国家自然科学基金(30640052)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：哈尔滨医科大学附属第二医院加拿大多伦多大学齐齐哈尔市第一医院更多>>
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- TIMP-3-pcDNA3.0转染平滑肌细胞及其在大鼠心肌梗死瘢痕中的存活与表达
- 2009年
- 目的探讨基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)基因转染平滑肌细胞的效果及移植的转染细胞能否在大鼠心梗瘢痕中存活并表达目的蛋白。方法植块法培养大鼠主动脉中层平滑肌细胞并鉴定;脂质体介导法以TIMP-3基因质粒转染平滑肌细胞;RT-PCR和Western blot检测转染细胞的基因水平和蛋白表达;通过BrdU移植检测移植细胞的存活与增殖情况。实验大鼠随机分成单纯PBS注射、单纯平滑肌细胞移植和转染平滑肌细胞移植3组(每组7只实验大鼠),将移植物注射入(五点法)心梗大鼠的室壁内。1周后,提取其左心室组织mRNA和蛋白,分别进行RT-PCR和Western blot检测,鉴定其TIMP-3基因含量和表达情况。结果植块法培养可以获得高纯度的平滑肌细胞;脂质体介导法可以使TIMP-3基因转染平滑肌细胞并获得TIMP-3蛋白的表达;移植的转染细胞能够在心梗瘢痕中存活并增殖;转染细胞组大鼠左心室组织中TIMP-3 mRNA含量明显多于单纯平滑肌细胞移植组(P<0.01)及单纯PBS注射组(P<0.01);转染细胞移植组大鼠左心室组织中TIMP-3蛋白含量明显多于平滑肌细胞移植组(P<0.01)及单纯PBS注射组(P<0.01)。结论TIMP-3基因可以通过脂质体介导法转染平滑肌细胞,且转染细胞可以在大鼠梗死心肌中存活、增殖并表达TIMP-3蛋白。
- 孙露田海刘开宇刘伟贾智博蒋树林李仁科
- 关键词：平滑肌细胞TIMP-3心肌梗死
- 对心脏移植几个问题的再认识被引量：2
- 2010年
- 臧旺福田海
- 关键词：心脏移植肺移植
- TIMP-3基因瞬时转染平滑肌细胞及其在大鼠心梗瘢痕中的存活与表达
- 2008年
- 我们建立转染TIMP-3基因的平滑肌细胞群（TIMP-3-SMC），证明其能够在心梗瘢痕处存活并稳定表达基因产物，为进一步研究其对缺血性心力衰竭的治疗作用提供依据。
- 孙露田海刘开宇李大为贾智博蒋树林于渡李仁科
- 关键词：平滑肌细胞瞬时转染存活瘢痕心梗
- TIMP-3基因转染的血管平滑肌细胞移植对心肌梗死后心脏形态和功能的影响被引量：3
- 2009年
- 目的： 观察基质金属蛋白酶组织抑制因子3 （tissue inhibitor-3 of matrix metalloproteinases，TIMP-3）基因转染的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）移植，对大鼠心肌梗死后心脏形态和功能的影响。 方法： 取Wistar大鼠胸主动脉采用组织块贴壁法培养VSMCs。应用脂质体转染技术，将TIMP-3-pcDNA3.0重组质粒瞬时转染至VSMCs。另取雌性Wistar大鼠121只（体质量200～250 g），其中93只建立急性心肌梗死模型。将存活的84只随机分成A、B、C 3组（每组28只），即于心肌梗死后3 d，再次开胸并在梗死的心肌中分别注射含有3×106个TIMP-3基因转染的VSMCs（A组）、3×106个VSMCs（B组）或改良Eagle培养基（Dulbeccos modification of Eagles medium Dulbecco，DMEM培养基）（C组）各0.3 ml，121只中剩余的28只大鼠作为正常对照组（D组），不做任何处置。基因转移4周后，进行超声心动图检测心脏的功能，然后获取心脏标本，计算心脏左室容积（left ventricular volume，LVV）和左室容积指数（left ventricular volume index，LVVI），最后进行心脏组织学观察。 结果： 成功分离、培养了VSMCs，纯度达98%，TIMP-3基因成功转入VSMCs中。基因转移4周，超声心动图检查发现，心脏功能的各项指标A组优于B组和C组，B组优于C组；但A、B、C 3组均差于D组（P均〈0.05）。A、B、C和D组心脏LVV分别为（894.4±158.3）mm3、（1 126.5±284.7）mm3、（1 372.8±181.9）mm3和（420.2±39.6）mm3，LVVI分别为（2.957±0.362）mm3/g、（3.604±0.710）mm3/g、（4.538±0.259）mm3/g和（1.009±0.134）mm3/g，A、B、C 3组均明显大于D组，A、B组较C组明显减小，A组较B组明显减小（P均〈0.05）。组织学观察显示，C组呈心肌梗死表现，B组梗死心肌内可见成簇的肌细胞，室壁较C组增厚；A组较B、C组梗死区缩小、室壁增厚，D组无异常。 结论： 大鼠心肌梗死后3 d，将TIM
- 贾智博田海苗宏志刘开宇孙露蒋树林李仁科
- 关键词：心肌梗死心脏形态心脏功能细胞移植
- 基质金属蛋白酶组织抑制因子3基因转染血管平滑肌细胞移植对急性心肌梗死后早期心肌重塑的影响被引量：2
- 2007年
- 目的研究基质金属蛋白酶组织抑制因子3(tissue inhibitor-3of matrix metalloproteinases,TIMP-3)基因转染血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)移植,对急性心肌梗死(acute myocardialinfarction,AMI)后早期心脏结构变化的影响,并探讨其可能的机制。方法取Wistar大鼠胸主动脉采用组织块贴壁法培养VSMCs。另取61只Wistar雌性大鼠建立左冠状动脉远端结扎的AMI动物模型,将存活的54只大鼠模型随机分为三组,每组18只。于冠状动脉结扎后立即向缺血部心室壁内注射含有1×106个TIMP-3基因转染VSMCs(A组)、1×106个VSMCs(B组)或不含细胞的PBS液(C组)各0.5ml。术后1周,进行心脏形态学检测观察大鼠心脏结构变化,免疫组织化学染色验证TIMP-3基因转染VSMCs在缺血心肌中的存活情况,Western blot法测定大鼠缺血心肌TIMP-3蛋白和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase9,MMP-9)蛋白的含量。结果成功分离、培养VSMCs,纯度达98%,TIMP-3基因成功转入VSMCs中。术后1周,A组大鼠梗死心肌面积占左室游离壁面积的百分比为28.73%±1.56%,小于B组39.63%±1.84%和C组46.32%±2.16%(P<0.01);B组小于C组(P<0.01)。A组大鼠左室容积指数为5.27±0.21mm3/g,小于B组6.69±0.34mm3/g和C组9.67±0.88mm3/g(P<0.01);B组小于C组(P<0.01)。免疫组织化学染色见TIMP-3基因转染VSMCs被成功植入缺血心肌并在其中存活。Western blot法示A组大鼠缺血心肌TIMP-3蛋白含量为300704.8±3692.8,高于B、C组的195548.8±3014.2及177991.1±2502.1(P<0.01);B组高于C组(P<0.01)。A组MMP-9蛋白含量为594827.4±5708.5,低于B、C组的921461.4±8887.4及1044445.0±8788.6(P<0.01);B组低于C组(P<0.01)。结论将TIMP-3基因转染的VSMCs移植入心肌缺血区可明显抑制AMI后早期心肌重塑。
- 贾智博田海刘开宇孙露蒋树林李仁科
- 关键词：急性心肌梗死心肌重塑细胞移植基因治疗
