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膦亚胺叶立德在杂环合成中的应用被引量：5: 2010年; 总结了我们课题组应用膦亚胺叶立德的氮杂Wittig反应合成氮杂环的研究工作.我们发展了一种应用α-酯基膦亚胺与异氰酸酯(或二硫化碳)、亲核试剂的连续成环反应,合成咪唑啉酮及唑类杂环的新方法.应用β-酯基膦亚胺与异氰酸酯(或二硫化碳)、亲核试剂的连续成环反应,则可制备(稠合的)喹唑啉酮和嘧啶酮类杂环.而应用β-炔基膦亚胺与异氰酸酯、亲核试剂在银离子催化下的连续成环反应,可得到吲哚类杂环.最近我们课题组又初步将膦亚胺叶立德应用于串联的Ugi和Passerini后修饰反应中,合成了多取代苯并嗪和喹唑啉类杂环化合物.; 丁明武; 关键词：氮杂WITTIG反应叶立德杂环

鲫鱼和青虾GPT的动力学特性及对杀螺药物的敏感性: 2010年; 从鲫鱼和青虾肝脏中分离谷丙转氨酶(GPT),以比活力为指标,L25(56)正交试验与极差分析法研究了GPT酶活力测定的最适条件,测定了Nic(氯硝柳胺)和CuSO4(硫酸铜)对GPT活力的影响。正交试验分析鲫鱼GPT活力测定最适条件:酶质量浓度2.0g/L、底物浓度2.0μmol/L、反应体系pH值7.0、反应温度30℃、反应时间55min,青虾GPT活力测定最适条件酶质量浓度3.0g/L、底物浓度0.5μmol/L、反应体系pH值7.5、反应温度45℃和反应时间45min。Nic和CuSO4对鲫鱼和青虾GPT活力均显示诱导作用,其0.002g/L时对鲫鱼GPT的诱导率分别为641.01%和61.22%,对青虾的分别为45.99%和67.57%。研究结果表明:2种GPT活力测定条件相差较大,酶质量浓度和底物浓度影响作用最大。鲫鱼和青虾GPT对Nic和CuSO4敏感度高,推定GPT可能是Nic和CuSO4中毒的生化靶点之一。; 李娟娟李文新张巍邓灵福祁超; 关键词：鲫鱼青虾敏感性谷丙转氨酶

D1蛋白酶的克隆表达、纯化、生物活性测定及多克隆抗体的制备被引量：1: 2010年; 为了开发以D1蛋白酶作为靶标的新型除草剂,需要对先导化合物的生物活性进行检测和筛选。从菠菜中提取总RNA,逆转录合成cDNA,采用PCR扩增了CtpA的基因,连接至表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效表达,通过降低IPTG和诱导温度获得了可溶性表达的重组蛋白酶。采用Ni-NTA亲和层析和凝胶过滤柱层析对重组蛋白进行了纯化,SDS-PAGE和Western blotting结果证实目的蛋白为含有His-tag的融合蛋白。以合成的D1前体蛋白羧基端24肽作为模拟底物,采用高效液相色谱法测定了其水解活性,结果表明活性可达1.10nmol/(mg·min),为文献报道数据的15倍。纯化后的CtpA蛋白免疫日本的长耳大白兔制备多克隆抗体,ELISA法测定其血清抗体的效价高达1:100000。该结果为抑制剂先导化合物的筛选和酶蛋白与化合物的作用机理研究提供了必要的基础。; 李慧张巍申明霞李伟国刘艳丽刘素芳祁超; 关键词：纯化生物活性多克隆抗体

D1蛋白酶的高效毛细管电泳检测: 2010年; 在低温条件下表达的两种融合蛋白pET-28a ctpA与pET-23a-ctpA通过亲和色谱纯化、层析柱脱盐及浓缩,获得大量较高纯度的可溶性融合蛋白;并用高效毛细管电泳(HPCE)技术对两种融合蛋白进行分离检测,同时用荧光法配合确证.高效毛细管电泳分离检测结果显示,运行缓冲液的pH值相同时,两种融合蛋白的迁移时间存在显著差异;运行缓冲液的pH值在一定范围内变化时,同种蛋白的迁移时间无显著变化,表明蛋白结构是影响蛋白迁移的主要因素,两种蛋白的结构存在差异.; 张艳梅陈腊月李伟国郭建军刘中来姚汉超刘艳丽祁超; 关键词：融合蛋白高效毛细管电泳

重组蛋白Fpr3的原核表达、纯化与多克隆抗体的制备: 2010年; 为了从分子水平上进一步研究PPIase与PP1的相互作用,将构建好的pGEX-5X-1重组表达质粒转化于受体菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导后得到了可溶形式表达的融合蛋白.采用GST亲和层析法对重组蛋白进行了纯化,并用Factor Xa对融合蛋白进行柱上酶切,SDSPAGE检测表明可获得较高纯度的GST-Fpr3融合蛋白以及去除GST标签的目的蛋白.用其免疫日本雄性大耳白兔,成功制备了抗GST-Fpr3的多克隆抗体,为Fpr3的空间结构的解析和相应的分子识别过程奠定了基础.; 伍翔祁超李伟国刘中来; 关键词：纯化多克隆抗体

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教育部科学技术研究重点项目(107082)