河南省医学科技创新人才工程项目(2004107031)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 相关作者：孙玲乐晓萍王峰孙慧张钦宪更多>>
- 相关机构：郑州大学第一附属医院郑州大学更多>>
- 发文基金：河南省医学科技创新人才工程项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 端粒酶逆转录酶及c-myc基因反义寡核苷酸对HL-60细胞端粒酶活性的影响被引量：2
- 2006年
- 目的研究端粒酶逆转录酶(hTERT)与c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞端粒酶活性的影响,探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT和c-myc基因表达的关系。方法应用反义寡核苷酸(ASODN)分别封闭HL-60细胞hTRET与c-myc基因,RT-PCR方法检测基因表达;分别使用TRAP-ELISA法、PAGE-银染法检测细胞端粒酶活性。结果ASODN作用细胞72 h后,hTERT、c-mycmRNA的表达受到不同程度抑制,以30μmol/L作用组表达量最低。TRAP-ELISA检测:hTERT ASODN 10、20、30μmol/L作用组,c-mycASODN 20、30μmol/L作用组与未作用组比较,端粒酶活性明显降低(P<0.05);c-mycASODN 10μmol/L作用组及c-myc、hTERT SODN作用组与未作用组比较无显著差异(P>0.05)。PCR-PAGE检测:hTERT与c-mycASODN作用组较SODN作用组端粒酶条带明显减少,以30μmol/L作用组条带最少,而同浓度hTERT ASODN作用组较c-mycASODN作用组条带减少。结论hTERT与c-myc基因ASODN能够分别抑制该基因mRNA的表达,同时具有下调端粒酶活性作用。
- 孙玲王峰乐晓萍孙慧王一浩马鸿雁张钦宪
- 关键词：端粒酶逆转录酶C-MYC基因端粒酶活性HL-60细胞
- RNA干扰对白血病细胞系HL-60增生的影响被引量：1
- 2006年
- 目的研究针对c-myc基因的小分子干扰RNA片断(siRNA)对白血病细胞系HL-60细胞增生的影响,探讨应用siRNA进行白血病基因治疗的可能性。方法制备特异性对应c-myc基因的siRNA转染HL-60细胞,倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增生状态,流式细胞仪进行细胞周期分析。结果siRNA转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,增生能力减弱,其增生抑制作用于转染后48h、72h最明显,增生抑制率分别为53.2%和51.5%;S期细胞比值由(56.1±4.7)%降至(17.8±3.2)%,细胞阻滞在G0/G1期。结论针对c-myc基因的siRNA对HL-60细胞增生有明显抑制作用,有望为白血病治疗提供新的途径。
- 孙玲赵小强岳保红陈艳丽刘小转
- 关键词：C-MYC基因
- hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞凋亡及细胞周期的影响
- 2007年
- 目的:研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞诱导凋亡作用及细胞周期的影响。方法:应用hTERT ASODN封闭HL-60细胞hTERT基因,RT-PCR方法检测目的基因的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分析,TUNEL方法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA梯带。结果:hTERT ASODN作用细胞72h后,hTERT基因表达明显受到抑制(P<0.01)。流式细胞仪检测显示:ASODN组细胞阻滞于G0/G1期,S、G2/M期细胞减少(P<0.05);细胞增殖指数(PI)明显降低(P<0.05);检测出早期凋亡峰。Annexin V/PI检测及TUNEL检测均显示:ASODN组凋亡细胞阳性率明显高于SODN组(P<0.01)。琼脂糖凝胶电泳显示:ASODN组出现凋亡DNA梯带。结论:hTERT ASODN能够封闭目的基因表达,阻滞HL-60细胞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,对治疗白血病具有潜在应用价值。
- 王峰孙玲孙慧乐晓萍张钦宪
- 关键词：HL-60细胞HTERT基因反义寡核苷酸细胞周期凋亡
- hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞致瘤性的影响及其诱导凋亡作用被引量：3
- 2006年
- 目的研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡核苷酸(ASODN)对 HL-60细胞致瘤性的影响及其诱导凋亡作用。方法用流式细胞术检测 hTERT ASODN 转染 HL-60细胞72 h 后细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞 DNA 梯带;将转染及未转染寡核苷酸的 HL-60细胞分别接种BALB/c 裸鼠,观察成瘤情况,切片观察移植瘤组织形态;另取10只 BALB/c 裸鼠,改进成瘤方法使其均匀成瘤后分成两组,在瘤体局部分别注射 ASODN、磷酸盐缓冲液(PBS),经7d 治疗后测量瘤体并切片观察其细胞形态变化,采用 TUNEL 方法检测细胞凋亡。结果 hTERT ASODN 作用于 HL-60细胞72 h 后,流式细胞术检测出早期凋亡峰,琼脂糖凝胶电泳显示 DNA 梯形条带,SODN 组及空白对照组未检测出凋亡峰及 DNA 梯形条带 ASODN 转染的 HL-60细胞组 BALB/c 裸鼠接种后第16～17天成瘤,5只中2只成瘤,未转染组在第12～13天成瘤,5只中4只成瘤,成瘤后 ASODN 治疗组瘤组织间质及血管较少,PBS 治疗对照组瘤组织间质发达,血管丰富。成瘤后 ASODN 治疗前肿瘤体积为(100.9±24.6)mm^3,治疗后肿瘤与 PBS 对照组比较,生长明显减缓[瘤体积分别为(422.7±326.4)mm^3和(786.4±357.6)mm^3](P<0.05) 组织切片显示,ASODN 治疗组瘤组织中可见大量细胞呈现凋亡形态,PBS 治疗组则少见凋亡细胞 TUNEL 检测显示,ASODN 治疗组瘤组织中阳性细胞数较 PBS 治疗组明显增多(P<0.05)。结论 hTERT 基因 ASODN 能够诱导 HL-60细胞凋亡并降低其在 BALB/c 裸鼠体内的致瘤性,抑制移植瘤增长速度。
- 孙玲王峰孙慧乐晓萍葛秀峰刘林湘张钦宪
