上海市浦江人才计划项目(PJ200700367)
- 作品数：9 被引量：47H指数：4
- 相关作者：于颖彦刘炳亚朱正纲计骏张佳年更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：上海市浦江人才计划项目国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- IRX1真核表达载体的构建及在胃癌细胞SGC-7901中的定位被引量：6
- 2009年
- 目的构建pEGFP—IRX1真核表达载体，体外转导至SGC-7901胃癌细胞株，观察IRX1基因转染后蛋白表达与细胞内定位。方法PCR扩增IRX1全长1443bp编码序列，将PCR扩增产物连接入pGEM-Teasy载体，经测序确认序列无误后，亚克隆入pEGFP—N1载体，构建pEGFP-IRX1真核表达载体。采用Lipofectamine2000转染SGC-7901胃癌细胞株，在荧光显微镜下观察外源性IRX1基因导入后在胃癌细胞内的表达与亚细胞定位。结果成功构建有绿色荧光蛋白融合的IRX1真核表达载体，外源性IRX1基因在胃癌SGC-7901细胞中表达成功，在荧光显微镜下IRX1表达蛋白定位于细胞核内。结论pEGFP—IRX1真核表达载体构建成功，并可在细胞内表达，这将为IRX1在胃癌内的功能研究奠定基础。
- 刘卫仁于颖彦倪培华吴建林计骏张佳年陈雪华刘炳亚朱正纲
- 关键词：胃癌真核表达载体
- 肿瘤相关基因转录调控蛋白的识别与研究进展被引量：1
- 2010年
- 张荣娟于颖彦
- 关键词：调控蛋白癌相关基因肿瘤细胞恶性转化基因转录调控反式作用因子
- 胃癌相关基因启动子甲基化的研究进展被引量：2
- 2009年
- 随着人类基因组“序列图”的绘制成功,以测序为主的“结构基因组学”研究已趋于尾声．基因组学进入了后基因组学（也称“功能基因组学”）时代。人类基因组约由数亿个碱基对构成。在功能基因组时代，如何在这浩如烟海的序列数据中定位基因组中的各种功能单元及建立这些能功单元间的相互作用网络，从而在分子水平上揭示肿瘤的发生机制已成为巨大挑战。
- 郭晓波于颖彦
- 关键词：肿瘤相关基因启动子转录调控
- 肿瘤组织库建立的进展及意义被引量：18
- 2009年
- 收集高质量的人类肿瘤组织及以血液为主的体液样本是发现新型肿瘤生物标志物及药物作用新靶点的物质基础。高质量的生物样本也是决定转化医学研究的重要限速性因素。美国、加拿大、英国、法国等均已建立完备的肿瘤样本库。
- 于颖彦刘炳亚朱正纲
- 关键词：肿瘤病理学
- 胃癌临床病理分期相关基因MGP的发现及其表达验证被引量：2
- 2010年
- 目的通过对基因芯片数据库中一组大样本胃癌表达谱芯片的数据挖掘分析，筛选并验证与临床病理分期及预后密切相关的基因。方法检索基因表达谱芯片数据库，对其中符合分析要求（大样本、病理分型、临床病理分期以及随访资料齐全）的胃癌表达谱芯片数据进行再挖掘分析。利用基因芯片显著性差异基因分析（SAM）方法筛选出不同临床病理分期的差异基因，并通过逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、即时荧光定量PCR、Westernblot方法验证胃癌细胞株及54例胃癌组织MGP表达，利用免疫组织化学EnVision法观察MGP在胃癌中的定位特点。结果通过对GEO开放数据库内GES4007数据的挖掘分析，发现14个基因表达与胃癌临床病理分期显著相关，其中MGP基因表达升高与临床病理分期呈正相关，对预后有明显影响。定量PCR和Westernblot方法证实MGP在胃癌细胞系中存在不同程度表达，免疫组织化学染色显示MGP定位于肿瘤细胞胞质内。RT．PCR分析54例胃癌组织和对应癌旁组织内mRNA，结果显示22例癌组织MGP的mRNA表达明显高于癌旁组织（40．7％）。MGP的高表达与胃癌临床病理分期（P=0．001）和预后呈明显相关（P=0．006）。结论公共数据库存储的芯片数据具有再分析价值。MGP基因是与胃癌临床病理分期和预后相关的新型分子标志物。
- 郭磊郭晓波蒋金玲张佳年计骏刘炳亚朱正纲于颖彦
- 关键词：寡核苷酸序列分析MATRIXGLAPROTEIN
- 低温冻存时间对肿瘤组织生物大分子的影响被引量：17
- 2009年
- 目的:探讨低温冻存时间对生物大分子DNA、RNA及蛋白质的影响,观察经长期低温冻存的肿瘤样本是否仍可满足科研的需求。方法:选择上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所肿瘤样本库内2002至2006年间收集的手术切除胃癌标本20对(包括肿瘤组织及配对正常组织),用于提取组织总蛋白质和核酸,二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白浓度,采用凝胶电泳鉴定RNA、DNA完整性。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测核转录因子-κB(NF-κB)亚单位P65的mRNA表达;蛋白印迹(Western blot)法检测NF-κB蛋白表达。另随机抽取46例胃癌标本,检测其NF-κBP65的单核苷酸多态性(SNP)位点变异。结果:所有抽提DNA的吸光度比值(A260/A280)均在1.7～2.1间,电泳条带清晰,可检测出SNP位点变异。与保存1～2年者相比,储存3年或以上的标本NF-κBP65 mRNA与蛋白表达均有下调(P=0.03,P<0.01)。结论:组织样本低温保存在5年范围内,其DNA分子的完整性与质量均未受影响;RNA与蛋白质分子在低温保存1～2年内尚不影响癌基因表达的分析结果,但低温保存3年或以上的标本中RNA及蛋白质均有不同程度降解。
- 张佳年于颖彦计骏刘卫仁吴建林陈雪华刘炳亚朱正纲
- 关键词：肿瘤标本技术方法癌基因生物大分子低温冻存
- 同源盒基因IRX1的启动子克隆及其在人胃黏膜细胞中的启动活性分析
- 2010年
- 目的 克隆同源盒基因IRX1的核心启动子序列,并探讨其转录调控机制.方法 通过生物信息学预测IRX1基因启动子范围：利用PCR方法扩增并构建含有IRX1基因启动子不同片段的真核报告基因质粒,瞬时转染GES-1胃黏膜细胞,通过检测不同片段的荧光素酶报告质粒活性,判断不同片段的启动子活性.结果 生物信息学预测IRX1基因启动子位于转录起始点上游700 bp范围内.通过PCR技术扩增获得IRX1基因5＇侧翼区8个截短片段报告基因质粒,其活性由大到小依次为p-416＞p-584＞p-715＞p-350＞p-687＞p-320＞p-188＞p-92 除p-92与p-188片段外,其余各片段与PGL3-basic空载体的差异均有统计学意义（均P＜0.05）,其中以p-416片段活性最强,片段p-320与片段p-188之间出现较大活性落差.结论 IRX1基因上游序列启动子以p-416转录活性最高,核心启动子位于-320～-188区间,该区间具有Sp1、TFⅡD等转录因子结合序列,是下一步转录调控机制研究的重要位点.
- 郭晓波郭磊吴建林刘卫仁计骏张佳年刘炳亚朱正纲于颖彦
- 关键词：启动子报告基因胃黏膜细胞
- 胃癌4q28位点杂合性缺失的研究与候选基因FAT4表达的验证被引量：2
- 2009年
- 目的:研究胃癌组织中4q28位点杂合性缺失(LOH)的频率,并验证该位点候选基因FAT4mRNA表达情况。方法:在4q28位点选择与FAT4连锁的2个微卫星标记D4S2975和D4S1644,应用PCR产物毛细管电泳法分析68例手术切除的胃癌标本中这2个微卫星位点的LOH频率;应用RT-PCR法验证9个胃癌细胞株及39例新鲜胃癌加配对正常组织中该位点FAT4mRNA的表达水平。将相关检测结果与多种临床病理参数进行比较分析。结果:68例胃癌组织中D4S2975和D4S1644位点的LOH频率分别为35.56%(16/45)和40.74%(11/27),2个微卫星位点平均LOH频率为38.15%。检测39例新鲜胃癌及配对正常组织的FAT4mRNA表达水平,其中12例(30.77%)胃癌组织的FAT4mRNA表达较其配对正常组织明显下降。经与多种临床病理参数比较分析发现,FAT4mRNA表达下调与胃底贲门部胃癌密切相关(P=0.029),40岁以下青年型胃癌有FAT4表达丢失倾向,但差异无统计学意义(P=0.095)。结论:胃癌中4q28位点存在较高频率的LOH,对该位点内候选抑癌基因FAT4mRNA表达验证显示,部分胃癌组织存在FAT4表达下调,该基因下调与胃癌的发生部位及患者年龄间可能存在一定关系。
- 吴建林刘卫仁于颖彦计骏张佳年陈雪华刘炳亚朱正纲
- 关键词：胃肿瘤基因表达杂合性缺失
- 肿瘤血管形成的模型建立与显微图像定量分析研究被引量：6
- 2011年
- 目的利用显微图像分析法研究肿瘤新生血管相关模型。方法以人脐静脉内皮细胞和胃癌细胞系建立体外小管形成模型与血管拟态形成模型，以鸡的受精卵建立鸡胚尿囊膜活体血管形成模型，观察抑癌基因IRXl对血管形成和血管拟态形成的影响。显微镜所摄数字图片通过ImageProPlus（IPP）专业图像软件进行分析。通过计数点和线长度分析体外小管形成；通过吸光度法测量血管拟态的PAS阳性物质；通过计数法和角度测量法计算鸡胚尿囊膜血管数目。结果IRXl转基因组与空载体组及空白对照组相比，均显示了抑制血管形成能力，其小管形成数量三组分别为（12．80±3．83）、（29．00±5．34）和（28．20±4．32）个（P〈0．01），三组的小管连接点分别为（13．20±2．59）、（25．00±2．24）和（24．60±3．21）个（P〈0．01），三组的小管长度分别为（821．5±12．5）、（930．9±13．5）和（948．4±18．1）μm（P=0．022）。IRXl基因转染组的PAS阳性物质吸光度值（3606±363）显著低于空载体组（14200±1251）与空白对照组（15043±1220，P〈0．01）。IRXl基因转染组的鸡胚尿囊膜血管形成数量明显少于空载体组与空白对照组，三组角测量血管数量分别为（6．41±2．60）、（10．27±2．65）和（9．18±1．99）个（P〈0．01）。结论体外血管形成、血管拟态模型和鸡胚活体血管形成模型研究均显示，IRXl基因转染可以明显抑制新生血管形成；上述模型适用于以血管为靶点的基因干预或者药物筛选研究；专业图像分析软件在肿瘤血管形成的定量分析研究中可发挥一定的作用。
- 蒋金玲刘卫仁于颖彦倪培华吴建林计骏张佳年陈雪华刘炳亚朱正纲
- 关键词：新生血管化病理性生理性疾病模型
