国家自然科学基金(81020108019)
- 作品数：5 被引量：31H指数：3
- 相关作者：金岩刘琪夏佳佳王岚程姝丽更多>>
- 相关机构：第四军医大学杭州市滨江医院浙江大学医学院附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省省长基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- miR-21调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的研究被引量：5
- 2015年
- 目的:观察miR-21在人骨髓间充质干细胞(h BMMSCs)成骨分化过程中的表达。方法:通过转染使h BMMSCs过表达或抑制miR-21后,分别采用ALP染色、茜素红染色观察各组ALP活性和钙化结节的表达形成量;并采用Real time RT-PCR、Western blot检测各组成骨相关基因Runxz、osterixmRNA及其蛋白的表达水平,以观察miR-21对h BMMSCs体外成骨分化的调控作用。将表达不同水平miR-21的各组h BMMSCs与HA/TCP复合后植入裸鼠皮下,8周后取材,采用HE染色和Masson三色染色观测各组类骨质的形成量。结果:miR-21在h BMMSCs成骨过程中表达量较对照组明显升高(P<0.05)。过表达miR-21能促进h BMMSCs体外成骨分化及体内的异位成骨能力;而抑制miR-21则能降低h BMMSCs体外成骨分化及体内的异位成骨能力。结论:miR-21可外调控h BMMSCs成骨分化,在骨形成过程发挥作用。
- 杨楠周威王光丁寅金岩
- 关键词：MIR-21成骨分化
- 脂多糖对人牙周膜干细胞增殖及炎性因子表达的影响被引量：17
- 2013年
- 目的观察牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)对人牙周膜干细胞(HPDLSCs)增殖及炎性因子表达的影响。方法培养和鉴定HPDLSCs。实验分为3组,A组采用含有10μg.mL-1LPS的α-MEM培养液培养HPDLSCs,B组采用含有10 ng.mL-1LPS刺激单核细胞的上清液培养HPDLSCs,C组采用α-MEM培养液培养HPDLSCs。MTT法检测HPDLSCs的增殖能力,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HPDLSCs白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达。结果 HPDLSCs具有克隆形成能力和骨向及脂向分化能力。与C组相比,A组和B组均抑制HPDLSCs的增殖,且B组比A组的抑制作用更明显(P<0.05);A组和B组IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达均增加,且B组比A组增加更明显(P<0.05)。结论牙龈卟啉单胞菌可通过LPS直接或间接地一方面抑制HPDLSCs的增殖,另一方面增加炎性因子的表达,从而加重牙周炎症组织的损伤,延缓牙周组织的自我修复。
- 王岚夏佳佳刘琪金岩
- 关键词：脂多糖人牙周膜干细胞炎性因子
- 人ALPL基因慢病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:构建肝/骨/肾型碱性磷酸酯酶(alkaline phosphatase,liver/bone/kidney,ALPL)基因慢病毒表达载体并观察其在骨髓间充质干细胞(BMMSC)中的表达情况,为进一步研究ALPL基因功能提供基础工具。方法:将PCR扩增的人ALPL基因片段和pENTR-2B入门质粒载体的双酶切产物进行连接后,转化感受态细胞;再将所得的pENTR-2B-ALPL入门质粒与Plenti6.3/V5-DEST载体进行重组,并经DNA测序鉴定后,转染GP2-293T细胞,制备慢病毒颗粒;最后用含Plenti6.3-ALPL表达载体的病毒感染BMMSC,并通过ALP染色、RT-PCR、Western blot检测ALPL基因和组织非特异性碱性磷酸酶(tissue-nonspecific alkaline phosphatase,TNAP)的表达。结果:PCR和测序证实人ALPL基因正确插入慢病毒载体;ALP染色、RT-PCR、Western blot检测结果显示,人ALPL慢病毒过表达质粒及相应病毒颗粒能在BMMSC中有效过表达ALPL基因。结论:成功建立ALPL慢病毒表达系统,并为后期深入了解TNAP功能打下了基础。
- 陈哲张立强张文凯付欣轩昆金岩
- 关键词：慢病毒表达载体骨髓间充质干细胞
- 雌激素对小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的抑制作用及其机制研究被引量：6
- 2012年
- 目的:检测雌激素浓度与小鼠骨髓间充质干细胞(mBMMSCs)凋亡的相关性,初步探讨雌激素调节mBMMSCs凋亡的分子机制。方法:构建雌性C57BL小鼠去势模型,模拟绝经期妇女低雌激素体质。分别取去势和假手术组小鼠以及正常小鼠mBMMSCs进行原代分离、培养和鉴定。利用流式细胞术(FCM)比较去势和假手术两组细胞的凋亡差异,以及不同雌激素浓度培养条件对正常C57BL小鼠mBMMSCs凋亡的影响。参考文献中芯片结果,利用实时定量PCR方法检测miR-21在去势组及假手术组mBMMSCs中的表达差异,以及不同雌激素浓度培养条件下正常小鼠mBMMSCs中miR-21的表达差异。结果:成功构建了去势小鼠模型。利用FCM证实去势小鼠骨髓间充质干细胞在体外培养的过程中较假手术组更易凋亡。正常小鼠mBMMSCs体外培养过程中,随着雌激素浓度的升高,其凋亡减少。去势鼠来源mBMMSCs中miR-21表达量低于假手术组来源mBMMSCs。高浓度雌激素培养液培养的mBMMSCs中miR-21表达高于低浓度雌激素培养液培养的mBMMSCs。结论:雌激素对mBMMSCs的凋亡具有抑制作用,miR-21可能参与这一过程。
- 程姝丽丁寅
- 关键词：雌激素骨髓间充质干细胞凋亡MIR-21
- 大鼠牙囊细胞多向分化潜能的体外研究被引量：2
- 2011年
- 目的:体外研究用差速贴壁法和有限稀释法纯化的大鼠牙囊细胞(Dental foilicle cells,DF-Cs)的多向分化潜能,为用于口腔组织工程的种子细胞奠定基础。方法:体式显微镜下准确分离7 d龄SD大鼠第一磨牙牙囊组织,使用酶消化法、有限稀释法、差速贴壁法进行培养和纯化细胞,取第3代细胞分别进行以下检测:①流式细胞仪鉴定细胞表面抗原标记;②骨向诱导、成脂诱导、成神经诱导和相关检测。结果:①差速贴壁法和有限稀释法纯化培养的大鼠牙囊细胞大多呈长梭形,部分细胞呈三角形,细胞形态呈现异质性;②流式细胞仪检测结果显示所获得的牙囊干细胞表面标记CD29、CD90阳性率分别为95.6%、98.6%,而CD45的阳性率仅为4.2%;③成骨诱导后,茜素红染色呈阳性,ALP染色显示ALP表达增强明显;成脂诱导后细胞胞浆内可见明显脂滴,油红O染色呈阳性;神经细胞诱导后细胞形态发生明显改变,神经微管蛋白染色呈阳性。结论:体外培养的大鼠牙囊细胞具有较强的多向分化能力,可作为口腔组织工程理想的种子细胞。
- 宫坤朱国雄郭维华杨杰梁世桢金岩
- 关键词：牙囊干细胞分化种子细胞
