国家自然科学基金(30470555)
- 作品数：20 被引量：101H指数：6
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- 相关机构：苏州大学北京大学第一医院北京市第六医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目江苏省自然科学基金更多>>
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- 热惊厥幼龄大鼠脑内Fos和热休克蛋白-70及锌离子转运体3mRNA表达的研究被引量：8
- 2008年
- 目的探讨热应激（Heatstress，HS）和热惊厥（Febrileconvulsions，FC）对脑内FOS蛋白、热休克蛋白70（Heatstressprotein-70，HSP-70）和锌离子转运体3（Zinctransporter3，ZnT3）表达的影响。方法清洁级21日龄雄性SD大鼠，体重（52—62）g，由浙江大学医学实验动物中心提供。36只大鼠随机分为正常对照组（8只）和热应激组（28只）。28只热应激处理大鼠中15只达到5级（设为热性惊厥组，Febrileconvulsiongroup，FC），10只未出现惊厥（设为单纯热应激组．Heatst艄group，HS），3只达到2级惊厥，弃用。采用热水浴诱导21日龄大鼠FC模型，应用免疫组织化学技术对Hs和FC大鼠Fos、HSP-70免疫反应性在不同脑区的表达进行分析，原位杂交检测ZnT3表达。计量资料以均数±标准差（x^-±s）表示，首先作正态性W检验和方差齐性检验，符合正态性分布和总体方差相等时，采用方差分析。P〈0．05认为差异具有统计学意义。结果FC组大鼠大脑皮层各区和海马各区Fos阳性细胞数明显高于HS组大鼠（P〈0．01）。HS组和对照组未见HSP-70-IR阳性细胞，而FC组则于大脑皮层、海马、杏仁核、丘脑及下丘脑见大量HSP-70-IR阳性细胞，呈弥漫性分布。FC组海马区域可见明显ZnT3mRNA表达，而HS组和对照组无明显表达。结论FC组海马及大脑皮层各区FOS高表达，表明FC组大鼠脑神经元呈过度兴奋状态，为神经元的早期轻微损伤提供了依据。FC组出现HSP-70迅速表达，而HS组表达阴性，提示FC可能导致神经细胞在很早的时间内发生损伤变性。FC组海马ZnT3mRNA明显表达提示FC组海马区域存在异常增高的锌离子转运。
- 倪宏水泉祥
- 关键词：热性惊厥FOS热休克蛋白70
- 3-甲基腺嘌呤对大鼠新生期惊厥致神经行为损伤的干预被引量：3
- 2011年
- 目的探讨大鼠新生期反复惊厥急性期应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对惊厥所致神经行为损伤的干预作用及机制。方法实验在苏州大学衰老与神经疾病实验室进行。日龄6d（P6，下同）的Sprague—Dawley大鼠45只随机（随机数字法）分成三组，每组15只，惊厥组在P6吸入三氟乙醚诱导惊厥发作，持续30min，连续6d；对照组同样操作但不吸人三氟乙醚；3-MA组惊厥前腹腔注射3-MA（总量2μL），同样方法吸人三氟乙醚诱导惊厥，方法同惊厥组。三组大鼠于P12进行游泳行为评分测试大鼠神经运动发育，P17进行旷场实验，P43-P49行Morris水迷宫测试大鼠学习记忆功能，于P50取海马组织，采用免疫印迹技术（Western blot）检测抗凋亡基因Bcl-2及自噬标记蛋白Beclinl的表达。各组行为学指标和蛋白水平采用方差分析进行统计。结果惊厥后各组大鼠游泳行为测评，各项评分惊厥组明显低于对照组及3-MA组（P〈0．01），旷场实验显示惊厥组延迟时间[（13．33±6．69）s]较对照组[（7．11±2．37）s]和3-MA组[（9．91±4．23）s]显著延长，差异具有统计学意义（F=4．39，P〈0．05）；Morris水迷宫测试RS组第4、5天逃避潜伏期较对照组和3-MA组明显延长（P〈0．05）。惊厥组海马Bcl-2表达水平（0．587±0．139）较对照组（0.782±0．083）及3-MA组（0．799±0．163）显著降低，差异具有统计学意义（F=4．71，P〈0．05）。各组Beclinl的表达差异无统计学意义（F=0．27，P〉0．05）。结论3-MA能显著改善大鼠惊厥后神经行为损伤，并可能与上调海马抗凋亡基因Bcl-2表达有关。
- 倪宏王洁英
- 关键词：惊厥BCL-2海马
- 新生期反复惊厥对认知和海马CaMKⅡ表达的远期影响及干预研究被引量：16
- 2008年
- 新生期惊厥活动可造成严重的神经后遗症,如成年期大脑对惊厥的易感和易损性提高,严重者产生认知功能损害.对发育期惊厥性脑损伤远期预后的研究,尤其是分子机制及其干预的研究具有重要的临床意义.探讨了新生期大鼠单次长程或反复惊厥对学习、记忆能力和海马突触后致密物质钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的远期影响及运动训练的干预作用.生后6天(P6)的SD大鼠随机分成单次长程惊厥组(SS)、反复惊厥组(RS)和对照组,每组12只.3组大鼠分别于P27～P31、P58～P61、P80～P82采用Morris水迷宫检测学习、记忆功能.P51～P56对SS组和RS组进行踏转轮训练.最后脑组织切片观察CaMKⅡ mRNA在海马的表达.结果显示,第一次Morris水迷宫测试RS组第1天～第4天潜伏期明显高于对照组,具有显著性差异(P<0.05),第二次水迷宫RS组第1天～第2天的逃避潜伏期较对照组仍显著延长,具有显著性差异(P<0.05),第三次测试各组之间差异无统计学意义.搜寻策略显示,在第一次Morris测试时RS组第3天～第4天边缘式搜寻比例明显高于对照组,具有显著性差异(P<0.01),同时RS组第3天～第4天趋向式搜寻比例明显低于对照组,具有显著性差异(P<0.01),而第二次和第三次水迷宫测试3组间趋向式和直线式搜寻策略无明显差异.在记忆实验中,原平台象限游泳距离与总距离的比值,RS组第三次较对照组显著降低,有统计学意义(P<0.05);另外RS组1～3天趋向式搜寻比例均明显低于对照组,有显著性差异(P<0.05).CaMKⅡ原位杂交显示,各组CaMKⅡ mRNA在海马均有明显表达,但是在齿状回和门区RS组表达明显低于对照组,具有统计学意义(P<0.01).研究表明,新生期反复长程惊厥能够对学习和记忆功能产生远期的损害,可能与海马记忆分子CaMKⅡ表达下调有关,而单次长程惊厥对学习记忆无明显影响.早期运动训练能够明显改善反复惊厥
- 倪宏姜玉武陶陆阳楼江燕王浙东吴希如
- 关键词：惊厥MORRIS水迷宫
- 早期惊厥样放电对发育中神经元NMDA受体1表达的远期影响(英文)被引量：1
- 2007年
- 目的探讨早期惊厥样放电对发育中大鼠皮层神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartatere-ceptor1,NR1)表达的远期影响。材料与方法以原代培养的大鼠大脑皮层神经元无镁诱导的反复惊厥样放电为模型。根据对培养6d皮层神经元的不同处理分为三组:正常DMEM培养液组(CONT1)、正常细胞外液组(CONT2)和无镁细胞外液组(MGF)。神经元分别在上述三种液体中孵育3h,然后恢复正常DMEM培养基继续培养,分别应用实时定量PCR与West-ernblot方法在培养7、12及17d时测定皮层神经元NMDA受体1mRNA与蛋白表达的变化。结果在正常DMEM培养液中,NR1mRNA与蛋白的表达在培养7d时处于较高水平,以后逐渐下降,以培养12d为最低。与CONT2和CONT1组相比,MGF组NR1mRNA与蛋白的表达在培养7d皮层神经元均明显降低,在12d时明显增高(P<0.05)。CONT2组与CONT1组相比无统计学差异(P>0.05)。结论发育中皮层神经元早期无镁诱导惊厥样放电对NMDA受体1mRNA与蛋白表达具有远期影响,提供了神经元早期惊厥样放电引起远期功能损伤的可能机制。
- 王静敏姜玉武姜茜曹海燕倪宏薄涛吴希如
- 泡泡浴水疗对新生期大鼠反复惊厥性脑损伤保护作用的探讨被引量：3
- 2011年
- 目的探讨泡泡浴水疗对新生期大鼠反复惊厥性脑损伤是否具有保护作用。方法出生6d（P6）的健康SD大鼠随机分为4组各15只，惊厥组（RS组）和惊厥水疗组（HRS组）在P6吸入三氟乙醚诱导惊厥发作，持续30min，连续6d，对照组（CON组）和对照水疗组（HCON组）同样操作但不吸入三氟乙醚。于末次惊厥后第2天对HCON及HRS组采用泡泡浴进行干预，连续28d。观测各组大鼠体格发育及神经行为表现，PS0时通过免疫印迹技术检测大脑皮质可塑性相关基因-1（Plasticity relatedgene1，PRG-1）、抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达。结果1-惊厥后RS组大鼠各日龄体质量较CON组显著降低（P〈0．05）；水疗后HRS组体质量较RS组显著增高（P〈0．05）。各组生理发育现象（竖耳、门齿萌出、睁眼）出现时间无显著差异。2．旷场行为实验：RS组旷场得分较CON组明显降低（P〈0．05），HRS组旷场得分较Rs组明显升高（P〈0．05）。泡泡浴可增强反复惊厥大鼠的兴奋性和探索能力[P26开场得分：CON组为（45．78±18．31）分，HCON组为（59．78±25．61）分，RS组为（27．78±16．83）分，HRS组为（53．15±22．43）分，P〈0．01]。3．4组大鼠大脑皮质PRG-1、Bcl-2蛋白表达存在显著差异（F=3．477／7．36，P〈0．05）。其中RS组PRG．1（1．149±0．191）表达升高、Bel-2（1．040±0．116）表达降低，与CON组（PRG-1为0．910±0．162，Bcl-2为1．259±0．157）比较均差异有显著性（P〈0．05）；HRS组Bcl-2（1．57±0．333）表达水平较RS组明显升高（P〈0．05）。结论新生期大鼠反复惊厥导致生长发育延迟、神经行为损伤，惊厥后早期进行泡泡浴干预对神经损伤有修复作用，大脑皮质PRG-1、Bcl-2参与发育期惊厥性脑损伤病理生理机制。
- 王洁英倪宏
- 关键词：惊厥神经行为BCL-2
- 新生期大鼠反复惊厥后海马LC-3的表达及干预
- 目的研究新生期大鼠反复惊厥后海马中LC-3的表达及3 MA对表达的干预作用。方法生后6 d的SD大鼠随机分成3组,每组24只,惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次,每次间隔30 min,连续9 d;对照组同样操作但不吸...
- 倪宏巩勇陶陆阳
- 关键词：惊厥自噬
- 文献传递
- Cathepsin B抑制剂对发育期惊厥大鼠海马自噬相关蛋白表达的调节被引量：3
- 2011年
- 目的探讨新生期大鼠反复惊厥后海马自噬、凋亡相关蛋白Beclin-1，Cathepsin B和Bcl-2的表达及溶酶体蛋白酶抑制剂CBI对表达的干预作用。方法实验在苏州大学神经科学研究所进行。日龄6d的Sprague-Dawley大鼠90只随机（随机数字法）分为3组，每组30只：对照组、反复惊厥组及CBI组。反复惊厥组（RS）每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次，每次间隔30min，连续9d；对照组同样操作但不吸人三氟乙醚；CBI组于惊厥前腹腔注射cathepsin B（2μL，0．5μg／μL），同样方法吸人三氟乙醚诱导惊厥发作。各组分别于末次惊厥后1．5h，3h，6h，24h和生后35d5个时间点[（n=6／（每点，每组）]取海马组织，采用免疫印迹技术检测自噬相关蛋白Becfin-1，Cathepsin B和Bcl-2的表达，采用方差分析进行统计。结果对照组和CBI组同一时间点Beclin-1，Cathepsin B和Bcl-2的表达差异无统计学意义，惊厥组（1．5h，3h，6h，24h）海马组织中Beclin-1和Cathepsin B的表达明显高于对照组和CBI组同一时间点的Beclin-1表达（F值分别为Beclin-1：7．44，6．58，5．43，9．69，P〈0．05；CathepsinB：4．62，2．02，3．49，4．86）；而惊厥组（1．5h，3h，6h，24h）Bcl-2的表达则明显低于对照组和CBI组同一时间点Bcl-2的表达（F值分别为4．34，3．79，4．88，4．42，P〈0．05）。结论发育期大鼠反复惊厥后海马神经元自噬信号通路激活，同时抗凋亡基因Bcl-2蛋白水平显著下调，表明自噬信号途径与凋亡途径共同激活，协调参与发育期大鼠惊厥急性期兴奋毒性脑损伤的病理生理机制。
- 倪宏闫建珍张乐玲
- 关键词：惊厥BECLIN-1CATHEPSIN自噬CBI
- 新生期惊厥对大鼠海马NR1和GABAARα1表达的长期影响
- 2008年
- 目的研究新生期惊厥对大鼠海马N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体1（NR1）和γ-氨基丁酸A受体α1亚单位（GABAARα1）表达的长期影响，以期揭示发育期惊厥导致成年大鼠惊厥阈降低的机制。方法生后6d的Wistar大鼠48只采用完全随机法分成三氟乙醚吸入惊厥组和对照组，每组各24只，惊厥组再细分为单次惊厥组（诱导惊厥一次，持续30min）和反复惊厥组（每天诱导惊厥一次，持续30min，连续6d），对照组同样操作但不吸入三氟乙醚。分别于惊厥后第7天和第75天取大鼠海马。匀浆提取膜蛋白，应用免疫印记法测定NR1、GABAARα1蛋白表达。结果单次惊厥组和反复惊厥组75d的海马NR1表达无显著变化，而反复惊厥组7d的海马NR1表达较对照组显著增加（P〈0.05）。同时，与对照组相比，GABAARα1亚单位在单次惊厥组第75天以及反复惊厥组的表达均有统计学意义（P〈0．05）。结论新生期大鼠反复或单次长程惊厥持续状态能够对海马NR1和GABAARα1表达产生远期影响，这种改变可能在发育期惊厥导致的脑兴奋性提高和惊厥阈降低中起重要作用。
- 倪宏姜玉武陶陆阳王静敏吴希如
- 关键词：惊厥性脑损伤
- 青霉素诱发发育期大鼠反复惊厥对学习记忆功能的远期影响被引量：3
- 2008年
- 目的建立发育期大鼠青霉素点燃模型，观察青霉素点燃幼龄大鼠模型的空间学习记忆能力。方法生后29d（P29）的SD大鼠随机分为青霉素点燃实验组（RS，n=22）及生理盐水对照组（NS，n=10）。Rs组隔日腹腔注射青霉素560万U／kg体质量，连续6次，NS组以同样方法腹腔注射生理盐水。于末次惊厥后进行脑电记录。分别于P51～P56、P81～P84、P92～P95进行3次Morris水迷宫实验，检测大鼠的学习和记忆功能。结果①皮层脑电图显示RS组明显的棘波和尖波。②逃避潜伏期：第1次Morris水迷宫各组潜伏期均呈逐渐下降趋势，但RS组第5天潜伏期[（29．57±18．52）s]明显高于Ns组[（8．21±4．86）8]，差异有显著性（t=3．14，P=0．014〈0．05）；RS组第2次迷宫测试中第1天[（46．31±17．91）s]明显高于NS组[（21．21±18．25）s]，差异有显著性（t=2．68，P=0．019〈0．05）；第3次水迷宫第2天的潜伏期值（26．87±21．74）s仍明显高于NS组（7．85±7．11）s，差异有显著性（t=2．34，P=0．045〈0．05）。③记忆实验：三次记忆测试平台象限路径与总路径之比，RS组[第1次（0．16±0．07）s；第2次（0．22±0．07）s；第2次（0．20±0．06）s]均明显低于Ns组[第i次（0．31±0．13）s；第2次（0．34±0．05）s；第3次（0．29±0．07）s]，差异有显著性（P〈0．05）。结论青霉素诱导的发育期反复惊厥能够对学习和记忆功能产生远期的损害。
- 丁美丽倪宏王浙东李超
- 关键词：惊厥MORRIS水迷宫学习记忆青霉素
- 微管相关蛋白1轻链3在新生期大鼠惊厥后海马的表达被引量：1
- 2010年
- 目的 研究新生期大鼠反复惊厥后海马中自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达及3-MA对表达的干预作用.方法 实验在苏州大学衰老与神经疾病实验室进行.日龄6 d的sprague-Dawley大鼠72只随机（随机数字法）分成三组,每组24只,惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次,每次间隔30 min,连续9 d;对照组同样操作但不吸入三氟乙醚;3-MA组惊厥前腹腔注射3-MA（总量2μL）,同样方法吸入三氟乙醚诱导惊厥,方法同惊厥组.三组大鼠于最后一次惊厥后分别按1.5 h,3 h,6 h,24 h后取海马组织,采用蛋白质免疫印迹技术（western blot）分别检测三组大鼠大脑海马中LC-3的表达.各组LC3蛋白水平采用方差分析进行比较.结果 对照组和3-MA组同一时间点LC3表达差异无统计学意义,惊厥组（1.5 h,3 h,6 h,24 h）海马组织中LC-3的表达明显高于对照组和3-MA组同一时间点LC3表达（F值分别为4.70,5.28,8.51,5.89,P〈0.05）.结论 惊厥后自噬途径被激活,3-MA参与了自噬途径的调控.
- 倪宏巩勇陶陆阳
- 关键词：惊厥免疫印迹
