-24h）对IL-1β、TNF-α影响显著（P〈0．05），且蛋白的表达水平迟于mRNA的表达水平。脂多糖诱导猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α具有剂量、时间依赖性。
- 冯丽丽张丽萍张改平乔松林田晓辉万博王秋霞
- 关键词：脂多糖猪肺泡巨噬细胞白细胞介素-1Β肿瘤坏死因子-Α
- 抗猪FcγRⅡb多抗阻断猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体依赖增强作用研究被引量：6
- 2012年
- 为验证猪FcγRⅡb在抗体依赖增强(ADE)作用中的功能,从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清中提取IgG并制备F(ab′)2片段,将104 TCID50的PRRSV病毒与80μg/mL的F(ab′)2片段或抗PRRSV阳性血清(中和效价1/5.9,经128倍稀释)混合,共同感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)和Marc-145细胞,发现亚中和滴度的阳性血清能显著增强病毒对PAM的感染,但不能增强病毒对Marc-145细胞的感染;而F(ab′)2片断不能增强病毒感染;用兔抗猪FcγRⅡb多抗孵育PAM细胞,再用上述病毒与阳性血清复合物感染PAM,结果阳性血清对病毒感染的增强作用受到明显抑制。表明猪FcγRⅡb能够介导PRRSV ADE作用。
- 蒋志政张改平刘明阳乔松林刘永晖王蕊万博鲍登克王爱萍
- 关键词：阻断
- 猪FcγRⅢ和γ链共转染Marc-145细胞系的建立
- 2011年
- 为了建立稳定表达猪FcγRⅢ(Porcine Fc gamma receptorⅢ,poFcγRⅢ)的Marc-145细胞系,从PAM细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅢ和γ链的cDNA,并构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅢ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300 mg/L)和G418(400 mg/L)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环试验和流式细胞术对细胞系进行了鉴定。结果表明,成功构建了猪FcγRⅢ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系,表达于转染细胞表面的猪FcγRⅢ受体分子能与猪IgG特异结合。
- 邬成业史平玲乔松林王爱萍郝慧芳杜晓明王林林张改平
- 关键词：共转染
- 猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：2
- 2012年
- 为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBR Green-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法。提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反转录得cDNA,用特异性引物经PCR扩增得到IFN-β和IRF-3基因,将其克隆至pMD-19T载体,经测序鉴定后得重组质粒,依次10倍稀释做为标准品,建立标准曲线及溶解曲线。结果表明,β-actin基因、IFN-β基因和IRF-3基因标准曲线线性关系较好,R2≥0.997;溶解曲线为特异性单峰,无非特异性扩增,检测下限可达100个拷贝/μL。建立的猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法,特异性强、重复性好,为从分子水平上研究猪的免疫应答奠定了基础。
- 王蕊张改平乔松林刘永晖蒋志政万博鲍登克王爱萍
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp7蛋白的表达与纯化被引量：2
- 2012年
- 为了解nsp7重组蛋白的免疫学活性,采用RT-PCR的方法从猪繁殖与呼吸道综合症病毒(PRRSV)BJ-4毒株中扩增得到nsp7基因,将基因连接到pET-28a载体并转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达,利用Ni-NTA进行亲和纯化,通过SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行分析和鉴定,通过间接ELISA方法研究了重组蛋白的免疫学活性。结果表明,成功制备了nsp7重组蛋白,间接ELISA结果表明,重组蛋白具有良好的免疫活性,为建立nsp7特异性抗体的间接ELSIA检测方法及PRRS诊断试剂盒的研制奠定了基础。
- 刘永晖张改平乔松林刘明阳蒋志政王蕊万博鲍登克王爱萍
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒原核表达
