国家自然科学基金(30470716)
- 作品数：7 被引量：48H指数：3
- 相关作者：李小鹰惠海鹏刘涛孙胜刘秀华更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院北京大学兰州军区乌鲁木齐总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组腺相关病毒为载体的心肌肌浆网钙离子ATP酶2a基因转导治疗慢性充血性心力衰竭:短期及中期作用(英文)被引量：1
- 2007年
- 背景:慢性充血性心力衰竭(CHF)时,心肌肌浆网钙离子ATP酶2a(sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase,SERCA2a)的蛋白表达和活性均明显降低,这导致钙离子的调控异常和心脏收缩和舒张功能不全。目的:观察腺相关病毒为载体的SERCA2a基因转导对CHF大鼠的短期和中长期治疗作用,探讨其治疗心力衰竭的多种可能的机制。设计:随机对照设计。单位:解放军总医院老年心内科和病理生理研究室。方法:将雄性SD大鼠随机分为,假手术组,CHF组,CHF+GFP组和CHF+SERCA2a组4组,每组又分为基因转导10,30d2个时间点,后3组采用腹主动脉缩窄术建立CHF大鼠模型,手术后18～20周,造模成功的大鼠进行经腹心包腔内注射,CHF组注射500μL无菌生理盐水,CHF+GFP组和CHF+SERCA2a组分别注射等量携带GFP基因和SERCA2a基因的重组腺相关病毒。主要观察指标:①于基因转导后10,30d,检测大鼠的血流动力学参数,应用WesternBlot方法检测SERCA2a蛋白表达;改良的Jones法测定SERCA2a活性。②应用蛋白质组学研究技术分析比较基因转导30d组中CHF和CHF+SERCA2a亚组大鼠的心肌蛋白质组表达的差异。③应用电泳分离和定量的方法检测基因转导30d组的各亚组大鼠心肌肌球蛋白重链亚型的表达情况。结果:①SERCA2a蛋白表达和活性:CHF组和CHF+GFP组低于假手术组。基因转导10d后,CHF+SERCA2a组与CHF组比较,SERCA2a蛋白表达增加80.7%,活性增加89.9%,但低于假手术组水平;基因转导30d后,CHF+SERCA2a组SERCA2a蛋白表达和活性已经达到假手术组大鼠水平。②心脏功能:基因转导10d后,CHF+SERCA2a组血流动力学指标中左室舒张末压力明显下降,其他指标明显升高,但未完全达到对照大鼠的心功能水平;基因转导30d后心脏收缩和舒张功能进一步改善,各项指标与假手术组比较差异不显著。③心肌蛋白质组的研究发现,基因转导30d后,CHF+SERCA2a组多种能量代谢的酶表达明显增加。④凝�
- 惠海鹏李小鹰刘秀华鲁晓春杨伟孙胜
- 关键词：腺相关病毒基因疗法
- 心肌肌浆网Ca^2＋-ATP酶基因转导改善慢性心力衰竭犬心功能的研究被引量：5
- 2008年
- 目的:探讨以重组腺相关病毒(rAAV)为载体的心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)基因转导对慢性心力衰竭犬心功能的影响。方法:选取成年比格犬17只,随机分为对照组4只和心力衰竭组11只。快速右心室起搏建立慢性心力衰竭犬模型并随机分为心力衰竭组4只、心力衰竭+绿色荧光蛋白(EGFP)组4只、心力衰竭+SERCA2a组5只(其中1只在开胸后死亡)。接受基因导入的心力衰竭犬行开胸术,分别向心肌内注射携带EGFP和SERCA2a基因的rAAV载体。于基因转导30d时停止起搏后进行超声心动图和血流动力学检查。结果:基因转导30d时,心力衰竭+SERCA2a组犬的症状及超声心动图指标与心力衰竭+EGFP组相比有显著好转(P<0.05);与对照组相比无显著差别。血流动力学监测发现,转导SERCA2a的犬LVSP、+dp/dtmax和-dp/dtmax明显升高,平均值较EGFP组分别增加54.12%[(214.72±31.74)mmHgvs(139.32±36.79)mmHg]、146.81%[(6779.43±217.58)mmHg/svs(2746.85±931.23)mmHg/s]和71.52%[(-4341.42±322.02)mmHg/svs(-2531.14±616.15mmHg/s)],LVEDP则降低了63.43%[(21.86±6.95)mmHgvs(59.78±6.92)mmHg],所有参数与对照组相比无显著差异。心力衰竭+EGFP组犬心肌冰冻切片在激光共聚焦显微镜下可见弥漫绿色荧光。结论:以rAAV为载体介导SERCA2a基因转导能够改善慢性心力衰竭犬心脏的收缩和舒张功能,是1种有前景的治疗慢性心力衰竭的方法。
- 付治卿李小鹰刘涛米亚非周声安叶卫华
- 关键词：充血性肌浆网CA^2+基因转移
- 腺相关病毒介导心肌肌浆网钙离子ATP酶2a基因转导对慢性心力衰竭大鼠的短期治疗作用被引量：3
- 2007年
- 目的研究腺相关病毒为载体的心肌肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)基因转导对慢性心力衰竭(CHF)大鼠的短期治疗作用。方法将大鼠分为4个组:对照组,CHF组,CHF+eGFP组和CHF+SERCA2a组。采用腹主动脉缩窄术建立慢性心力衰竭大鼠模型,应用经腹心包腔内注射术分别将生理盐水、携带eGFP基因的重组腺相关病毒和携带SERCA2a基因的重组腺相关病毒导入CHF组、CHF+eGFP组和CHF+SERCA2a组大鼠心脏。于导入后10天检测各组大鼠的心脏收缩和舒张功能、SERCA2a蛋白表达水平和活性。结果慢性心力衰竭大鼠心脏内转导入SERCA2a基因10天后,CHF+eGFP组SERCA2a蛋白表达水平和活性较CHF组大鼠明显增加(SERCA2a蛋白表达增加80.7%,活性增加89.9%),但低于对照组大鼠蛋白表达水平(约为对照组的67.6%)和活性水平(约为对照组的77.7%);大鼠的心脏功能随着SERCA2a功能的增强而改善,左室收缩压峰值和左室内压最大下降速率已达到对照组水平,左室舒张末压力和左室内压最大上升速率虽未达到对照组水平,但较CHF组明显改善。结论CHF大鼠心脏SERCA2a蛋白表达水平及活性较对照大鼠明显下降;SERCA2a基因转导对慢性心力衰竭具有良好的短期治疗作用。
- 惠海鹏李小鹰刘秀华鲁晓春孙胜刘涛
- 关键词：慢性心力衰竭腺相关病毒基因治疗
- 肌浆网钙ATP酶基因转导对慢性心力衰竭犬心肌蛋白质组影响的初步研究被引量：2
- 2008年
- 目的分析心肌肌浆网Ca^2＋-ATP酶（sarcoplasmic reticulum Ca^2＋ ATPase 2a，SERCA2a）基因转导对慢性心力衰竭（HF）犬心肌蛋白质组的影响，探讨SERCA2a基因转导改善心功能的机制。方法快速右心室起搏建立HF犬模型并随机分为HF组、HF＋绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）组、HF＋SERCA2a组。后两组分别向心肌内注射携带EGFP和SERCA2a基因的rAAV载体。于基因转导30d时停止起搏后进行超声心动图和血流动力学检查并制备心室肌双向电泳蛋白样品和心肌双向电泳图谱，图像分析软件分析蛋白表达差异点，MALDI-TOF-MS数据库搜索鉴定蛋白质。结果基因转导30d时，HF＋SERCA2a组犬的症状、超声心动图和血流动力学指标与HF＋EGFP组相比有显著好转（P〈0．05）；与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。挑选SERCA2a基因转导后表达量发生明显改变的10个蛋白点进行分析，经质谱鉴定分别为心肌收缩相关蛋白、线粒体能量代谢酶类和应激相关蛋白。结论以rAAV为载体介导SERCA2a基因转导能够改善HF犬心脏的收缩和舒张功能，其可能的机制是恢复了心肌收缩相关蛋白正常表型或正常表达量，增加了心肌能量的产生，改变了应激相关蛋白的表达。
- 付治卿李小鹰刘秀华孙胜刘涛米亚非周声安叶卫华王青松
- 关键词：肌浆网基因疗法心肌收缩
- 大鼠经腹心包腔内注射术的研究被引量：8
- 2005年
- 目的:探讨大鼠经腹心包腔内注射术的可行性、安全性、有效性及其在心脏疾病研究中的应用价值。方法:采用经腹心包腔内注射术,分别将染料、携带绿色荧光蛋白基因的重组相关腺病毒溶液和无菌等渗盐水注入相应组别大鼠心包腔内,然后分别进行尸检、血流动力学检测和冰冻切片荧光显微镜检查。结果:染料组大鼠尸检证明全部注射成功;绿色荧光蛋白组大鼠心肌组织在荧光显微镜下均发出弥漫的绿色荧光;绿色荧光蛋白组和等渗盐水组大鼠术中及术后无死亡,其血流动力学指标与正常对照组大鼠无差异。结论:经腹心包腔内注射术具有操作简单、可行性强、安全有效和适合实验小动物等优点,为研究心脏疾病提供了一种简单、有效、安全、经济的方法。
- 惠海鹏李小鹰彭江
- 关键词：注射心包腔手术
- 腺相关病毒介导心肌肌浆网Ca^(2+)-ATPase2a基因转导治疗大鼠慢性心力衰竭被引量：28
- 2006年
- 目的研究腺相关病毒为载体的心肌肌浆网Ca2+-ATPase2a(sarcoplasmicreticulumCa2+-ATPase,SERCA2a)基因转导对慢性心力衰竭(HF)大鼠的治疗作用,并探讨其多种可能的机理。方法采用腹主动脉缩窄术建立HF大鼠模型,应用经腹心包腔内注射术分别将生理盐水、携带eGFP基因和携带SERCA2a基因的重组腺相关病毒导入HF、HF+EGFP和HF+SERCA2a组大鼠心脏。于导入30天,检测各组大鼠的心脏功能、SERCA2a蛋白表达和活性;比较HF组和HF+SERCA2a组大鼠心肌蛋白质组表达的差异;检测各组大鼠心肌肌球蛋白重链(MHC)亚型的表达。结果HF大鼠心脏内转导入SERCA2a基因30天,心脏收缩和舒张功能达到对照组大鼠水平,并且HF+SERCA2a组左室重/体重比值显著降低;SERCA2a蛋白表达和活性明显升高至对照组大鼠水平;多种能量代谢酶表达明显增加;α-MHC、β-MHC的表达以及α-MHC/β-MHC恢复至对照组大鼠水平。结论以重组腺相关病毒2作为载体,SERCA2a基因转导可以增强衰竭心脏的SERCA2a功能,增加心脏能量代谢,纠正MHC亚型的异常表达;在临床方面表现为显著改善心脏收缩和舒张功能,可能能够减轻心脏肥厚等病理性结构改变。
- 惠海鹏李小鹰刘秀华孙胜鲁晓春刘涛杨伟
- 关键词：肌浆网钙调蛋白基因疗法
- 经腹心包腔内注射术在慢性心力衰竭大鼠基因治疗中的应用被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨在慢性心力衰竭大鼠中经腹心包腔内注射术的可行性、安全性和有效性及其在心脏疾病基因治疗中的应用价值;探讨SERCA2a基因转导对慢性心力衰竭的治疗作用。方法:采用腹主动脉缩窄术制备慢性心力衰竭模型。应用经腹心包腔内注射术,分别将携带绿色荧光蛋白(eGFP)基因的重组腺相关病毒和携带心肌肌浆网Ca2 + -ATPase(SERCA2a)基因的重组腺相关病毒转导入HF +EGFP组和HF +SERCA2a组大鼠心包腔内,30d后检测各组大鼠的血流动力学指标,荧光显微镜下检查绿色荧光蛋白表达情况和用Westernblot检测心肌肌浆网Ca2 +-ATPase蛋白的表达情况。结果:HF +EGFP组大鼠心肌组织在荧光显微镜下发出弥漫的绿色荧光。HF +SERCA2a组大鼠心肌表达心肌肌浆网Ca2 + -ATPase蛋白明显高于HF组和HF +EGFP组大鼠,因而,其心功能也较另外2组大鼠明显改善,达到正常大鼠的水平。结论:经腹心包腔内注射术为慢性心力衰竭的基因治疗提供了一种简单、有效、安全、经济的方法。SERCA2a基因转导为心力衰竭的治疗提供了一个新的思路。
- 惠海鹏李小鹰刘涛刘秀华孙胜
- 关键词：慢性心力衰竭心包腔基因治疗
