教育部科学技术研究重点项目(107059)
- 作品数：5 被引量：26H指数：2
- 相关作者：侯加法王艳张风荣胡云峰姚静更多>>
- 相关机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 鸡骨保护素在毕赤酵母中的分泌表达及生物学活性测定被引量：1
- 2009年
- 为了在毕赤酵母中表达鸡骨保护素(chOPG),采用DNA重组技术将鸡OPG成熟肽cDNA片段插入毕赤酵母表达载体pPICZα-A中,以电穿孔法转化酵母X-33,用Zeoc in平板筛选阳性重组子,经甲醇诱导,实现了OPG在毕赤酵母中的分泌表达。SDS-PAGE电泳分析结果显示,表达产物存在两种形式,其相对分子质量分别为43000和53000,表达量约为200 mg.L-1,经免疫印迹验证,有较好的抗原性。表达产物经处理后加入到体外培养的鸡胚破骨细胞上,能显著抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性,减少骨吸收陷窝的个数与面积。
- 姚静胡云峰王艳张风荣侯加法
- 关键词：毕赤酵母分泌表达破骨细胞
- 骨钙素临床应用研究进展被引量：18
- 2010年
- 骨钙素是由骨和牙齿中的成骨细胞特异合成和分泌的一种非胶原蛋白,受多种维生素、激素和细胞因子的调节。骨钙素可维持骨的矿化并作为一种激素调解能量代谢。临床上广泛应用骨钙素诊断和监测骨骼疾病、恶性肿瘤、内分泌疾病及妇科疾病等。研究发现饮食诱导肥胖小鼠连续注射未羧化骨钙素,小鼠体重明显降低。有多种方法可以测定血清骨钙素,其中以放射免疫法应用最普遍。天然骨钙素不易获得,且昂贵,用大肠杆菌原核表达可获得大量骨钙素融合蛋白,有利于骨钙素抗体的开发,为骨钙素生理功能和药理作用的研究奠定了基础。
- 江莎侯加法
- 关键词：骨钙素放射免疫法能量代谢
- 肉鸡胫骨软骨发育不良研究进展被引量：2
- 2008年
- 胫骨软骨发育不良(tibial dyschondroplasia,TD)是发生在多种禽类的一种发展迅速的疾病,而以快速生长的肉鸡最为普遍,给肉鸡生产带来严重的经济损失。该病以胫跗骨或跗趾骨近端生长板出现无血管的白色软骨楔为特征。本文结合国内外的最新研究成果,从临床症状、病因、病理变化、防治等方面对该病进行了综述。
- 李新锋周振雷张建鹏侯加法
- 关键词：胫骨软骨发育不良病因症状病理变化
- 破骨细胞分化因子可诱导鸡骨髓细胞形成破骨样细胞被引量：3
- 2008年
- 研究了鸡破骨细胞分化因子(Chicken osteoclast differentiation factor,chODF)体外诱导鸡骨髓细胞形成破骨样细胞的能力。在无菌条件下取鸡股骨和胫骨,收集骨髓细胞。试验分设A、B、C、D、E、F、G 7组。A组为对照组,不加细胞因子,其他各组为试验组,其中B组仅加chODF,C组只加巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage-colony-stimulating factor,M-CSF),D、E和F组同时加不同浓度的chODF和M-CSF,G组同时加chODF、M-CSF和鸡护骨素(Chicken osteoprotegerin,chOPG)。通过抗酒石酸盐酸性磷酸酶(Tratrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、HE、骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色和显微、超微检查,观察和鉴定破骨样细胞(Osteoclast like cell,OLC)的形成。结果表明,chODF可诱导形成典型的OLC,骨吸收陷窝清晰可见,其陷窝面积大,数量多,且TRAP阳性多核细胞的数目与ODF的浓度呈正相关,多组比较其差异显著(P<0.05),但若加入chOPG,则阻断了OLC的形成和骨吸收。本试验建立了一种鸡骨髓细胞诱导破骨样细胞方法,既为体外研究鸡破骨细胞的分化发育和功能调节创造了条件,也为进一步研究OPG/ODF/RANK(NF-κB受体,Receptor activator of NF-κB)在蛋鸡骨质疏松症等骨骼疾病的作用机制提供理论基础。
- 王艳侯加法胡云峰张风荣沈向真
- 关键词：破骨细胞分化因子破骨样细胞骨髓细胞
- 雌激素鸡胚成骨细胞增殖、凋亡及其ALP活性的影响
- 本文研究了不同浓度雌激素对体外鸡胚成骨细胞增殖、凋亡及其ALP活性的影响。应用酶消化法获取15日龄鸡胚额骨成骨细胞,用不同浓度的雌激素处理后,测定细胞增殖率、ALP活性、细胞凋亡和周期情况。结果表明,雌激素对成骨细胞增殖...
- 邓益锋陈秀霞侯加法
- 关键词：雌激素增殖凋亡碱性磷酸酶
- 文献传递
- 鸡骨保护素(chOPG)的原核表达、纯化及抗体制备被引量：2
- 2008年
- 【目的】骨保护素(OPG)是一种新发现能抑制前体破骨细胞分化及成熟破骨细胞活性的蛋白,本文旨在从体外扩增、表达鸡骨保护素(chOPG)蛋白,并制备其多克隆抗体,为深入研究它的生物学功能奠定基础。【方法】以体外培养的鸡胚成骨细胞中提取的总RNA为模板,利用RT-PCR方法,扩增出chOPG基因,测序后克隆至原核表达载体pET-32a(+),成功构建了原核表达质粒pET-32a(+)-OPG,重组质粒转化Rosetta-gami(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达。【结果】表达产物经SDS-PAGE电泳,发现目的蛋白大小约为63kD,占菌体总蛋白的11.9%,Western blotting分析显示,表达的chOPG蛋白具有良好的免疫反应性。用镍离子亲和层析的方法可获得纯化的蛋白,以纯化的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA结果显示效价达到1﹕10240。Western印迹结果表明,该抗体可以和chOPG酵母表达产物特异性结合。【结论】成功地实现了鸡骨保护素在大肠杆菌中的表达,并获得其多克隆抗体。
- 姚静侯加法王艳张风荣
- 关键词：骨保护素原核表达纯化抗体
