国家自然科学基金(30371657)
- 作品数：20 被引量：59H指数：4
- 相关作者：马丁卢运萍周剑锋周剑峰吴鹏更多>>
- 相关机构：华中科技大学海南医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
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- ROCK-Ⅰ蛋白活性变化对卵巢癌细胞恶性表型的影响被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨ROCK-Ⅰ蛋白活性的改变对卵巢癌细胞恶性表型的影响。方法:将ROCK-Ⅰ的显性激活突变体p160△3以脂质体介导,转染人卵巢癌细胞系SW626、SKOV3、A2780和CaOV-3细胞,采用RT-PCR与Westernblot印迹法检测转染前后p160△3mRNA和蛋白的表达,Boyden小室观察该突变体对4种卵巢癌细胞株侵袭及迁移能力的影响,MTT比色法测定转染前后细胞增殖及粘附能力的变化。结果:转染后,ROCK-Ⅰ的显性激活突变体p160△3在细胞内获得有效表达。转染了p160△3的SW626、SK-OV3、A2780和CaOV-3细胞的侵袭能力较各自的对照组分别提高(31.1±6·4)%、(33.0±2.0)%、(24.5±8)%及(39.4±2.8)%;同时四株细胞的随机运动能力较各自的对照组分别提高(31.9±1.0)%、(31.5±1.9)%、(23.0±0.5)%及(38.7±1·2)%,定向运动能力较各自的对照组分别提高(33.9±1.1)%、(33.0±3.6)%;(25.0±3.9)%及(40·2±2.6)%。转染后两株细胞的体外粘附能力及增殖能力均未显示出明显变化。空质粒pCAG-myc转染组与对照组间差异无显著统计学意义(P>0.05)。结论:ROCK-Ⅰ蛋白活性的改变与人卵巢癌细胞的体外侵袭与迁移密切相关,ROCK-Ⅰ蛋白活性的提高明显促进卵巢癌肿瘤细胞的侵袭与迁移。
- 韩志强洪振亚胡春霞胡轶陈彩虹卢运萍周剑峰马丁
- 关键词：ROCK-I卵巢肿瘤
- 端粒酶逆转录酶在脐静脉内皮细胞耐受曲古抑菌素A诱导凋亡中的作用
- 2007年
- 目的观察曲古抑菌素A（TSA）对脐静脉内皮细胞及官颈癌细胞凋亡、端粒酶逆转录酶（hTERT）表达的影响,并探讨hTERT在脐静脉内皮细胞耐受TSA中的作用。方法磺酰罗丹明B （RSB）法检测药物动力学特征;流式细胞仪检测周期改变和凋亡;RT-PCR检测hTERT和p21^Waf1基因表达变化;免疫荧光结合流式细胞术检测hTERT蛋白表达变化;转染hTERT质粒后,PCR-TRAP- ELISA法检测转染细胞端粒酶活性;AnnexinV／PI检测转染细胞在TSA作用下的早期凋亡。结果在大剂量TSA作用脐静脉内皮细胞后,增殖抑制、周期阻滞,但凋亡并不显著;HeLa细胞在相同剂量的TSA作用下凋亡明显。脐静脉内皮细胞经TSA诱导后,hTERT表达上调,p21^Waf1则无明显变化;而HeLa细胞p21^Waf1表达上升,hTERT表达下降。转染显性负突变hTERT的脐静脉内皮细胞,其端粒酶活性显著低于对照组。TSA作用转染不同质粒的脐静脉内皮细胞的凋亡率与对照组差异有统计学意义。结论脐静脉内皮细胞可以耐受大剂量TSA诱导的凋亡,hTERT表达上调可能是脐静脉内皮细胞耐受TSA诱导凋亡的重要机制之一。
- 吴鹏奚玲陈刚王蓓蓓罗丹枫卢运萍周剑锋马丁
- 关键词：曲古抑菌素A凋亡端粒酶逆转录酶P21^WAF1
- Mcl-1蛋白在宫颈病变中的表达及意义被引量：2
- 2007年
- 目的:髓样细胞白血病-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)蛋白是bcl-2家族成员,它在调控肿瘤细胞的凋亡?增殖?分化等过程中起一定作用。本研究拟检测子宫颈病变组织中Mcl-1蛋白的表达,探讨该蛋白在宫颈癌形成和演进进程中的意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测83例石蜡包埋的子宫颈组织中Mcl-1的表达情况,并结合临床病理分型分析其表达的意义。结果:Mcl-1蛋白在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宫颈癌组织中的阳性率分别为4.0%,33.3%和74.2%,3组样本中Mcl-1的阳性率差异有统计学意义(P<0.05),宫颈癌病理学分级G1及G2期与G3相比,差异有统计学意义(P<0.05)。Mcl-1蛋白表达阳性率与CIN的分级、与宫颈癌临床分期、组织学分型和淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:Mcl-1蛋白在宫颈癌组织中表达升高,可能在宫颈癌的发生发展过程中起重要作用。
- 胡轶田媛吴鹏周剑峰马丁
- 关键词：宫颈肿瘤基因表达免疫组织化学
- 应用基因芯片分析曲古菌素A促人白血病细胞株Molt-4凋亡的机制被引量：8
- 2006年
- 背景与目的:研究表明组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase,HDAC)抑制剂曲古菌素A(trichostatinA,TSA)能以较低浓度诱导多种肿瘤细胞凋亡,但具体机制不甚明了。本实验拟研究TSA诱导人白血病细胞株Molt-4凋亡的作用及其分子机制。方法:应用细胞培养、MTT、PI单标流式细胞术、DNAladder观察TSA诱导Molt-4细胞和健康人外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)凋亡的作用,用基因芯片(microarray)、逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)和Westernblot等方法检测特定浓度TSA作用Molt-4细胞一定时间后基因表达的差异。结果:TSA能以时间、浓度依赖性方式诱导Molt-4细胞凋亡,相同浓度和时间范围内TSA对PBMC无明显的诱导凋亡作用。TSA处理9h,基因芯片分析发现Molt-4细胞中表达下调的基因有313个。下调基因编码产物包括信号转导分子、转录因子、酶、受体等,其生物学功能包括调节细胞生长、分化发育、凋亡等。其中STAT5A下调80.4%,MYC下调77.3%,ikaros下调83.1%,半定量RT-PCR验证均显示TSA作用9h后这些基因的表达下调,同时STAT5A及MYC蛋白在TSA作用24h时表达也明显降低。结论:TSA能诱导Molt-4细胞凋亡并抑制其增殖,但对PBMC无明显作用。TSA对Molt-4细胞的这种选择性诱导凋亡和抑制增殖的机制与促进增殖、抗凋亡基因的变化有关。
- 洪振亚易莉莎苗新宇卢运萍周剑锋刘文励
- 关键词：曲古菌素AMOLT-4细胞凋亡基因芯片
- 曲古抑菌素A诱导Hela细胞凋亡过程中端粒酶逆转录酶表达的变化被引量：4
- 2007年
- 目的:观察Trichostatin A(TSA)对子宫颈癌细胞株Hela细胞的体外作用,探讨TSA对子宫颈癌细胞的作用机制,以及细胞凋亡与端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)之间的关系。方法:倒置相差显微镜观察细胞形态变化;磺酰罗丹明B(sulforhodamine B;SRB)法检测药物动力学特征;流式细胞仪检测药物作用前后Hela细胞凋亡情况;RT-PCR检测hTERT和p21Waf1基因变化;免疫荧光检测TSA作用前后hTERT表达变化。结果:在0.5～2.0μmol/LTSA作用下,Hela细胞生长明显受抑制。倒置相差显微镜检测Hela细胞经TSA处理后形态发生明显变化。2.0μmol/LTSA作用于Hela细胞,48h以前表现细胞周期的变化,48h后则出现明显的凋亡。hTERT经1.0μmol/LTSA诱导后表达下调,呈时效关系。免疫荧光检测hTERT蛋白经1μmol/LTSA处理后表达下降;结论:一定浓度的TSA可以诱导子宫颈癌细胞株Hela凋亡,其作用机制可能与下调hTERT表达有关。
- 吴鹏奚玲陈刚桂伶俐王蓓蓓罗丹枫卢运萍周剑锋马丁
- 关键词：曲古抑菌素A凋亡端粒酶逆转录酶
- 水通道蛋白1在宫颈病变中的表达及意义被引量：10
- 2009年
- 目的:检测宫颈病变组织中水通道蛋白1的表达,探讨该蛋白在宫颈癌形成和演进进程中的意义。方法:用免疫组织化学SP法检测83例石蜡包埋宫颈组织中水通道蛋白1的表达,结合临床病理分型分析其表达的意义。结果:水通道蛋白1在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和宫颈癌组织中的阳性率分别为4.0%,33.3%和74.2%,3组样本中水通道蛋白1阳性率的差异有统计学意义(P<0.05),宫颈癌病理学分级1+2级和3级相比,差异有统计学意义(P<0.01)。水通道蛋白1表达阳性率与CIN的分级,与宫颈癌临床分期、组织学分型和淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:水通道蛋白1在宫颈癌前病变和宫颈癌组织中表达升高,可能在宫颈癌的发生发展过程中起重要作用。
- 胡晓继廖书杰王世宣卢运萍马丁
- 关键词：宫颈肿瘤宫颈上皮内瘤样病变免疫组织化学水通道蛋白1
- 显性负突变hTERT在TSA诱导Hela细胞凋亡中的作用
- 2008年
- 目的通过转染显性负突变hTERT探讨其在TSA诱导宫颈癌细胞株Hela凋亡中的作用。方法PCR-TRAP-ELISA法检测转染显性负突变,野生型hTERT和对照质粒以后Hela细胞的端粒酶活性。磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法检测细胞生长率;AnnexinⅤ/PI法检测各组转染细胞在TSA作用下的早期凋亡。结果转染显性负突变hTERT的Hela细胞的端粒酶活性显著低于对照组,2μmol/LTSA作用对照细胞Hela-puro、Hela-DNhTERT和Hela-WThTERT细胞,Hela-DNhTERT相对于Hela-puro生长率差异明显,Hela-DNhTERT细胞凋亡率明显高于Hela-WThTERT和Hela-puro组。结论转染DNhTERT对TSA诱导的Hela细胞凋亡具有协同作用。
- 吴鹏奚玲陈刚卢运萍周剑锋马丁
- 关键词：曲古抑菌素A凋亡端粒酶逆转录酶
- 淋巴组织中新基因C14ORF44的生物信息学分析被引量：2
- 2007年
- 目的研究淋巴瘤和反应性增生淋巴结的基因表达差异。方法将淋巴瘤淋巴结标本和反应性增生淋巴结标本的mRNA与表达谱芯片杂交,获得表达差异基因。用生物信息学方法对新基因C14ORF44进行初步分析。结果表达谱芯片共找出了152条差异表达基因。用生物信息学方法分析了C14ORF44的基因结构、染色体定位、编码蛋白质的理化性质、亚细胞定位等信息。对C14ORF44蛋白的多物种相似蛋白进行了系统进化分析,基本明确了该基因编码一个在胚胎和肿瘤细胞中高表达、进化中保守的核蛋白。结论生物信息学分析表明,C14ORF44是一个有研究价值的癌相关蛋白。这个蛋白可能参与正常的胚胎发育,但也与肿瘤形成有关。
- 白向阳严玲玲朱涛卢运萍周剑锋马丁
- 关键词：淋巴瘤生物信息学
- 丁酸钠诱导MCF-7细胞凋亡反义cDNA文库的构建和初步鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的构建丁酸钠诱导MCF-7细胞凋亡过程的反义cDNA文库，以分离丁酸钠抗肿瘤效应基因。方法收集经2．5mmol／L丁酸钠处理0、12、18、24、36、48、72h的人乳腺癌MCF-7细胞，提取poly（A）＋RNA。逆转录合成eDNA第一链和第二链，双链cDNA修平末端后连上EeoRⅠ／HindⅢ接头。分别用EcoR Ⅰ／Hind Ⅲ酶切消化后，反向连上载体pcDNA 3．1，连接产物转化大肠杆菌得一反义cDNA文库，随机挑取40个克隆子进行酶切鉴定。结果构建的反义cDNA文库含1×10^6重组子，重组效率为90％，插入子平均长度为1．5kb。结论构建的文库容量较大，质量较高，为进一步分离丁酸钠抗肿瘤效应基因奠定了基础。
- 奚玲陈刚吴鹏王蓓蓓周剑锋马丁
- 关键词：脱噬作用CDNA文库丁酸钠
- BIOMED-2多重聚合酶链反应检测抗原受体基因重排在淋巴增殖性疾病诊断中的应用被引量：4
- 2009年
- 目的建立敏感而有效的检测免疫球蛋白（Ig）和T细胞受体（TCR）基因重排的方法，并探讨在淋巴增殖性疾病诊断和鉴别中的作用。方法采用BIOMED-2多重聚合酶链反应，检测来自54例淋巴增殖性疾病患者的58份淋巴组织标本，分析抗原受体基因重排状况及其克隆来源。结果在88．0％（25份标本中22份）B细胞淋巴瘤／白血病和53．3％（15份标本中8份）T细胞淋巴瘤中检出Ig／TCR呈单克隆重排；在17例淋巴组织非恶性增殖患者的病理活检标本中，14例（82．4％）呈多克隆重排；在合格的57份标本中有44份（77．2％）的结果与最终诊断相符。联合检测Igk和TCR8并未提高Ig／TCR单克隆重排的检出率，但可能有助于Igk^＋和TCR8^＋淋巴瘤的诊断。结论对于分析淋巴增殖性疾病，尤其是不典型病例的克隆来源状况，BIOMED-2多重聚合酶链反应检测抗原受体基因重排是迅速、敏感而可靠的方法。
- 黄亮熊婕耿哲柯昌庶刘艳玲黄梅李登举肖毅汤屹孟凡凯邓金牛孙汉英刘文励周剑峰
- 关键词：淋巴组织增殖性疾病克隆分析基因重排聚合酶链反应
