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香烟烟雾提取物对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及蛋白激酶C的相关作用被引量：2: 2008年; 目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)对人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响及蛋白激酶C(PKC)信号转导途径在其中所起的作用。方法①不同浓度的CSE作用于人PASMC24h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测PASMC增殖,锥虫蓝排斥法检测活细胞率。②PASMC与PKC激活剂PMA预孵24h或与PKC抑制剂Ro31-8220(简称Ro)预孵30min,然后暴露于5%CSE24h,采用MTT法、流式细胞术、增殖细胞核抗原(PCNA)免疫细胞化学染色等方法观察细胞增殖的变化。③5%CSE作用于PASMC24h,采用RT-PCR和Western blot方法分别检测PKC-α mRNA和蛋白的表达。结果①20%和30%的CSE对PASMC有细胞毒性作用;5%和10%CSE不影响PASMC的活细胞率;MTT检测结果示5%CSE组PASMC的吸光度(A)值较对照组明显增高。②5%CSE组PASMC的MTTA值、增殖指数(PI)、S期细胞分数(SPF)、PCNA阳性表达率增高,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。PMA+5%CSE组和Ro+5%CSE组以上指标均降低,与5%CSE组比较,差异有显著性意义(P<0.05),与对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。③5%CSE组PKC-α mRNA和蛋白表达量增加,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论高浓度的CSE对PASMC有细胞毒性作用,低浓度(5%)的CSE则能促进PASMC的增殖。PKC特别是PKC-α可能在CSE促人PASMC增殖的信号转导机制中起重要作用。; 胡静徐永健张珍祥田锋; 关键词：吸烟蛋白激酶C 肺动脉细胞增殖

Effects of Puerarin on Pulmonary Vascular Remodeling and Protein Kinase C-α in Chronic Cigarette Smoke Exposure Smoke-exposed Rats被引量：2: 2008年; In order to investigate the effects of puerarin on pulmonary vascular remodeling and protein kinase C-α (PKC-α) in chronic exposure smoke rats, 54 male Wistar rats were randomly di-vided into 7 groups: control group (C group), smoke exposure groups (S4w group, S8w group), puer-arin groups (P4w group, P8w group), propylene glycol control groups (PC4w group, PC8w group). Rats were exposed to cigarette smoke or air for 4 to 8 weeks. Rats in puerarin groups also received puer-arin. To evaluate vascular remodeling, alpha-smooth muscle actin (α-SM-actin) staining was used to count the percentage of completely muscularised vessels to intraacinar pulmonary arteries (CMA/IAPA) which was determined by morphometric analysis of histological sections. Pulmonary artery smooth muscle cell (PASMC) apoptosis was detected by in situ end labeling technique (TUNEL), and proliferation by proliferating cell nuclear antigen (PCNA) staining. Reverse transcrip-tion-polymerase chain reaction (RT-PCR), immunofluorescence staining and Western blot analysis were done to detect the PKC-α mRNA and protein expression in pulmonary arteries. The results showed that in cigarette smoke-exposed rats the percentage of CMA/IAPA and α-SM-actin expres-sion were increased greatly, PASMC apoptosis was increased and proliferation was markedly in-creased; Apoptosis indices (AI) and proliferation indices (PI) were higher than in C group; AI and PI were correlated with vascular remodeling indices; The expression of PKC-α mRNA and protein in pulmonary arteries was significantly higher than in C group. In rats treated with puerarin, the per-centage of CMA/IAPA and cell proliferation was reduced, whereas PASMC apoptosis was increased; The expression levels of PKC-α mRNA and protein were lower than in smoke exposure rats. There was no difference among all these data between S groups and PC groups. These findings suggested that cigarette smoke-induced pulmonary vascular remodeling was most likely an effect of the imbal-ance of PASMC proliferation and apopto; 朱朝霞徐永健邹晖张珍祥倪望陈士新; 关键词：蛋白激酶

结缔组织生长因子在烟雾暴露大鼠肺血管重塑中的作用被引量：1: 2007年; 目的研究烟雾暴露大鼠在体应用结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASON)对肺血管重塑的影响,探讨 CTGF 在烟雾暴露致肺血管重塑中的作用。方法 35只大鼠按随机数字表法分为正常对照组(A 组)、烟雾暴露1个月组(B 组)、烟雾暴露+大剂量 CTGF ASON 1个月组(C组)、烟雾暴露+小剂量 CTGF ASON 1个月组(D 组)、烟雾暴露2个月组(E 组)、烟雾暴露+大剂量CTGF ASON 2个月组(F 组)、烟雾暴露+小剂量 CTGF ASON 2个月组(G 组),每组5只。用苏木精-伊红(HE)染色观察肺血管重塑;用免疫组化法观察 CTGF 在肺动脉中的表达;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺动脉 CTGF mRNA 表达。采用 SPSS 12.0软件,数据以±s表示,组间差异显著性检验采用方差分析,两两比较采用 q 检验,相关分析采用直线回归法,P<0.05为差异有统计学意义。结果 (1)A 组肺动脉管壁面积/管总面积(WA%)为(28.6±1.2)%、B 组为(42.5±2.3)%、C组为(33.7±1.8)%、D 组为(42.1±2.4)%、E 组为(49.6±2.1)%、F 组为(34.3±1.9)%、G 组为(38.4±2.0)%。C 组与 B 组比较差异有统计学意义(q=5.09,P<0.01),F、G 组与 E 组比较差异均有统计学意义(q 值分别为8.15、3.75,P 均<0.05);(2)A 组肺动脉平滑肌 CTGF 蛋白表达吸光度(A)值为0.098±0.015、B 组为0.159±0.023、C 组为0.118±0.017、D 组为0.153±0.022、E 组为0.406±0.036、F 组为0.109±0.012、G 组为0.146±0.024。C 组与 B 组比较差异有统计学意义(q=3.26,P<0.05),F、G 组与 E 组比较差异均有统计学意义(q 值分别为67.08、18.09,P 均<0.01);(3)A 组肺动脉 CTGF mRNA 表达为0.051±0.010、B 组为0.823±0.096、C 组为0.216±0.056、D 组为0.810±0.085、E 组为2.452±0.267、F 组为0.207±0.062、G 组为0.509±0.067。C 组与 B 组比较差异有统计学意义(q=53.50,P<0.01),F、G 组与 E 组比较差异均有统计学意义(q 值分别为132.22、93.70,P 均<0.01)。结论应用 CTGF ASON 可显著降低烟雾暴露诱导的大鼠肺血; 田锋徐永健张珍祥范新蕾胡静; 关键词：血管结缔组织生长因子反义寡核苷酸

烟雾暴露和低氧单独及联合作用对大鼠肺血管重建及蛋白激酶C-α表达的影响被引量：3: 2005年; 目的探讨烟雾暴露和低氧单独及联合作用对大鼠肺血管重建及蛋白激酶C-α(PKC-α)表达的影响。方法健康雄性W istar大鼠56只,随机分为正常对照组(C组)、烟雾暴露组(S4W组和S8W组)、低氧组(H4W组和H8W组)和烟雾暴露+低氧组(SH4W组和SH8W组),复制大鼠慢性烟雾暴露及低氧模型。右心导管法记录并测定平均肺动脉压(mPAP),分离心脏计算右心室肥厚指数(RVH I)。弹力纤维染色计算腺泡内肺动脉3种类型血管的构成比及肺动脉管壁骨架蛋白(α-SM-actin)染色显示肺血管重建,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡、增殖细胞核抗原(PCNA)染色检测细胞增殖、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PKC-αmRNA表达,免疫荧光及W estern b lot检测PKC-α蛋白表达。结果与C组大鼠mPAP[(14±4)mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa]比较,H4W、H8W、SH4W、SH8W组大鼠mPAP均显著增高[(31±7)(32±8)、(32±9)、(31±10)mm Hg,P均<0.01],而S4W、S8W组均无显著升高[(15±5)、(16±6)mm Hg,P均>0.05]。S4W、S8W、H4W、H8W、SH4W和SH8W组大鼠RVH I(0.258±0.024、0.394±0.021、0.374±0.020、0.414±0.019、0.434±0.023、0.442±0.020)、肌型动脉占血管总数的百分比[(33.5±6.8)%、(41.1±9.8)%、(35.9±6.6)%、(46.0±6.3)%、(42.9±6.5)%、(50.2±9.9)%]及α-SM-actin表达(53±15、75±14、56±11、82±17、83±17、98±16)均显著高于C组(P均<0.01),凋亡指数(2.5±1.0、3.8±1.4、2.3±1.1、3.3±1.1、3.5±1.4、4.8±1.4)和增殖指数(33.1±11.8、43.8±11.0、36.5±10.6、46.3±12.1、45.3±12.4、53.3±13.4)均高于C组(P均<0.01)。肺动脉PKC-αmRNA和蛋白的表达均增强(P均<0.01)。且SH4W、SH8W组各指标分别与H4W、H8W组比较,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论烟雾暴露和低氧均能诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡与增殖,导致肺血管重建,二者协同作用能加重肺血管重建;激活PKC信号转导途径可能是其部分机制。; 朱朝霞徐永健邹晖张珍祥倪望陈仕新; 关键词：低氧蛋白激酶C 血管重建增生

吸烟和慢性阻塞性肺疾病患者肺血管重建及蛋白激酶C-α表达的研究: 2005年; 目的探讨吸烟和慢性阻塞性肺病(COPD)患者肺血管重建及蛋白激酶C-α(PKC-α)mRNA和蛋白质的表达情况。方法非吸烟非COPD(Controls组)、吸烟非COPD(Smokers组)和吸烟COPD(COPD组)男性肺癌患者各11人,年龄相匹配,取其行肺叶切除术后的外周肺组织。采用免疫组织化学方法检测肺动脉平滑肌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)及肺小动脉αSMactin染色以显示肺血管重建,逆转录聚合酶链反应(RTPCR)对肺小动脉PKCαmRNA表达进行半定量,免疫荧光及Westernblot法检测肺小动脉PKC-α蛋白质表达。结果吸烟非COPD和吸烟COPD患者肺血管重构明显,两组患者肺动脉平滑肌细胞的增殖指数和α-SMactin表达量均明显高于非吸烟非COPD(P<0.001)。吸烟COPD患者肺血管重构更明显,肺动脉平滑肌细胞的增殖指数和αSMactin表达量均高于吸烟非COPD(P<0.001,P<0.05)。吸烟非COPD患者肺小动脉PKCα在转录和翻译两个水平的表达均明显高于非吸烟非COPD患者(P<0.001);吸烟COPD患者动脉血氧分压PaO2明显低于吸烟非COPD患者(P<0.05),肺小动脉PKCαmRNA及蛋白质表达水平均明显高于吸烟非COPD患者(P<0.01)。结论长期吸烟导致肺血管重建,既有香烟的直接作用,又有长期吸烟诱导COPD的低氧因素,其机制可能是通过细胞内PKC生物信号传导通道。; 朱朝霞徐永健邹晖张珍祥周玉龙倪望陈仕新; 关键词：蛋白激酶C 吸烟慢性阻塞性肺疾病血管重建

CTGF在烟雾暴露大鼠肺血管中的表达及其与肺血管重建的关系被引量：3: 2008年; 目的:探讨烟雾暴露致大鼠肺血管重建中结缔组织生长因子(CTGF)表达的变化及意义。方法:24只大鼠随机分为对照组、烟雾暴露1、2和3月组,HE染色观察肺血管重建,天狼猩红染色检测胶原增殖,免疫组化观察CTGF在肺动脉中的表达,RT-PCR检测肺动脉CTGFmRNA表达。结果:随烟雾暴露时间延长,肺动脉管壁面积/管总面积(WA%)、胶原沉积、CTGFmRNA和蛋白表达呈时间依赖性增加(组间P<0.01)。CTGF表达与WA%呈正相关。结论:大鼠烟雾暴露后早期即出现肺血管重建,且随时间延长逐渐加重,CTGF在肺动脉中的表达逐渐升高,可能在此过程中起重要作用。; 田锋徐永健张珍祥胡静范新蕾; 关键词：结缔组织生长因子肺动脉

香烟烟雾提取物通过PKC途径促进大鼠肺动脉平滑肌细胞bFGF表达被引量：3: 2008年; 目的:研究香烟烟雾提取物(CSE)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及蛋白激酶C(PKC)信号转导途径在其中所起的作用。方法:组织块法培养正常Wistar大鼠PASMCs。5%CSE作用于PASMCs不同时间及PASMCs先与PKC特异性抑制剂Ro31-8220预孵育,然后再暴露于5%CSE,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PASMCs bFGF mRNA表达,免疫细胞化学检测bFGF蛋白表达。结果:对照组PASMCs中有少量bFGF mRNA和蛋白表达(分别为0.093±0.034,0.142±0.013)。暴露于5%CSE后4h细胞内bFGF mRNA和蛋白表达增加,mRNA于8h达高峰(0.436±0.103,P<0.01),蛋白于12h达高峰(0.237±0.031,P<0.01),此后逐渐下降,但24h都仍高于对照组。Ro31-8220预孵育可显著抑制5%CSE诱导的bFGF mRNA和蛋白表达增加。结论:5%CSE可通过激活PKC途径促进大鼠PASMCs bFGF的表达。; 胡静徐永健张珍祥田锋; 关键词：成纤维细胞生长因子2 肺动脉蛋白激酶C

结缔组织生长因子在吸烟者及慢性阻塞性肺疾病患者肺血管中的表达及其与肺血管重塑的关系被引量：5: 2007年; 目的探讨吸烟者及慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的肺血管重塑中结缔组织生长因子(CTGF)的表达及意义。方法取24份(非吸烟对照组、吸烟组、吸烟伴 COPD 组,每组8例)手术切除的肺组织,HE 染色观察肺血管重塑,天狼猩红染色检测胶原增殖,免疫组化观察 CTGF 在肺动脉的表达,RT-PCR 检测肺动脉 CTGF mRNA 表达。结果 (1)肺动脉管壁面积/管总面积(WA%),非吸烟对照组为(28.4±4.7)%,吸烟组为(46.3±3.5)%,吸烟伴 COPD 组为(55.5±3.9)%(P<0.01)。HE 染色可见,吸烟组、吸烟伴 COPD 组肺动脉管壁明显增厚。(2)肺动脉壁胶原厚度,非吸烟对照组为(6.4±1.6)μm,吸烟组为(15.9±2.4)μm,吸烟伴 COPD 组为(16.4±2.3)μm(P<0.01)。天狼猩红染色可见,吸烟组、吸烟伴 COPD 组肺动脉管壁胶原明显增多。(3)CTGF mRNA 表达量,非吸烟对照组为0.095±0.015,吸烟组为0.396±0.167,吸烟伴 COPD 组为0.501±0.177(P<0.01)。(4)CTGF 蛋白表达量,非吸烟对照组为0.085±0.011,吸烟组为0.245±0.095,吸烟伴 COPD组为0.303±0.191(P<0.01)。(5)相关分析:CTGF mRNA 及蛋白表达量与 WA%呈正相关(r 分别为0.915、0.919,P<0.01)。结论单纯吸烟者即有肺血管重塑,吸烟伴 COPD 者的肺血管重塑程度更重,CTGF 可能在此过程中起重要作用。; 田锋徐永健张珍祥胡静; 关键词：肺动脉结缔组织生长因子

Effect of cigarette smoke extract on proliferation of rat pulmonary artery smooth muscle cells and the relevant roles of protein kinase C被引量：9: 2007年; 背景增加了肺的脉管的房间的增长，肺的容器的 muscularisation 经常在人的吸烟者并且在暴露于香烟烟的动物被观察。阐明导致这些变化的分子的机制，我们学习了在里面肺的动脉的增长上的香烟烟摘录( CSE )的 vitro 效果光滑的肌肉房间( PASMC )和蛋白质 kinase C ( PKC )的激活，重要 kinase 在从 12 只正常 Wistar 老鼠有教养的房间 proliferation.Methods PASMC 含有处于下列条件被学习：(1 ) PASMC 暴露于 CSE 的不同集中 24 个小时，然后， MTT 比色的试金被用于房间增长的察觉。房间生存能力被 trypan 蓝色排除估计。(2 ) PASMC 与 phorbol 12 十四酸盐 13 醋酸盐(PMA ) 被预先孵化 24 个小时或为 30 的 Ro31-8220 以前纪录暴露到 5% CSE 24 个小时。房间增长被 MTT 比色的试金，房间周期分析和增殖的房间检验染色的原子抗原(PCNA ) immunocytochemical。(3 ) PASMC 暴露于 5% CSE 24 个小时。然后， PKC- mRNA 表示被西方的弄污被反向的抄写聚合酶链反应(RT- PCR ) 和蛋白质表示检测，当 PKC- translocation 被 immunofluorescence 染色和共焦的显微镜学观察时。(4 ) PASMC 是有对在到 5% CSE 的暴露前的 PKC- 6 小时的特定的 antisense oligodeoxynucleotides 的 transfected 为 24 个小时。PKC- 蛋白质表示和房间增长被方法检测 CSE (5%) 的低集中增加了的描述的 previously.Results (1 ) PASMC 的增长，而高集中(20%,30%) 由于 cytotoxicity 是禁止的。( 2 )吸收度(价值 A )的价值，增长索引( PI )，S阶段房间部分( SPF )和从5% CSE 暴露在 PASMC 染色的 PCNA 的平均光密度组织( 0.306 ?????????????????????????????????數潮敧敮捩?吗???????湯汣獵潩獮????????????潰祬汣湯污？？; HU Jing XU Yong-jian ZHANG Zhen-xiang TIAN Feng; 关键词：肺动脉蛋白激酶C

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国家自然科学基金(30470759)

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