国家自然科学基金(30340039)
- 作品数：6 被引量：26H指数：3
- 相关作者：周兰苗静琨李星星左国伟赖天霞更多>>
- 相关机构：重庆医科大学美国芝加哥大学芝加哥大学更多>>
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- 钙结合蛋白S100A6对Wnt／β-catenin信号途径的影响被引量：9
- 2008年
- 目的研究钙结合蛋白S100A6对Wnt／β-catenin信号途径的影响及其机制。方法异丙基β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达、谷胱甘肽-琼脂糖球珠分离纯化融合蛋白GST-hS100A6；Westernblot和荧光素酶活性分析法检测S100A6对细胞内B—catenin水平和B—catenin／T细胞因子4（TCF4）活性的影响；GST-pulldown和Westernblot技术研究S100A6与该信号途径主要成员β-catenin、糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）、Dvl和Axin之间的相互作用。结果S100A6可致MG63和HCT1 16细胞β—catenin水平升高，并可使HEK293细胞β—catenin／TCF4活性增强；S100A6与β—catenin、GSK-36和Dvl之间存在着直接的相互作用，而与Axin之间无相互作用。结论S100A6能够增强Wnt／β-catenin信号途径的活性，其机制可能涉及S100A6与该途径重要成员β—catenin、GSK-3β和Dvl之间存在着直接的相互作用有关。
- 赖天霞苗静琨何焕玲左国伟李星星王嫣王胜何通川周兰
- 关键词：蛋白质相互作用
- 人S100A2-GST融合蛋白原核表达和纯化被引量：3
- 2008年
- 目的:制备人S100A2-GST融合蛋白(Human S100A2-GST fusion protein,hS100A2-GST),为进一步研究人hS100A2蛋白的功能及其与其它因子或系统的相互作用奠定基础。方法:从pHAHA-hS100A2中双酶切获取hS100A2基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-moluc-hS100A2,转化BL21后酶切鉴定,IPTG诱导重组菌表达融合蛋白hS100A2-GST,再经过Glutathion-Sepharose4B球珠分离纯化、SDS-PAGE及Western Blot鉴定,Bradford法蛋白定量。结果:XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切该重组质粒后获得2个片段,分别约300bp和5kb,提示pGST-moluc-hS100A2构建正确;重组菌株经过IPTG诱导后,表达分子量约为36kD的蛋白,产率达5mg/L菌液;Glutathion-Sepharose4B球珠纯化后,该融和蛋白纯度达92%;Western Blot显示该蛋白可以被S100A2的抗体特异识别,证实其为hS100A2-GST融合蛋白。结论:成功构建了hS100A2-GST原核表达质粒pGST-moluc-hS100A2;该质粒可在大肠杆菌中诱导表达hS100A2-GST融合蛋白,产率高;应用Glutathion-Sepharose4B球珠可获得纯度达92%的该蛋白。为后续有关hS100A2的研究打下了基础。
- 卫佳王胜苗静琨陈英华李星星吴丽美左国伟何通川周兰
- 关键词：蛋白纯化蛋白鉴定
- Wnt/β-连环蛋白信号途径活性的分析系统的建立被引量：3
- 2004年
- 目的 :建立Wnt/ β -连环蛋白信号途径功能活性的分析系统。 方法 :首先构建一个表达 β -连环蛋白 -绿色荧光蛋白的融合蛋白的载体 ,pCMV -bcGFP ;再用之转染HEK2 93细胞 ,用G4 18和LiCl筛选出稳定表达该融合蛋白的细胞 ,克隆建株并鉴定。结果 :成功获得稳定表达该融合蛋白的细胞株 ,即 2 93-bc -GFP细胞株 ;在荧光显微镜下以及蛋白质印迹分析证实 :所获得的 2 93-bc -GFP细胞株表达该融合蛋白的基础水平极低 ;用Wnt1和LiCl处理后可以明显地使该融合蛋白在细胞内的水平升高。结论 :上述结果提示该分析系统是以Wnt依赖的方式、受 β -连环蛋白调节的。该分析系统可以用作一个功能报告系统 ,以鉴定肿瘤发生中导致 β-连环蛋白信号途径失调的潜在的上游因子 ,也同样可以用于筛选那些特异抑制人类肿瘤中
- 冯涛周兰何通川
- 钙结合蛋白S100A2对Wnt/β-catenin信号途径活性的上调作用被引量：3
- 2008年
- 目的研究钙结合蛋白S100A2对Wnt/β-catenin信号途径活性的影响,并探讨其可能的机制。方法原核诱导表达GST-hS100A2,经纯化后加入骨肉瘤细胞株MG63和人结肠癌细胞株HCT116的培养液中,Western blot检测细胞中β-catenin含量的变化;荧光素酶活性分析法检测S100A2对HEK293细胞中β-catenin/TCF4活性的影响;以表达GSK-3β、DVL、Axin的相应质粒分别转染HEK293细胞,GST-Pulldown/Western blot实验检测S100A2与这些蛋白质和β-catenin之间的相互作用。结果S100A2使MG63和HCT116细胞中β-catenin含量增加、β-catenin/TCF4活性增强;S100A2分别与β-catenin和GSK-3β之间存在相互作用,而与DVL和Axin之间则未发现相互作用。结论S100A2可以上调Wnt/β-catenin信号途径的活性,其机制可能涉及S100A2与β-catenin和GSK-3β之间的相互作用。
- 赖天霞苗静琨左国伟何焕玲李星星卫佳吴丽美寇小琴何通川周兰
- 关键词：蛋白质相互作用
- 人S100A6-GST融合蛋白的原核表达和纯化被引量：8
- 2007年
- 目的:制备人S100A6-GST融合蛋白,为研究人S100A6((hS100A6)蛋白的功能奠定基础。方法:从pHAHA-hS100A6中双酶切获取hS100A6基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-moluc-hS100A6,转化BL21后,IPTG诱导重组菌表达hS100A6蛋白,SDS-PAGE及WesternBlot鉴定表达产物,Glutathion-Sepharose4B球珠分离纯化。结果:重组菌株表达出与理论预测值相符的一个约36ku的hS100A6融合蛋白,纯化后的融合蛋白的产量为3mg/L菌液,纯度约92%。结论:成功构建了hS100A6-GST原核表达质粒,在大肠杆菌中表达纯化后得到较高浓度的hS100A6-GST融合蛋白,为hS100A6蛋白功能的研究打下了基础。
- 苗静琨赖天霞左国伟李星星王嫣蒋薇何通川周兰
- 关键词：融合蛋白原核表达蛋白纯化
- S100A6的转录调控及其与肿瘤关系的研究进展被引量：3
- 2007年
- S100蛋白家族是一类非泛素化、EF-手型钙结合蛋白，通过与钙离子及靶蛋白的相互作用，在体内发挥多种生物学作用，参与细胞周期活动、细胞分化、肿瘤生长以及细胞外基质分泌活动等过程。其分布具有细胞、组织特异性。其中多个成员在肿瘤中表达异常，并与肿瘤的增殖、浸润转移和凋亡密切相关，其中包括S100A6。S100A6又称为钙周期蛋白（Calcyclin，Cacy），过去也称为2A9、5810、PRA和CACY。
- 苗静琨周兰
- 关键词：S100A6肿瘤关系转录调控钙结合蛋白S100蛋白生物学作用
