国家自然科学基金(30640057)
- 作品数：57 被引量：142H指数：8
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- 相关机构：山西医科大学山西农业大学中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
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- 弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠抵抗弓形虫感染作用的观察被引量：35
- 2007年
- 目的观察弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠诱导的肠黏膜和系统免疫应答及其抗弓形虫感染作用。方法BALB/c小鼠52只随机分为两组(每组26只),免疫组小鼠用弓形虫复合黏膜疫苗(每毫升含可溶性速殖子抗原1mg,霍乱毒素50μg)20μl/只滴鼻免疫2次,间隔2周;对照组用等剂量PBS滴鼻。末次免疫后14d,各组处死6只,摘眼球取血(0.5～1ml);取直肠内粪便(4～5粒),ELISA测定血清IgG和粪IgA抗体;分别计数脾组织、派伊尔集合淋巴结(PP)和肠上皮淋巴细胞(IEL),免疫细胞化学法检测各组织中CD4+、CD8+T细胞亚群水平。用RH株弓形虫速殖子(4×104个/只)灌胃攻击感染各组其余小鼠,30d后颈椎脱位处死,计数肝、脑组织速殖子虫荷。结果免疫后14d,免疫组小鼠血清IgG和粪IgA抗体水平(分别为0.224和0.371),显著高于对照组(分别为0.041和0.037)(P<0.05),脾、PP和IEL中T淋巴细胞与对照组相比明显增生(P<0.01),其中脾、PP中CD4+、CD8+T淋巴细胞增殖显著(P<0.05),IEL中以CD8+T细胞为主,增殖显著(P<0.01),CD4+/CD8+比值降低(P<0.05)。攻击后30d,免疫组小鼠存活率(85.0%)显著高于对照组(45.0%)(P<0.05)。免疫组肝、脑组织速殖子数比对照组分别减少86.3%、86.7%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠,能有效诱导黏膜和系统免疫应答,小鼠存活率显著提高,肝、脑组织虫荷显著降低。
- 殷国荣孟晓丽马广源马晓明
- 关键词：弓形虫黏膜疫苗鼻内免疫可溶性抗原霍乱毒素
- 弓形虫STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导不同黏膜部位抗体水平动态观察
- 目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和IFN-γ佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠后不同黏膜部位抗体水平及其持续时间,为黏膜疫苗研制提供实验依据。方法 BALB/c小...
- 刘红丽孟晓丽弓鸿飞殷国荣
- 关键词：弓形虫STAG滴鼻免疫黏膜抗体
- 文献传递
- RNA原位杂交法动态观察弓形虫速殖子对BALB/c小鼠小肠黏膜的黏附及侵入被引量：3
- 2008年
- 目的RNA原位杂交法观察弓形虫速殖子黏附和侵入小肠黏膜的部位及时间。方法30只BALB/c小鼠随机分为两组,实验组(24只)每鼠灌胃感染2×104个弓形虫速殖子(悬于0.2mlPBS),对照组(6只)给予等量PBS。分别于感染后15min、30min、1h、2h、4h和8h各处死实验组小鼠4只和对照组小鼠1只,取十二指肠、空肠和回肠标本制备石蜡切片,并作RNA原位杂交。光学显微镜观察原位杂交切片,随机选取50个视野,计数所有观察视野内的虫体总数并计算平均数。结果侵入的弓形虫速殖子可位于小肠上皮细胞(吸收细胞、杯状细胞和内分泌细胞)的纹状缘、吸收细胞胞浆内或相邻吸收细胞间及固有层内。感染后15min,黏附于空肠的速殖子数量(4.93±3.949)显著高于回肠(3.78±3.102)(P<0.05);侵入空肠的速殖子数量(4.92±4.164)显著高于十二指肠(4.10±3.532)和回肠(3.68±3.301)(P<0.05)。随着感染后时间的延长,黏附于各肠段的速殖子数量逐渐减少,而侵入的数量逐渐増多。与感染后15min相比,感染后8h,黏附于十二指肠(2.32±3.039)、空肠(3.15±3.241)和回肠黏膜(2.59±3.028)的速殖子数量均显著减少(P<0.05),而侵入十二指肠(8.92±8.955)、空肠(9.11±6.667)和回肠黏膜(9.15±10.192)的速殖子数量均显著增加(P<0.05)。结论弓形虫速殖子对其所黏附的小肠上皮细胞无严格的选择性,但其侵入小肠的部位具有选择性,空肠为速殖子侵入的易感部位。
- 马晓明孟晓丽殷国荣刘红丽申金雁
- 关键词：弓形虫速殖子小肠黏膜上皮细胞
- 弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导体液免疫应答的动态观察被引量：8
- 2007年
- 观察从Vero细胞与弓形虫速殖子共培养液分离的排泄-分泌抗原（Excreted-secreted antigens，ESA）鼻内免疫小鼠诱导的体液免疫应答及动态变化，为弓形虫复合黏膜疫苗候选抗原提供实验依据。BALB／c小鼠84只随机分为实验组和对照组，实验组以ESA为抗原（20μg／只），对照组用未接种弓形虫的细胞培养上清液20μL（μg／只），滴鼻免疫2次（间隔2周）。分别于2次免疫后第1、2、3、4、5、6、7周颈椎脱位处死小鼠。ELISA法测定血清IgG、IgA，粪便sIgA及肠液sIgA。结果表明，免疫组小鼠血清IgG、IgA和粪便sIgA及肠液sIgA均增高。血清IgG、IgA水平分别第5周、第4周达高峰，免疫后第1～7周（P〈0．05）显著高于对照组。粪便sIgA第4周即达高峰，之后逐渐降低，至第7周仍（P〈0．05）显著高于对照组。肠液sIgA第4周达高峰，第2、3、4周（P〈0．05）高于对照组。可见，弓形虫ESA鼻内免疫BALB／c小鼠可有效诱导体液免疫应答，特异性抗体生成明显且可持续较长时间。
- 殷国荣周永安刘娟娟孟晓丽刘红丽
- 关键词：弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫黏膜免疫
- CpG ODN联合STAg滴鼻免疫BALB/c小鼠诱导的免疫应答动态观察
- 目的观察CpG寡核苷酸(CpG ODN)联合弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)滴鼻免疫BALB/c小鼠诱导的免疫应答,探讨CpG ODN作为弓形虫复合黏膜疫苗的佐剂效...
- 石蓉孟晓丽武云香刘转转殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫STAG滴鼻免疫黏膜佐剂
- 文献传递
- 肠黏膜免疫：刚地弓形虫感染中抗体分泌细胞及sIgA的地位被引量：5
- 2009年
- 病原体经口感染机体后，肠相关淋巴组织受刺激，促进肠黏膜内IgA抗体分泌细胞（IgAASC）的形成，并向肠腔分泌大量的分泌型免疫球蛋白A（sIgA），IgA ASC和sIgA在肠黏膜免疫应答中起了重要作用。BALB／c小鼠经口感染弓形虫RH速殖子后，小鼠小肠黏膜固有层IgA ASC大量增殖，小肠冲洗液sIgA水平持续增高，发挥抗虫效应。小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠黏膜IgA ASC数量呈正相关（r=0．732，P〈0．01）。用可溶性速殖子抗原（STAg）鼻内免疫小鼠可诱导十二指肠黏膜固有层IgA ASC高表达，小肠液和血清sIgA水平升高，表明在抗弓形虫感染中STAg鼻内免疫发挥了作用。
- 申金雁殷国荣
- 关键词：黏膜免疫刚地弓形虫抗体分泌细胞分泌型免疫球蛋白A
- Vero细胞无血清培养制备弓形虫排泄-分泌抗原适宜条件的筛选被引量：2
- 2008年
- 目的筛选Vero细胞无血清培养制备弓形虫排泄-分泌抗原(ESA)的适宜条件。方法采用拉丁方析因设计。第一部分:在血清浓度为0.5%、1.0%、2.0%、4.0%的培养基中,共培养Vero细胞与弓形虫速殖子,分别于培养3、6、12、24h时,改为无血清培养基,继续培养至第7天,收集培养上清液,制备ESA,并检测蛋白含量。第二部分:在含1.0%血清培养基中共培养Vero细胞与弓形虫速殖子,分别于培养12、24、48、72h时,改为无血清培养基,继续培养至第7、9、11、13天,收集培养上清液,制备ESA,并检测蛋白含量。结果Vero细胞与弓形虫速殖子在1.0%血清浓度培养基中培养12或24h时,无血清培养基继续培养7d,制备的ESA蛋白含量显著高于其他血清浓度(0.5%、2.0%、4.0%)及含血清培养时间(3、6h)。Vero细胞与弓形虫速殖子在含1.0%血清培养基中共培养12、24h,无血清培养基继续培养至第13天,制备的ESA蛋白含量显著高于其他培养时间(48、72h)和无血清培养基继续培养时间(7、9、11d)。结论培养基的血清浓度以及含血清和无血清培养时间是影响体外制备ESA的重要因素。Vero细胞与弓形虫速殖子在1.0%血清浓度培养基中培养12h,无血清培养基继续培养13d,为制备ESA的适宜条件。
- 吴静刘娟娟殷国荣孟晓丽刘红丽王海龙
- 关键词：刚地弓形虫排泄-分泌抗原VERO细胞无血清培养
- rTgPrx蛋白滴鼻免疫小鼠抗弓形虫感染作用被引量：3
- 2010年
- 目的观察重组弓形虫过氧化物还原蛋白(rTgPrx)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及抗弓形虫感染作用。方法6周龄BALB/c小鼠75只,随机分为5组,实验组分别用10,20,30,40μg rTgPrx〔溶于20μL磷酸盐缓冲液(PBS)中〕滴鼻免疫小鼠3次,各间隔2周;对照组用等量磷酸盐缓冲液;末次免疫后14 d,用1×104个速殖子/只灌胃攻击全部小鼠;攻击后30 d,眼静脉丛采血,颈椎脱臼处死小鼠,ELISA检测血清IgG和肠液IgA,分离并计数肠上皮内淋巴细胞(IEL)和脾淋巴细胞,分离并计数肝、脑组织内弓形虫速殖子。结果40μg rTgPrx组血清IgG、IEL及脾淋巴细胞数量均高于对照组(P<0.05),40μg组肝、脑组织内虫荷(速殖子数)明显低于对照组及10,20和30μg组(P<0.05)。结论rTgPrx滴鼻免疫小鼠可诱导黏膜部位和系统免疫应答和抗弓形虫感染作用,40μg组的免疫保护作用优于其他剂量组。
- 王海龙刘转转殷国荣孟晓丽曹蕾刘美娜
- 关键词：刚地弓形虫黏膜免疫保护性抗原
- STAg联合CpG ODN滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答被引量：1
- 2009年
- 目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)联合CpG寡核苷酸(CpG ODN)滴鼻免疫BALB/c小鼠诱导的免疫应答,探讨CpG ODN的佐剂效应。方法将72只雌性BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,每组36只。实验组以20μgSTAg联合10μg CpG ODN滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻,共免疫2次,间隔2周。于末次免疫后第1、2、3、4、5、6周每组分别随机处死6只小鼠,ELISA法检测血清IgG和小肠冲洗液sIgA,分离脾和肠上皮内淋巴细胞(iIEL)并计数。结果实验组小鼠血清IgG水平在末次免疫后第1周即显著高于对照组,在5周内呈持续上升趋势,至第6周出现下降。实验组小鼠小肠冲洗液sIgA水平在各个时间点均高于对照组,第2～6周差异有统计学意义。实验组小鼠脾淋巴细胞和iIEL数量均明显增生,脾淋巴细胞数量在第3周时达高峰,第2～6周显著高于对照组;iIEL数量分别在第2、4周出现2个峰值,第2、3、4周显著高于对照组。结论STAg与CpG ODN联合滴鼻免疫BALB/c小鼠,可有效诱导黏膜部位和系统的体液免疫和细胞免疫应答,且可持续较长时间。
- 武云香石蓉殷国荣孟晓丽张杰
- 关键词：可溶性速殖子抗原ODN滴鼻免疫免疫应答
- RNA原位杂交法检测灌胃接种弓形虫速殖子小鼠体内虫体的早期动态分布被引量：1
- 2010年
- 目的观察经灌胃接种弓形虫RH株速殖子后,虫体在小鼠体内的早期动态分布。方法弓形虫RH株速殖子经灌胃接种BALB/c小鼠20只(2×104/只),用RNA原位杂交法观察感染后1、2、4、6和8d小鼠的肠系膜淋巴结(MLN)、肝、脾、肺和脑组织内速殖子的数量及分布趋势。同时设PBS空白对照组(5只)。结果感染后1d,在MLN、肝和脾组织内均检测到速殖子,分别于感染后4d和6d在肺和脑组织内检测到速殖子。感染后6～8d,各组织间虫荷差异均有统计学意义(P值均<0.05),组织内虫荷依次为MLN>肝>脾>肺>脑,各组织内虫体数量呈时间依赖性。结论弓形虫RH株速殖子经灌胃接种后,首先侵入MLN、肝和脾,其次为肺,最后为脑,且虫体在MLN内增殖较快。
- 孟晓丽马晓明殷国荣刘红丽殷丽天申金雁王海龙
- 关键词：弓形虫
