国家自然科学基金(30470701)
- 作品数：4 被引量：23H指数：3
- 相关作者：董波董秋立杨亚培于庆涛刘春喜更多>>
- 相关机构：山东大学教育部上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省科委基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 携带人血管内皮生长因子165基因的复制缺陷型腺病毒载体的构建和鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的:构建携带人血管内皮生长因子(VEGF)165基因的重组腺病毒载体。方法:应用EcoRⅠ和XbaⅠ酶切质粒PDC-VEGF和PDC315,连接DNA目的片段后转化大肠杆菌DH5α构建重组质粒PDC315-VEGF,对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定。通过脂质体将质粒PDC315-VEGF与质粒pBHGE3共转染293细胞获取重组腺病毒,以重组腺病毒DNA为模板,PCR鉴定构建的重组腺病毒。扩增、浓缩纯化重组腺病毒,微量滴定法测定腺病毒滴度。结果:通过连接反应构建重组质粒PDC315-VEGF,酶切分析和测序证明构建正确。经细胞内同源重组构建携带人VEGF165基因的重组腺病毒,PCR扩增421bpVEGF165片段,证实VEGF165基因成功克隆到复制缺陷型腺病毒载体,腺病毒滴度为5.0×109pfu/mL。结论:通过双质粒细胞同源重组,生产携带人VEGF165基因的重组腺病毒,为动物试验奠定基础。
- 周炜冯进波王旭平刘春喜姜虹王荣丁士芳
- 关键词：血管内皮生长因子类腺病毒载体基因重组
- 血管紧张素转化酶2基因转染对实验性动脉硬化兔斑块炎症的影响被引量：10
- 2009年
- 目的探讨血管紧张素转化酶2（ACE2）基因转染是否能通过使血管紧张素（Ang）Ⅱ转化为Ang1-7而抑制动脉硬化斑块的炎症反应。方法克隆小鼠ACE2基因，并构建复制缺陷重组腺病毒质粒Ad-ACE2；用球囊损伤内皮细胞及高脂饲养建立兔动脉硬化模型，喂养3个月，将38只新西兰大白兔随机分为Ad—ACE2及Ad—EGFP两组，每组19只。Ad—ACE2组注射ACE2的腺病毒（2．5×10^9pfu／ml）入兔的腹主动脉中，Ad-EGFP组注射Ad—EGFP，注射1个月后处死动物，取腹主动脉，检测巨噬细胞和单核细胞趋化因子（MCP-1）蛋白的表达；同时应用实时定量PCR检测MCP-1基因的表达。结果Ad—ACE2组的动脉硬化斑块中的巨噬细胞阳性表达率（13．6％±4．2％）明显低于Ad-EGFP组（23．6％±6．9％，P〈0．01）；而基因转染后MCP-1蛋白的表达（13．2％±0．4％）明显低于Ad—EGFP组（25．0％±7．4％，P〈0．01）。结论ACE2基因转染抑制了MCP-1的蛋白表达及巨噬细胞浸润程度，提示ACE2基因具有抑制动脉粥样硬化斑块炎症的作用。
- 董波张月辉董秋立于庆涛朱莉李树英杨亚培张澄冯进波刘春喜宋怀东潘春明张运
- 关键词：动脉硬化肽基二肽酶A基因转染
- ACE2基因过表达对糖尿病心肌病大鼠心功能的影响被引量：7
- 2008年
- 目的研究腺病毒为载体的血管紧张素转换酶-2(ACE2)基因转染对大鼠糖尿病心肌病(DCM)的治疗作用。方法采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,12周后分别将生理盐水、EGFP基因、ACE2基因注入对照组、EGFP组、ACE2组大鼠心脏。转染后10 d,实时荧光定量PCR比较各组大鼠ACE2mRNA的表达,转染后30d,超声检测各组大鼠的心脏功能,Masson染色测定心肌胶原含量,酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的水平。结果ACE2组分别与对照组和EGFP组比较,ACE2mRNA的表达明显升高(P<0.05),心脏收缩和舒张功能明显改善(P<0.05),心肌胶原和AngⅡ含量明显减少(P<0.01)。结论ACE2基因过表达可以改善糖尿病心肌病大鼠的心功能。
- 于庆涛高燕燕张蕾戴红艳杨亚培董秋立刘斌张永欢董波
- 关键词：糖尿病肽基二肽酶A血管紧张素II基因疗法
