山西省科技攻关计划项目(042035)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：山西医科大学中国疾病预防控制中心首都儿科研究所更多>>
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- 相关领域：化学工程生物学更多>>
- 一种小肽的多顺反子串联表达方法被引量：1
- 2006年
- 目的:构建蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin,Ecs)多顺反子串联多拷贝基因。方法:以pMD18T-Ecs为模板,利用三对引物分别扩增Ecs基因,每个Ecs基因都有独立的起始和终止密码子,然后通过三个Ecs基因之间合适的酶切位点使之串联,再与表达载体pET30a连接后得到三拷贝重组质粒,在三个Ecs基因之间分别有SD序列和SD间隔序列。将质粒转化E.coliBL21(DE3)后IPTG诱导表达,18%SDS-PAGE和Westernblot鉴定结果。结果:Ecs的表达量占全菌总蛋白的18%,实现了Ecs的串联表达。结论:Ecs多顺反子的串联表达为小分子蛋白的体外制备提供了一种全新的思路和方法。
- 杨利军杨涛程牛亮解军张悦红牛勃
- 关键词：多顺反子大肠杆菌
- 蛇毒锯鳞蝰素融合蛋白的发酵与纯化被引量：2
- 2006年
- 研究大肠杆菌表达重组蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin,Ecs)融合蛋白的发酵和纯化工艺。将Ecs基因插入表达载体pTXB1,转化E.coliBL21(DE3)构建工程菌。对工程菌进行补料分批培养并诱导表达,研究培养基、培养和诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达的影响,几丁质亲和层析纯化Ecs融合蛋白,经DTT裂解后,检测Ecs活性。发酵后菌体湿重可达75g/L,融合蛋白表达量约占总蛋白的35%,重组质粒在BL21宿主菌中传代稳定。亲和层析纯化后,得到Ecs单体,得率为28mg/L发酵液。生物学活性分析显示,重组Ecs能有效抑制血小板的聚集,其活性与天然Ecs相似。优化了Ecs融合基因工程菌的发酵和纯化条件,为规模化生产奠定基础。
- 杨利军杨涛程牛亮解军牛勃王国亮杨琦
- 关键词：大肠杆菌发酵纯化
