国家高技术研究发展计划(2007AA100502)
- 作品数：14 被引量：27H指数：3
- 相关作者：黄英严忠海曾溢滔颜景斌任兆瑞更多>>
- 相关机构：上海交通大学卫生部上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划上海市教育委员会重点学科基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 人转铁蛋白重组载体的构建及其表达调控的研究被引量：2
- 2008年
- 转铁蛋白(TF)是一种具有重要生理功能的糖蛋白,对它的开发利用具有重要的经济和社会效益。为探讨高效表达人转铁蛋白(hTF)的可行性及可能的调控机理,本文克隆得到了兔转铁蛋白启动子(RP promoter),并构建了以pcDNA3.1(-)为骨架的由RP启动hTF表达的重组载体,转染大鼠肝脏细胞株BRL-3A和小鼠乳腺上皮细胞株HC-11细胞分析了hTF表达情况,并进一步筛选得到了两个稳定表达hTF的细胞克隆。在细胞培养液中加入不同剂量的5-杂氮胞苷(5-azadC),分析甲基化修饰对基因表达的影响。结果显示,兔转铁蛋白启动子能成功启动hTF的表达;而且5-aza-dC能进一步提高了hTF表达水平,且提高的程度和5-aza-dC的剂量成正相关,但是不同克隆hTF表达升高程度不一样。结果说明hTF的表达受到甲基化修饰影响。
- 潘树标颜景斌任兆瑞
- 关键词：转铁蛋白甲基化
- 白细胞介素21的生物学功能及其抗肿瘤效应被引量：3
- 2009年
- 白细胞介素21(IL-21)属于I类细胞因子,主要由活化的CD4+T产生,作用于免疫系统中的大部分骨髓、淋巴细胞,具有广泛的生物学功能,是联系主动免疫与被动免疫的中间因子。IL-21能够调节体液和细胞介导的免疫应答,促进T细胞增殖分化,调节B细胞的增殖分化与调亡,增强NK细胞的细胞毒性作用与免疫监督功能。此外,IL-21还具有抗肿瘤作用,与其他细胞因子、疫苗等联合应用,可增强其抑制肿瘤细胞生长的功能。该文综述了IL-21的生物功能及其应用于抗肿瘤治疗的研究前景。
- 李栋俞慧清魏小元成国祥
- 关键词：白细胞介素21细胞因子免疫调节抗肿瘤作用
- 卵母细胞特异表达φC31整合酶载体pZP3-INT的构建及其在小鼠卵母细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 链霉菌噬菌体φC31整合酶是一种位点特异性重组酶(Site-specific recombinase,SSR),可介导链霉菌噬菌体attP位点(Phage attachment site)和链霉菌基因组attB位点(Bacterial attachment site)间的单向重组。为探讨它能否应用于卵母细胞特定基因的重组,文章采用卵巢针刺取卵法采集生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,将卵透明带糖蛋白3(ZP3)启动子驱动的φC31整合酶表达载体pZP3-INT和检测φC31整合酶位点特异性重组功能的重组质粒载体pBCPB+,通过显微注射导入到小鼠卵母细胞中。培养48h后,RT-PCR检测φC31整合酶mRNA表达以及PCR检测pBCPB+载体发生重组的情况。结果表明:载体pZP3-INT在卵母细胞中表达φC31整合酶mRNA;并且pBCPB+载体发生了位点特异性重组,提示φC31整合酶在卵母细胞中可以介导位点特异性重组反应。
- 徐焕宇龚秀丽郭歆冰马睛雯曾溢滔
- 关键词：卵母细胞基因操作位点特异性重组
- 重组人白细胞介素21在毕赤酵母中的分泌表达及活性分析被引量：1
- 2009年
- 为了获得有活性的重组人白细胞介素21(rhIL-21),本研究建立了在毕赤酵母(Pichia pastoris)中分泌表达rhIL-21的技术。首先,通过RT-PCR从人外周血淋巴细胞中扩增IL-21cDNA,克隆到酵母表达载体pPIC9K中,构建了重组酵母表达载体pPIC9K-hIL21 cDNA;然后,线性化的载体转化毕赤酵母表达菌株GS115,经抗性梯度筛选获得了多拷贝重组酵母菌;加入甲醇诱导培养后,SDS-PAGE和Western blotting检测到培养液中有rhIL-21的分泌表达,相对分子量约为16kD,ELISA结果显示摇瓶表达量可达229.28mg/L;表达上清经阳离子交换介质SPSepharose Fast Flow纯化后,目的蛋白纯度达到95%。细胞增殖试验结果显示该rhIL-21联合刀豆蛋白A(ConA)对人淋巴细胞的增殖具有显著的促进作用。本研究首次成功在毕赤酵母表达系统中分泌表达了有生物活性的rhIL-21,为相关疾病免疫治疗的研究奠定了基础。
- 李栋俞慧清火蓉芬陈建泉成国祥
- 关键词：白细胞介素21毕赤酵母分泌表达
- 应用接头PCR的方法扩增假attP位点
- 2009年
- φC31整合酶可高效介导外源基因特异、稳定地与哺乳动物基因组发生重组反应,基因组中被整合的位点为假attP位点.运用接头PCR的方法对φC31整合酶介导的含有attB序列及表达绿色荧光蛋白(GFP)的载体在牛基因组中的一个新的特异整合位点(假attP位点)进行扩增,并且显示接头PCR技术在克隆与已知序列相邻的未知旁侧序列上其具有高效、特异、灵敏等特点.
- 欧海龙黄英
- 关键词：ΦC31整合酶
- φC31整合酶与转基因动物研制被引量：1
- 2009年
- 链霉菌噬菌体φC31整合酶是一种位点性特异重组酶。它以单向整合方式进行重组,无须其他辅助因子,且整合效率高、表达稳定,所以近年来越来越多地被用来介导外源基因与宿主基因组的特异性整合,并被应用于哺乳动物的转基因整合技术中,它为攻克转基因动物研制过程中的随机整合、整合效率低、表达水平不高等技术瓶颈提供了新思路。对链霉菌噬菌体φC31整合酶的作用机制和特点优势作了简要的阐述,并对其广阔的应用前景作一展望。
- 曲立娟黄英
- 关键词：ΦC31整合酶转基因动物
- 应用生物信息学寻找山羊新的microRNA分子及其实验验证被引量：7
- 2008年
- microRNA(miRNA)是一类长约22个碱基的非编码RNA分子,在转录后水平调节基因的表达及其在细胞的增殖、分化、凋亡等过程中起着重要的调控作用。根据miRNA分子具有一定的保守性,文章将人、小鼠、牛、猪和狗5种哺乳动物已知的miRNA分子与NCBI公布的与山羊具有极高同源性的绵羊基因组序列对比,获得11条miRNA候选分子,然后通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证,发现在山羊脑组织中这11条分子均有表达,肝脏组织中有5条分子表达,初步确定为山羊新的miRNA分子,为寻找山羊miRNA提供了新的思路。
- 陈海漩严忠海龙健儿颜景斌黄英
- 关键词：MIRNA山羊生物信息学
- 克隆动物的端粒长度研究进展被引量：2
- 2009年
- 端粒是真核染色体分子末端的DNA区域,是由重复的DNA序列和端粒结合蛋白形成的DNA-蛋白复合物,对于染色体的复制和稳定起着重要作用。近年来研究结果表明,端粒长度的缩短与人类疾病和衰老密切相关。同时,体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)作为一种有效的无性生殖手段,越来越多的在科研和生产中得到应用。由于体细胞核移植通常采用体细胞作为核供体细胞,因而供体细胞的端粒长度、核移植后重组胚的端粒在胚胎早期是否会被修复、端粒长度是否有变化等问题,对于研究克隆动物的重编程、发育生物学都有着重要的指导意义。作者将对端粒的结构和端粒长度的机理研究、在克隆哺乳动物中对端粒长度的探索研究,以及近几年来关于端粒方面的一些研究进展加以阐述。
- 吕昆林丹黄英
- 关键词：端粒端粒长度哺乳动物体细胞核移植
- 应用实时荧光定量PCR测定牛体细胞端粒长度被引量：2
- 2010年
- 本研究为了验证应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative PCR,Q-PCR)测定牛基因组端粒长度的可行性,选取18个不同来源牛耳成纤维细胞抽提基因组DNA为样本,对Q-PCR和经典的Southern印迹法进行了相关性分析。结果显示,Q-PCR测定端粒长度相对T/S为1.16±0.24,Southern印迹法测量端粒平均TRF值为16.99 kb±0.85 kb,两种方法获得的结果相关性分析R2=0.5612(P<0.01),因此实时荧光定量PCR是一种测定牛基因组端粒长度的可靠的方法。
- 吕昆林丹许淼朱怡文黄英
- 关键词：荧光定量聚合酶链式反应印迹法牛体细胞端粒长度
- 牛的3种单个早期胚胎中基因表达的差异
- 2009年
- 为建立哺乳动物单个早期胚胎中基因表达的分析方法,解决胚胎实验中取材困难的矛盾,本研究以牛体内受精胚(invivo cultured,IVC)、体外受精(in vitro fertilization,IVF)和体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)3种来源的7日龄囊胚作实验材料,通过单个胚胎直接裂解后进行逆转录结合随机引物指数扩增的方法富集相应cDNA。对克隆囊胚cDNA库中随机挑选的15个阳性克隆进行测序和EST分析。并运用特异性的引物,对哺乳动物胚胎发育的3个重要基因Nanog,Oct-4和Sox2的表达进行了扩增和表达检测。结果表明,在哺乳动物胚胎囊胚阶段,这3个维持细胞多能性的相关基因的表达都相当活跃;相对于体内胚和体外受精胚,克隆胚中这3种基因的表达明显偏低。本方法为牛植入前胚胎发育阶段特异性基因的筛选和基因表达模式的研究提供了有效的材料和技术途径。
- 严忠海颜昊周一叶赵祥杰卢全晟曾溢滔
- 关键词：植入前胚胎重编程体外受精体细胞核移植CDNA
