国家自然科学基金(30860351) 作品数:6 被引量:83 H指数:5 相关作者: 孙坚 何士勤 张清 杨斌 段林建 更多>> 相关机构: 南昌大学第四附属医院 南昌大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江西省卫生厅中医药科研基金 江西省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
中药治疗甲型流感作用机制的研究进展 被引量:6 2012年 甲型流感(甲流)严重危害人类健康,中草药作为祖国传统医学宝藏在抗流感方面具有疗效可靠、资源丰富、毒副作用小等优点,越来越受到世界关注。本文从甲型流感病毒结构与功能出发,阐述中药治疗甲流作用机制的研究进展。 段林建 孙坚 何士勤关键词:甲型流感 甲型流感病毒 中药治疗 不同连翘制剂对甲型流感病毒NP基因转染后表达的影响 被引量:12 2015年 目的:观察连翘苷、连翘醇提液、连翘水煎剂等3种连翘制剂对甲型流感病毒甲1型流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)基因转染后表达的影响。方法:将甲型流感病毒NP基因转染Hela细胞,用甲型流感病毒胶体金检测3种连翘制剂对转染后细胞内和上清核蛋白表达情况,用RT-PCR检测转染后Hela细胞内NP基因的拷贝数。结果:NP重组质粒组上清胶体金检测为阳性,连翘苷组上清为阴性、细胞内为弱阳性;连翘水煎剂及连翘醇提物组上清均为弱阳性。连翘苷组NP基因表达量较NP重组质粒组减少(P<0.05)。结论:连翘苷抑制甲型流感病毒NP基因转染后表达作用最强。 段林建 胡伶清 张清 杨斌 何士勤 孙坚关键词:连翘苷 甲型流感病毒 NP基因 三种板蓝根制剂对流感病毒核蛋白表达的影响 被引量:16 2010年 目的探讨不同板蓝根制剂对甲型流感病毒核蛋白(NP)的作用,寻找抗流感病毒中药的有效成分。方法采用传统水煮浸法提取的板蓝根水煎液和有机溶剂浸泡法提取的板蓝根凝集素及购买的板蓝根注射液,用细胞病变效应(CPE)法测得三种制剂试验浓度分别为1.95、2.60、0.78 mg/ml。将培养的Hela细胞分为八组,质粒组转染pcDNA3.1(+)/NP,空质粒组转染pcDNA3.1(+);注射液、水煎液、凝集素实验组则将板蓝根注射液、水煎液、凝集素的试验浓度分别作用于转染重组质粒pcDNA3.1(+)/NP的Hela细胞,三种制剂对应的对照组不进行转染,仅将对应制剂作用于Hela细胞。用胶体金免疫层析法和间接免疫荧光法检测各组NP表达。结果质粒组、注射液及水煎液实验组胶体金试验阳性,免疫荧光法证实作用转染的Hela细胞仍发出较强绿色荧光,且表达的NP定位于细胞质中;而凝集素组及空质粒组中表达NP的细胞未出现较强的绿色荧光且胶体金试验阴性。结论板蓝根凝集素可抑制NP基因表达,此为研发抗流感病毒的药物提供了新思路。 徐咏书 孙坚 何士勤关键词:流感病毒 板蓝根 核蛋白 转染 黄芩总黄酮对甲型流感病毒核蛋白表达的影响 被引量:7 2012年 目的探讨黄芩总黄酮(Total flavonoids of Scutellaria baicalensis Georgi,TFSB)对甲型流感病毒核蛋白(NP)的干预作用。方法本实验设HeLa细胞组、pcDNA3.1(+)空载体组、pcDNA3.1(+)/NP组、TFSB组,其中pcDNA3.1(+)空载体组、pcDNA3.1(+)/NP组分别通过瞬时转染将重组质粒pcDNA3.1(+)、pcDNA3.1(+)/NP转染到HeLa细胞中;TFSB组在将重组质粒pcDNA3.1(+)/NP转染到HeLa细胞的同时使用TFSB进行药物干预。转染48 h后,采用胶体金免疫层析试纸法测维持液中NP的表达,荧光定量RT-PCR测NP基因起始核酸量。结果胶体金免疫层析试纸法测NP表达示:pcDNA3.1(+)/NP组、TFSB组为阳性;荧光定量RT-PCR示:pcDNA3.1(+)/NP组和TFSB组NP基因起始拷贝数分别为(8.90±2.53)×106copies/μl、(6.15±1.49)×106copies/μl,采用t检验进行统计学分析:差异无统计学意义(P>0.05)。结论黄芩总黄酮对甲型流感病毒NP基因和NP的表达没有影响。 张清 杨斌 王农荣 段林建 何士勤 孙坚关键词:黄芩总黄酮 核蛋白 抗流感病毒药 瞬时转染 连翘苷对甲型流感病毒核蛋白基因表达的影响研究 被引量:53 2012年 目的探讨连翘苷对甲型流感病毒核蛋白(NP)基因转染后表达的影响。方法将甲型流感病毒NP基因转染Hela细胞,用甲型流感病毒胶体金法检测连翘苷对转染后细胞内和上清核蛋白表达情况,用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hela细胞内NP基因的拷贝数。结果 NP重组质粒组甲型流感病毒核蛋白含量高。空质粒组、脂质体组、Hela细胞组基本不含甲型流感病毒核蛋白。连翘苷组上清无或可能含有微量核蛋白。连翘苷组胞内甲型流感病毒含量不高。RT-PCR校正曲线相关性为0.998,效率为97.4%。重复4次转染后48 h连翘苷组NP基因表达量为(2.1±0.3)×105拷贝数/μl,NP重组质粒组NP基因表达量为(61.5±15.0)×105拷贝数/μl,连翘苷组NP基因表达量低于NP重组质粒组,差异有统计学意义(t=7.672,P<0.05)。结论连翘苷可以抑制甲型流感病毒NP基因转染后表达。 段林建 张清 王农荣 杨斌 何士勤 孙坚关键词:连翘苷 甲型流感病毒 NP基因 鱼腥草及三丫苦对甲型流感病毒NPAG表达的影响 被引量:3 2014年 目的探讨鱼腥草及三丫苦对甲型流感病毒(nucleo protein antigen,NPAG)表达的影响,了解鱼腥草及三丫苦抗甲型流感病毒的分子机制。方法以胶体金法测定NPAG的表达。瞬间转染,实验分为:Hela细胞组、空质粒组[PCDNA3.1(+)/empty]、重组质粒组[PCDNA3.1(+)/NP)]、脂质体组、三丫苦醇提物组和鱼腥草油组。药物实验加入重组质粒同时将药物加入培养细胞孔中进行干预。转染48h后,测定其上清液NPAG的表达。结果胶体金法测试显示:Hela细胞组、PCDNA3.1(+)/empty组、脂质体组、鱼腥草油组为阴性;PCDNA3.1(+)/NP组、三丫苦醇提物为阳性,NPAG浓度1:64。结论鱼腥草油组可抑制甲型流感病毒NPAG的表达,能抗甲型流感病毒。三丫苦醇提物组不影响NPAG的表达。 杨斌 杨慧 王农荣 屈林 张清 段林建 何士勤 孙坚关键词:甲型流感病毒 胶体金法