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绿脓杆菌外毒素A常用肽编码基因的克隆与鉴定被引量：5: 2008年; 目的对绿脓杆菌外毒素A(pseudomonas aeruginosa exotoxinA,PEA)的常用肽编码基因进行克隆,为后续的基因改良奠定物质基础。方法以绿脓杆菌基因组DNA为模板,以PEA编码基因特异区段为引物,克隆绿脓杆菌外毒素A常用肽编码基因,经菌落PCR筛选出阳性克隆后再进行DNA测序分析。结果PCR产物克隆后,菌落PCR挑选得到了3个有意义的阳性克隆,DNA测序结果与GenBank中登录的序列之间一致性达99%。结论成功获得3个阳性克隆;选择适当的退火温度,采用Touchdown PCR,能保证顺利扩增出目的基因及保证扩增的特异性。; 刘绮明冯木林陶爱林; 关键词：绿脓杆菌外毒素A 基因克隆阳性克隆

铜绿假单胞菌外毒素A免疫毒素片段的抗原性评估及三级结构模拟: 2008年; 目的克隆铜绿假单胞菌外毒素A（PEA）基因及分析不同克隆序列中不同性质氨基酸对抗原性及三级结构的贡献。方法以铜绿假单胞菌基因组DNA为模板，以PEA编码基因特异区段为引物，采用Touchdown PCR克隆PEA编码基因。阳性克隆经菌落PCR鉴定后进行DNA测序及Clustal X（1．83）比对分析；采用生物信息学在线软件BIMAS及SWISS—Model对所得基因编码蛋白进行抗原性评估及三级结构模拟。人为置换关键部位的氨基酸残基，考察不同性质氨基酸对三级结构的影响。结果从铜绿假单胞菌DNA中获得3个克隆。抗原性分析及三级结构模拟结果显示，3个克隆与公开发表的序列之间存在少数氨基酸的差异；个别区段上氨基酸的改变可引起相应位点抗原性的改变，但仅有个别位点的改变对空间结构产生影响。结论基于抗原性评估及三级结构分析，获得了不同性质氨基酸对抗原性及三级结构的贡献等信息，为PEA编码基因用于弱化抗原性靶向性毒素的构建奠定了基础。; 冯木林陶爱林邹泽红刘绮明伍秋容赖荷; 关键词：基因克隆抗原性聚合酶链反应

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国家自然科学基金(30640033)