上海市科学技术委员会资助项目(09XD1405400)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：许傲天童光志于海闫丽萍姜一峰更多>>
- 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp4的表达及其抗血清的制备被引量：1
- 2009年
- 根据GenBank中已发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly Pathogenic Porcine Reproductiveand Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)HuN4株全基因组序列,设计合成一对引物,对PRRSV HuN4株非结构蛋白Nsp4(Nonstructural protein4基因进行RT-PCR扩增,克隆到原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达载体pET30a-Nsp4,经酶切测序鉴定。将pET30a-Nsp4转化表达菌株BL21(DE3),诱导可表达分子量约为27kDa重组蛋白。Western blot显示其具有较好的反应原性,经镍离子亲和层析(Ni-NTA)纯化获得了高纯度的可溶性重组蛋白。将纯化的Nsp4蛋白免疫BALB/c小鼠,抗血清ELISA效价达1∶16 000,Western blot和IFA表明,所制备的抗血清能够特异性识别PRRSV自身表达的Nsp4蛋白。本研究获得了可溶性的PRRSV Nsp4蛋白,制备了Nsp4特异性多抗血清,为进一步研究Nsp4蛋白的亚细胞定位及功能奠定了基础。
- 许傲天周艳君李国新于海闫丽萍陈宗艳张善瑞王礞礞姜一峰王亚欣田志军童光志
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP4原核表达
