国家教育部博士点基金(200802461111)
- 作品数：5 被引量：12H指数：3
- 相关作者：桂永浩宋后燕孙淑娜蒋璆钱林溪更多>>
- 相关机构：复旦大学上海医学院复旦大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 二氢叶酸还原酶基因在斑马鱼神经系统发育过程中的作用被引量：5
- 2010年
- 目的观察二氢叶酸还原酶基因(DHFR)功能阻抑斑马鱼胚胎的颅脑部发育情况,初步探讨二氢叶酸还原酶基因在斑马鱼神经系统发育过程中的作用。方法采用显微注射吗啡啉修饰的反义核苷酸(MO)的方法进行DHFR表达阻抑。胚胎发育至受精后48hpf观察胚胎的颅部发育情况,在60hpf时经石蜡切片进一步观察胚胎的脑发育状况。利用胚胎整体原位杂交的方法检测影响神经系统发育的关键因子ngn1和huc的表达情况。结果显微注射MO可成功的进行DHFR表达阻抑。DHFR表达阻抑组胚胎存在颅脑部发育明显异常和ngn1、huc的表达强度明显减弱,且与显微注射的MO剂量呈正相关。结论DHFR在斑马鱼颅脑发育中有重要作用;其功能阻抑可导致胚胎颅脑部发育异常,其机理与ngn1和huc的的表达减弱有关。
- 孙淑娜桂永浩蒋璆钱林溪宋后燕
- 关键词：神经系统斑马鱼
- 叶酸缺乏对斑马鱼胚胎心脏发育影响的实验研究被引量：4
- 2010年
- 目的 构建叶酸缺乏斑马鱼模型,观察叶酸缺乏胚胎的心血管发育异常表型,探寻预防叶酸缺乏导致心脏发育异常的最佳补充叶酸时期,并初步探讨叶酸缺乏导致心脏发育异常的机制.方法 利用二氢叶酸还原酶抑制剂甲氨蝶呤（MTX）以及使二氢叶酸还原酶基因（dhfr）表达阻抑两种方法 构建叶酸缺乏斑马鱼模型.并进行四氢叶酸挽救实验.在叶酸缺乏组胚胎发育不同阶段给予叶酸.观察并统计胚胎的心脏发育异常百分比、心脏发育异常表型、心率、心室收缩指数（VSF） 利用荧光显微造影的方法 探查心脏流出道发育状况.采用原位杂交以及Real-time PCR的方法 检测各组胚胎vmhc、amhc、tbx5和nppa的表达情况.结果 与对照组相比,（78.00±3.74）%的MTX处理组胚胎以及（68.00±6.32）%的dhfr表达阻抑组胚胎存在心脏发育异常,包括心脏形态异常、心率和VSF下降以及心脏流出道发育畸形.给予四氢叶酸可挽救叶酸缺乏组胚胎的异常表型.在受精后8～12 h给予叶酸后,MTX处理组（20.20%±3.77%）以及dhfr表达阻抑组（43.40%±4.51%）胚胎的心脏发育异常百分比降低最显著,心脏发育异常状况改善最明显.MTX处理组胚胎以及dhfr表达阻抑组胚胎的vmhc和amhc表达水平正常 tbx5及nppa的表达水平明显下降.给予外源性叶酸后,tbx5和nppa的表达在MTX处理组胚胎以及dhfr表达阻抑组胚胎中增强.结论 本实验构建的叶酸缺乏模型中存在四氢叶酸水平下降.在胚胎发育早期中段给予补充适量的叶酸可以最有效预防叶酸缺乏导致的心脏发育异常.叶酸缺乏对心室以及心房肌球蛋白的分化无干扰作用.叶酸缺乏导致胚胎心脏发育异常与tbx5和nppa的表达水平下调有关.
- 孙淑娜桂永浩蒋璆宋后燕
- 关键词：叶酸缺乏斑马鱼心脏胚胎发育
- 叶酸缺乏对斑马鱼体轴发育的影响被引量：3
- 2009年
- 目的构建叶酸缺乏斑马鱼模型,观察叶酸缺乏斑马鱼胚胎的体轴发育情况,初步探讨叶酸缺乏导致胚胎体轴发育异常的机制。方法分别应用二氢叶酸还原酶(dhfr)抑制剂甲氨蝶呤(MTX)以及二氢叶酸还原酶(dhfr)基因阻抑技术,通过下调二氢叶酸还原酶功能构建叶酸缺乏斑马鱼模型。在胚胎发育至17 hpf时在显微镜下观察胚胎的体轴偏移情况。利用特异性探针通过胚胎整体原位杂交的方法标记肝脏、胰脏以及心脏,以观察其位于中线两侧的位置。利用胚胎整体原位杂交和Real-time PCR的方法检测与体轴发育密切相关的Nodal信号通路下游因子ntl和gsc的表达情况。结果叶酸缺乏组一定比例胚胎存在体轴偏移以及肝脏、胰脏和心脏左右轴异位。叶酸缺乏组Nodal信号通路下游因子ntl以及gsc的表达强度无明显变化,但表达的空间模式发生改变,提示轴中胚层发育紊乱。结论叶酸缺乏可导致斑马鱼胚胎体轴发育异常以及轴中胚层发育紊乱,但对Nodal信号通路无明显干扰作用。
- 孙淑娜桂永浩蒋璆钱林溪宋后燕
- 关键词：叶酸二氢叶酸还原酶
- 叶酸缺乏对斑马鱼胚胎造血系统影响的初步研究被引量：2
- 2010年
- 目的观察叶酸缺乏对斑马鱼胚胎造血干细胞发育的干扰作用以及对胚胎造血区凋亡的影响,初步探讨叶酸缺乏导致血液生成异常的机制。方法将二氢叶酸还原酶基因(DHFR)功能阻断构建叶酸缺乏斑马鱼模型,分别用二氢叶酸还原酶抑制剂甲氨蝶呤(MTX)以及DHFR表达阻抑技术处理斑马鱼胚胎,造成胚胎体内叶酸缺乏的模式。在显微镜下观察胚胎发育情况,用胚胎固兰染色观察斑马鱼胚胎血细胞生成量,并用原位杂交和Real-timePCR方法检测血细胞分化和生成密切相关基因FLK-1、GATA1和GATA2的表达情况,利用TUNEL法检测斑马鱼胚胎造血区的凋亡状况。结果与各对照组相比,叶酸缺乏组斑马鱼胚胎的造血区形态学发育异常,血细胞数量明显减少,FLK-1、GATA1和GATA2的表达显著下降,胚胎造血区的凋亡增加。结论叶酸缺乏干扰了血细胞的生成,叶酸缺乏组胚胎FLK-1、GATA1和GATA2的表达降低和造血区的凋亡增加与胚胎血液系统发育异常相关。
- 孙淑娜桂永浩蒋璆宋后燕钟涛
- 关键词：叶酸斑马鱼血液系统
- 二氢叶酸还原酶基因在斑马鱼咽弓发育过程中作用的研究被引量：1
- 2010年
- 叶酸缺乏可导致胚胎先天性发育异常,二氢叶酸还原酶是叶酸生物学作用通路中的关键因子,其功能阻抑将抑制叶酸生物学作用的发挥.咽弓是脊椎动物胚胎发育中头面部结构、心脏流出道等的共同前体.在模式生物斑马鱼中,利用基因表达阻抑以及过表达技术,探讨二氢叶酸还原酶基因(DHFR)在斑马鱼咽弓发育过程中的作用.石蜡切片以及软骨染色结果显示,DHFR表达阻抑导致斑马鱼咽弓以及腭发育明显异常,而DHFR过表达可部分挽救上述发育异常表型.TBX1和HAND2在咽弓发育中有重要作用.通过胚胎整体原位杂交以及Real-timePCR技术检测TBX1和HAND2表达水平.DHFR表达阻抑后TBX1和HAND2的表达降低,DHFR过表达可使TBX1和HAND2的表达增加.上述结果表明,DHFR在斑马鱼咽弓发育过程中扮演重要角色,DHFR通过影响TBX1和HAND2的表达而调控咽弓的形成和分化.
- 孙淑娜桂永浩蒋璆钱林溪宋后燕
- 关键词：斑马鱼
