国家自然科学基金(30340013)
- 作品数：10 被引量：34H指数：4
- 相关作者：江丽芳方丹云晏辉钧周经姣赵卫更多>>
- 相关机构：中山大学暨南大学南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技攻关计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SARS-CoV基因组及其产物的生物学功能(I)被引量：1
- 2004年
- 严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyn drome,SARS)在 2 0 0 3年我国南方爆发流行 ,波及众多国家和地区 ,引起了全球关注 .在确证SARS病原体为继Group1 ,2 ,3后的一类新冠状病毒SARSCoronavirus(SARS CoV)之后 ,全球对SARS相关冠状病毒进行了广泛的研究 .至目前为止 ,SARS CoV的基因组已在多个实验室中测定 ,并通过多种途径分析了其基因结构特征 .本文综述了SARS CoV的基因组成与结构、病毒的复制。
- 唐小龙江振友江丽芳蔡淑玉方丹云
- 关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒
- SARS患者血清IL-8、IL-12和TGF-β1的检测及意义被引量：7
- 2004年
- 目的 :探讨SARS患者血清IL 8、IL 12和TGF β1在SARS冠状病毒感染致病中的作用。 方法 :应用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定广州地区 2 8例SARS冠状病毒感染患者双份血清IL 8、IL 12和TGF β1的水平。实验数据采用两样本均数t检验法。结果 :2 8例SARS冠状病毒感染者血清IL 8水平、病程第 2周IL 12水平比正常健康对照组明显降低 (P <0 0 5 )。SARS冠状病毒感染者血清TGF β1水平与对照组比较无明显差异 (P >0 0 5 )。 结论 :IL 8和IL
- 江振友高阳方丹云周经姣晏辉钧江丽芳
- 关键词：IL-12血清IL-8TGF-Β1SARS冠状病毒SARS患者免疫过程
- SARS病例尸解标本和咽嗽液中病原体检测被引量：2
- 2005年
- 目的 确定严重急性呼吸系统综合征(SARS)病例尸解肺组织和咽嗽液中病原体种类。方法 用超薄切片电镜技术观察广东省传染性非典型肺炎流行早期3例死亡病例尸解肺组织标本,用RT- PCR法扩增尸解肺组织和SARS病人咽嗽液中SARS冠状病毒特异核酸片段,并进行序列测定。结果 在死亡病人肺组织中观察到衣原体的网状体、中间体以及原体颗粒,并见衣原体包涵体样结构;用RT- PCR法在2例尸解肺组织扩增出预期大小的DNA片段,测序后经相似性(BLAST)比较,其与SARS冠状病毒相应基因片段高度同源;用巢式RT -PCR技术在SARS病人咽漱液中扩增出SARS冠状病毒特异基因片段。结论 在SARS尸解肺组织中发现衣原体样颗粒,在尸解肺组织和咽漱液中扩增出SARS冠状病毒核酸片段,说明SARS患者可合并衣原体等微生物混合感染。
- 晏辉钧赵卫方丹云周经姣张文炳龙北国郭辉玉江丽芳
- 关键词：传染性非典型肺炎衣原体SARS冠状病毒逆转录多聚酶链式反应
- SARS冠状病毒M基因的克隆及其表达
- 2005年
- 从SARS冠状病毒(GD322株)组织培养上清中提取 RNA,进行 RT PCR扩增其 M基因并克隆到巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB,电穿孔法将重组体整合入酵母菌 P. pastoris,经抗生素 Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut+菌用甲醇诱导表达,SDS PAGE检测其表达产物。Mut+ 酵母转化菌经甲醇诱导可分泌表达约 65kDa和42 kDa的蛋白质,与SARS恢复期病人血清的免疫印迹证实它们为特异的重组M蛋白质,且获得的重组M蛋白质具有免疫反应性。
- 晏辉钧赵卫方丹云周经姣龙北国张文炳郭辉玉江丽芳
- 关键词：SARS冠状病毒M基因克隆巴氏毕赤酵母
- SARS-CoV基因组及其产物的生物学功能(Ⅱ)
- 2004年
- SARS CoV具有多种蛋白酶 ,其中有 3种蛋白酶 (解旋酶和另外两种半胱氨酸蛋白酶 )在病毒的复制、转录、翻译和 /或翻译后加工等过程中发挥重要的生理和病理作用 ;而其结构蛋白则在形成病毒粒子、参与病毒的致病机制中发挥重要作用 .本文综述了SARS CoV的主要产物酶及结构蛋白的结构及其功能等方面研究进展 .
- 唐小龙江振友江丽芳蔡淑玉方丹云
- 关键词：严重急性呼吸综合症冠状病毒开放读码框
- SARS冠状病毒的分离培养与鉴定被引量：12
- 2003年
- 采集急性期病人的咽拭子或漱口液,用Vero、Vero E6、MDCK、Hela、Hep-2等传代细胞,人胚肺二倍体细胞(HEL)和人胚肺(HP)细胞分离培养严重急性呼吸系统综合症(SARS)的病原体。结果用Vero、Vero E6、MDCK和HP细胞从标本中分离到一株病毒。间接免疫荧光试验发现,恢复期病人血清可与所分离的病毒起反应,在胞膜和胞浆中出现翠绿色荧光;中和试验结果表明,恢复期病人血清能中和病毒对细胞的致细胞病变作用:电镜下可观察到冠状病毒样颗粒:RT-PCR法可扩增到冠状病毒特异性基因片段,且其核苷酸序列与国内外发表的SARS冠状病毒(SARS-Cov)相应的基因序列相符,同源性达到100％。从传染性非典型肺炎病人的漱口液中分离到SARS冠状病毒,这种病毒与传染性非典型肺炎密切相关。
- 江丽芳赵卫晏辉钧方丹云周经姣龙北国吴义芳周俊梅梁瑜张文炳吴强郭辉玉
- 关键词：传染性非典型肺炎SARS冠状病毒
- 乙型脑炎病毒SA14-14-2株E蛋白主要抗原片段的高效表达被引量：5
- 2005年
- 在本实验室已构建的原核表达载体(含乙脑疫苗株SA14 14 2株E蛋白基因主要抗原片段)的基础上用巴斯德毕赤酵母系统表达,该片段长1113bp,编码371个氨基酸残基,将其亚克隆入酵母表达载体pPICZαA,以电穿孔法转化酵母X 33,用Zeocin平板筛选重组子,经甲醇诱导表达后,SDS PAGE和免疫印迹分析表达产物。由于糖基化不同,所表达产物有两种,其相对分子质量分别为44kDa和50kDa,表达量较高,约为290mg/L,经Western印迹验证,有较好的抗原性。在ELISA试验中,我们直接以PBS透析后的酵母上清包被,能够很明显地区分出乙脑阴阳性血清,与RT PCR检测的相符率达95%,为制备JEV的诊断抗原和基因工程疫苗提供了依据。
- 葛菲菲邱亚峰杨耀武陈溥言
- 关键词：巴斯德毕赤酵母
- 脂多糖诱导血管内皮细胞凝血途径相关因子基因表达变化被引量：6
- 2006年
- 目的:观察脂多糖(LPS)对脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达组织因子(TF)、组织因子抑制物(TFPI)和凝血酶调节蛋白(TM)的影响。方法:应用胰酶消化HUVECs并进行传代培养,用生长良好的第2、3代细胞进行实验。同时应用CCK-8测定细胞在不同浓度的LPS(1-100 mg/L)处理前后细胞活性;应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内TM、TF和TFPImRNA水平。结果:浓度为10 mg/L的LPS对细胞活力与对照组相比没有显著差异。浓度为10 mg/L的LPS作用使HUVECs显著上调TF mRNA表达,6-24 h可以使细胞TFPI mR-NA表达下调,以后渐恢复正常表达,72 h达到正常对照组水平,同时下调TM mRNA表达。结论:LPS(10 mg/L)对HUVECs的活性不造成直接的影响,可显著上调HUVECs的TF mRNA转录,抑制TFPI mRNA的转录,而不改变TMmRNA的转录,这可能与LPS在感染过程中诱导血栓形成,血液凝固和D IC发生相关。
- 唐小龙蔡淑玉江振友王华东江丽芳
- 关键词：脂多糖类凝血致活酶血栓调节蛋白脐静脉内皮细胞基因表达
- SARS患者尸检肺组织的TGF-β检测
- 2005年
- 为了研究TGFβ1在严重急性呼吸综合征(Severeacuterespiratorysyndrome,SARS)尸检肺组织中的表达情况及其在患者肺组织损伤中的可能作用,对2例SARS尸检肺组织进行病理学观察;应用免疫组化方法检测TGFβ1在尸检肺组织及对照肺组织中的表达情况,并进行半定量分析。结果显示病例一尸检肺组织主要病理改变为弥漫性肺泡损伤,透明膜形成及渗出性炎症。病例二尸检肺组织除了上述改变外,还伴有肺泡间质纤维增生和肺泡早期纤维化等机化性肺炎改变。TGFβ1平均灰度值在SARS患者肺组织为103.43±0.62;小叶性肺炎组织为131.47±2.64;正常肺组织中为144.24±0.09。3组比较有显著差别(P值<0.05)。SARS病毒感染后可引起急性肺间质和肺泡渗出性炎症,中后期病例还伴有肺泡间质纤维增生和肺泡早期纤维化;SARS患者肺组织损伤及纤维化与SARS冠状病毒感染后TGFβ1表达增强有关,提示抗TGFβ1治疗在SARS患者肺损伤、纤维化的预防、治疗过程中可能具有一定的临床意义。
- 周经姣林汉良方丹云吴惠茜晏辉钧赵卫龙北国江丽芳
- 关键词：严重急性呼吸综合征肺损伤纤维化TGF-Β1
- SARS冠状病毒M基因在大肠杆菌中的表达及其免疫学特性初步研究被引量：1
- 2005年
- 【目的】在大肠杆菌中表达SARS冠状病毒包膜(M)蛋白与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白,并对其进行血清学鉴定。【方法】克隆编码SARS冠状病毒M蛋白的基因,并在原核系统中表达GST-M融合蛋白,用Westernblot和酶联免疫吸附试验(ELISA)分析GST-M融合蛋白。【结果】10份SARS患者恢复期血清均能识别M-GST融合蛋白,并在Mr=52000附近出现特异性结合带;而10份正常人血清不与M-GST融合蛋白起反应。【结论】本研究获得了SARS冠状病毒GST-M融合蛋白,它可与SARS患者的恢复期血清产生特异性的结合反应,为研究SARS冠状病毒感染宿主细胞的过程和制备重组疫苗提供了条件。
- 晏辉钧赵卫方丹云周经姣龙北国张文炳郭辉玉江丽芳
- 关键词：SARS冠状病毒GST融合蛋白融合蛋白免疫学特性大肠杆菌特异性结合
