国家自然科学基金(30470763)
- 作品数：5 被引量：22H指数：3
- 相关作者：黄宁王伯瑶吴琦熊文碧李恒更多>>
- 相关机构：四川大学扬州大学成都学院(成都大学)四川抗菌素工业研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金美国中华医学基金会项目美国中华医学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人宫颈黏液HMGN2鉴定及在宫颈组织的表达
- 2008年
- 为探讨人子宫颈黏液的抗菌机制,采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高压液相色谱技术,从人子宫颈黏液酸溶性提取物鉴定出对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抗菌活性的多肽HCP-21和HCP-26.蛋白质N端氨基酸序列测定和精确质谱分子质量测定证明,HCP-21为HMGN2,HCP-26为SLPI片段.提取原代培养宫颈上皮细胞的总RNA,采用RT-PCR技术扩增出一条与HMGN2 cDNA大小相同(270bp)目的基因片段,表明在生理状况下,宫颈上皮细胞即可表达其mRNA.制备HMGN2多克隆抗体,对生理状态下宫颈组织切片和宫颈黏液涂片进行HMGN2分子免疫组化分析表明,该分子主要分布于子宫颈黏膜层,并存在于子宫颈黏液.HMGN2分子在宫颈黏膜上皮组织和黏液中固有表达,可能在子宫颈天然免疫防御中起重要作用.
- 王莉莉何跃东黄宁李明熊文碧冯云吴琦王伯瑶潘小玲
- 关键词：女性生殖道子宫颈抗菌肽HMGN2
- HMGN2的重组表达质粒的构建及其抗菌功能研究被引量：7
- 2005年
- 目的:构建HMGN2重组表达载体,探讨HMGN2分子抗菌作用。方法:用基因克隆的方法构建pET-32 a-c(+)-HMGN2重组表达质粒,经IPTG诱导表达后,用亲和层析的方法纯化H is-HMGN2融合蛋白,Tric ine-SDS-PAGE电泳鉴定其分子量,行琼脂糖弥散法检测其抗菌功能。结果:成功构建了pET-32 a-c(+)-HMG17重组表达质粒,其表达的融合蛋白对致病性大肠杆菌54080,54299以及金黄色葡萄球菌ATCC25923均有抗菌活性。结论:HMGN2是一种抗菌分子,可能参与了体内的天然免疫防御作用。
- 马懿冯云李恒黄宁吴琦王伯瑶
- 关键词：HMGN2重组表达质粒抗菌功能抗菌作用SDS-PAGE电泳致病性大肠杆菌
- 人血红蛋白及其片段体内外抗菌活性研究被引量：10
- 2008年
- 目的分离人血红蛋白及其片段,进行体外抗菌活性分析和比较,并对血红蛋白体内抗菌活性进行初步探讨。方法利用阳离子交换及分子筛分离人血红蛋白α、β链;溴化氰法裂解α/β链,反相高效液相色谱技术纯化其片段;琼脂糖弥散法抑菌实验检测抗菌活性;构建大鼠大肠埃希菌阴道感染模型,设立实验组（血红蛋白组）和对照组,观察各组大鼠阴道组织形态学变化。结果体外抑菌实验示：血红蛋白、α/β链及其片段有抑菌作用,但其主要针对的是革兰阴性菌大肠埃希菌;而且除α1~32的抑菌作用较弱外,血红蛋白、α/β链及其片段三者抑菌活性比较,其效能基本相似。大鼠体内抗菌实验示：与基质对照组（感染后不治疗）比,血红蛋白组阴道复层扁平上皮表层较平滑,固有层内炎细胞浸润明显减少,且组织内充血明显减轻。结论人血红蛋白及其片段具有体外抑菌活性,而且血红蛋白在大鼠体内能减轻大肠埃希菌阴道感染炎症程度。
- 周新娥欧阳运薇潘小玲何跃东李恒邓璐霞石艳娥彭媛媛赵媛黄宁
- 关键词：人血红蛋白片段抑菌
- HBD-2转基因小鼠的建立及鉴定被引量：2
- 2006年
- 人β防御素2(Hum an beta defens in 2,HBD-2)是人体抗菌肽的重要分子,体外试验研究证明具有广谱抗微生物活性,为开展其在整体水平上的功能研究,建立HBD-2转基因小鼠模型。用分子克隆方法构建了带CM V启动子的HBD-2全长cDNA真核重组表达质粒pCDNA 3.1-HBD 2,以此为摸板,PCR扩增出带CM V启动子和BGHpo lyA尾的HBD-2基因片段,用显微注射技术将此微基因导入小鼠雄原核中,于M 16培养液培养后经输卵管移植到受体鼠体内让其怀孕产生子代小鼠。PCR法检测外源基因在小鼠基因组中的整合,RT-PCR和免疫组化法检测HBD-2在小鼠组织的表达。PCR检测结果显示17只F0代转基因鼠中4只检测到阳性信号,RT-PCR和免疫组化检测显示HBD-2在其F1代转基因小鼠生殖道、呼吸道、泌尿道以及血管内皮等组织部位广泛表达。实验表明HBD-2基因已整合到小鼠基因组且广泛表达,为进一步研究HBD-2的生物学功能及基因调控提供了有用的整体动物模型。
- 张舒黄宁赵新宇王青松杨洋成勇鞠辉明熊文碧储国君李绚王伯瑶
- 关键词：Β-防御素人Β防御素2转基因小鼠
- β防御素2转基因小鼠抗金黄色葡萄球菌感染的研究被引量：3
- 2006年
- 目的探讨转基因小鼠抗金黄色葡萄球菌作用。方法用分子克隆方法构建β防御素2(HBD-2)全长cDNA重组质粒,通过显微注射技术,将重组片段注射入小鼠雌原核细胞,聚合酶链反应(PCR)方法检测小鼠HBD2基因整合情况,免疫组化检测转基因小鼠HBD2表达和组织分布。用金黄色葡萄球菌腹腔攻击转基因阳性小鼠观测全身情况和死亡数。结果DNA序列测定证明重组质粒插入HBD-2cDNA片段无误,PCR显示7只小鼠已整合HBD-2基因,PCR阳性小鼠免疫组化显示HBD2基因在肺、肠道、肝、肾、睾丸、小脑等组织广泛表达。腹腔攻击实验显示7只转基因小鼠4只存活,而野生小鼠10只全部死亡。结论HBD-2在体内具有显著抗金色葡萄球菌感染能力。
- 张舒黄宁赵新宇王青松杨洋成勇鞠辉明熊文碧欧珍蓉吴琦王伯瑶
- 关键词：防御素转基因小鼠抗感染作用
