国家自然科学基金(30470536)
- 作品数：8 被引量：49H指数：3
- 相关作者：江澄川陈功杨茹张彦平朱粹青更多>>
- 相关机构：复旦大学复旦大学上海医学院第二军医大学更多>>
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- 神经突触前膜胞内蛋白抗体致大鼠癫癎的机制被引量：3
- 2005年
- 目的 研究神经突触前膜胞内蛋白(Munc18)抗体致痫大鼠的机制。方法60只SD大鼠分为4组，在实验组大鼠的海马CA1区间断注射Munc18抗体，共9次。监测大鼠的脑电图和痫样行为。10周后全部大鼠处死取脑，切片做HE、尼氏和TUNEL染色后观察。结果 实验组12只大鼠中，10只出现异常脑电，5只在6周之后仍然存在；9只出现1-4级不等的痫样行为，6周后仍有4只存在痫样行为；大鼠脑片显示海马区神经细胞数量明显减少(155±20，P<0．01)，而凋亡细胞数量明显增多(16．80±3．32，P<0．01)，伴有胶质细胞增生及细胞形态异常。结论 Munc18抗体能慢性点燃致痫大鼠，其机制可能与其诱导整个海马区神经细胞的凋亡和丢失有关。
- 陈功江澄川程介士杨茹
- 关键词：蛋白抗体TUNEL染色胶质细胞增生致痫大鼠细胞数量实验组
- c-fos、c-jun与癫痫被引量：14
- 2005年
- 陈功江澄川
- 关键词：癫痫
- 谷氨酸促进大脑皮层神经元Munc18的释放和细胞表面的分布(英文)
- 2010年
- 目的Munc18被普遍认为存在于神经元细胞内,参与神经递质的释放。虽然已有研究表明在Rasmussen’s脑炎病人中有Munc18自身抗体的产生,但对于Munc18的自身免疫机制目前还不清楚。本研究旨在观察Munc18是否可由神经元释放及是否部分分布于神经元细胞表面,并对Munc18抗体是否能诱导神经元损伤进行研究。方法分离胎龄17天Sprague-Dawley胎鼠大脑皮层神经元,用Neurobasal培养基培养。培养液中的蛋白经三氯乙酸沉淀后进行免疫印迹检测,细胞表面蛋白则用EZ-Link-sulfo-NHS-LC-Biotin进行生物素标记,细胞裂解后用结合有亲和素的琼脂糖珠获取生物素标记的蛋白,随后进行免疫印迹检测。在4°C进行活细胞免疫荧光染色,观察神经元细胞表面Munc18的分布。用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放指标检测神经元损伤。结果用免疫印迹法可在神经元培养的条件培养液中检测到Munc18蛋白。用谷氨酸(50μmol/L)处理神经元1 h后,培养液中Munc18含量显著增加,同时培养液中未检测到β-actin和syntaxin1,LDH释放也未明显增加。此外,谷氨酸处理能增强神经元表面的Munc18分布。活细胞免疫荧光染色检测到在谷氨酸处理后,神经元表面分布有Munc18,主要位于神经突起与另一神经元接触的部位以及不同神经元的神经末梢交汇部位。谷氨酸诱导的神经元表面Munc18分布增加可被NMDA受体拮抗剂MK801抑制,而AMPA受体拮抗剂未有明显的抑制作用。LDH检测显示,在培养液含有血清成份的情况下,与对照的c-Fos抗体相比,Munc18抗体可明显诱导神经元损伤。结论一部分Munc18可由神经元释出或在神经细胞表面分布。谷氨酸可通过兴奋NMDA受体促进Munc18的释放和在神经细胞表面的分布。并且,Munc18抗体诱导的神经元损伤依赖于血清中的因子。
- 万萍张彦平闫洁许玉霞王洪权杨茹朱粹青
- 关键词：神经元细胞表面谷氨酸
- Munc18抗体致痫机制的体外实验研究:诱导海马神经细胞的损伤被引量：2
- 2007年
- 目的前期研究发现将突触前膜胞内蛋白(Munc18)抗体注射到大鼠的海马,大鼠呈痫样发作,故研究此抗体对海马神经细胞的损伤作用。方法取SD新生鼠海马组织,以此培养的原代海马神经细胞作为靶细胞。抗体在不同的作用时间(20h和40h)和稀释倍数下,通过细胞存活率和乳酸脱氢酶(LDH)释放量来测定抗体对神经细胞的毒性;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)测定神经细胞的凋亡。结果Munc18抗体对神经细胞具有细胞毒性和促凋亡作用,并与抗体的滴度和作用时间呈剂量依赖性。即使在抗体低滴度的情况下(×1000和×2000),Munc18抗体仍可诱导凋亡,且与对照组比较有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。结论Munc18抗体的致痫机制与其诱导神经细胞的损伤作用(可能主要是经凋亡途径)有关。
- 陈功江澄川杨茹
- 关键词：抗体细胞毒性凋亡
- 难治性颞叶癫痫患者海马与致痫大鼠海马病理学的比较研究被引量：21
- 2007年
- 目的研究难治性颞叶癫痫（TLE）患者海马神经元的变性凋亡及丢失等病理学变化，并与致痫大鼠的海马进行比较。方法建立抗脑抗体．神经突触前膜胞内蛋白（Munc18）抗体慢性点燃癫痫动物模型，筛选有痫样脑电图和痫样行为且持续4周以上的大鼠，宰杀取海马标本；同时，收集14例TLE患者术后的海马及邻近的颞叶标本。标本制成脑片后，用尼氏染色和TUNEL染色观察神经细胞变性和凋亡，并计数神经细胞数量。结果致痫大鼠海马皮层有较多的凋亡细胞，伴有胶质细胞增生，神经元数量减少且形态异常，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）；TLE患者海马病理学变化与致痫大鼠相似，而TLE患者颞叶皮层神经元病理学改变也与海马相似，且胶质增生更为明显。结论难治性TLE患者的海马皮层有神经元的变性、丢失及胶质细胞增生的现象，这与动物模型和文献报道的相符。
- 陈功江澄川孙静杨茹
- 关键词：癫痫海马病理学
- 谷氨酸受体抗体诱导海马神经元损伤的研究被引量：1
- 2007年
- 目的:有研究发现谷氨酸受体(GluR)与难治性癫的发作相关,故研究GluR亚单位抗体(GluR3抗体)对海马神经元的损伤作用。方法:取SD新生鼠海马皮质组织,以此培养的原代海马神经元作为靶细胞。抗体在不同的作用时间(20和40h)和稀释倍数下,通过细胞存活率(MTT法)和乳酸脱氢酶(LDH)释放量来测定抗体对神经元的毒性;TUNEL染色法测定神经元的凋亡。结果:GluR3抗体对神经元具有细胞毒性和凋亡作用,并与抗体的滴度和作用时间呈剂量依赖性。即使在低滴度的情况下(×1000和×2000),此抗体仍可诱导凋亡,且与对照组比较差异有显著统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:GluR3抗体的致机制可能与其能诱导神经元的损伤有关。
- 陈功江澄川
- 关键词：谷氨酸受体抗体细胞毒性凋亡
- 海马硬化型癫痫颞叶的病理学及c-fos、c-jun表达研究被引量：8
- 2005年
- 目的研究海马硬化型颞叶癫痫(TLE)患者颞叶皮层神经元的变性凋亡以及c-fos、c-jun表达,并与海马的相应变化进行比较。方法14例颞叶和海马标本制成脑片后,用尼氏染色和TUNEL染色观察神经细胞变性和凋亡,并计数神经细胞数量;同时,研究c-fos和c-jun表达以反映癫痫发作对神经元损伤的程度和范围。结果颞叶皮层的神经细胞数量明显减少且形态异常,并有较多的凋亡细胞,伴有胶质细胞增生,而且有c-fos和c-jun的大量表达;其表现与海马的相应变化相似,但颞叶的胶质细胞增生更为明显。与对照组比较差异有统计学意义(P<0·01或P<0·05)。结论除海马外,颞叶神经细胞和胶质细胞的病理改变可能参与海马硬化型TLE的发生和传播过程。
- 陈功江澄川杨茹
- 关键词：颞叶海马C-JUN表达硬化型病理学神经细胞变性
- 神经元兴奋性毒性对Munc18-1蛋白在大鼠海马神经元和原代培养神经元胞核内分布的影响(英文)
- 2011年
- 目的 Munc18-1在中枢神经系统递质释放过程中具有重要作用,控制着突触囊泡释放步骤的每一个环节。Munc18-1功能异常与癫痫发病相关。本文主要探讨癫痫是否会引起神经元胞核内Munc18-1定位的改变。方法通过海马内注射海人藻酸建立Sprague-Dawley(SD)大鼠癫痫模型,腹腔注射海人藻酸建立昆明小鼠癫痫模型。分离胎龄18天SD大鼠海马神经元,用Neurobasal培养基培养7天后,用谷氨酸处理3h。用蔗糖密度梯度离心法分离神经元和神经胶质细胞的细胞核组份,通过甲酚紫染色对上述富含细胞核的组份进行形态学鉴别。用免疫组化和免疫电镜分析法确定Munc18-1的细胞核定位。免疫印迹法检测不同细胞组分的Munc18-1蛋白的表达水平。结果免疫组化、免疫电镜以及对神经元细胞核组份的免疫印迹证实了Munc18-1在海马神经元细胞核的分布定位。在海人藻酸诱导癫痫的动物海马内,免疫组化染色显示Munc18-1在海马CA区锥体细胞层、齿状回颗粒细胞层和门区的多型细胞表达减少。同时,免疫印迹分析表明,Munc18-1在海马神经元胞核中的表达水平明显下降。免疫印迹检测显示,原代培养神经元经50μmol/L谷氨酸处理3h后,Munc18-1在神经元胞核中的分布减少,而胞浆组份中含量增加。免疫荧光的形态学检测也显示部分神经元明显失去了Munc18-1在细胞核聚集分布的特征。结论兴奋性刺激能够使Munc18-1在神经元的表达分布发生改变,这种变化可能参与调节脑神经元的功能。
- 张彦平万萍王洪权赵红许玉霞杨茹朱粹青
- 关键词：细胞核海人藻酸谷氨酸海马原代培养神经元
