国家自然科学基金(30973591)
- 作品数：18 被引量：58H指数：5
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- 相关机构：华侨大学教育部中国药科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组腺相关病毒载体诱导的天然免疫反应及机制被引量：7
- 2012年
- 重组腺相关病毒(rAAV)已成为基因治疗领域应用最广泛的载体之一。临床前研究显示其具有很高的安全性,但人体免疫毒性仍是制约其临床疗效的关键,因此有关rAAV免疫机制的研究成为近期热点。尽管天然免疫在获得性免疫反应中发挥重要作用,但与rAAV有关的天然免疫研究过去一直未被重视。直到最近,才确认有至少3种人体细胞(树突状细胞、巨噬细胞和内皮细胞)参与了rAAV的天然免疫,作用机制为可识别载体基因组的TLR9或病毒衣壳TLR2所介导,NF-κB或干扰素调节因子(IRFs)信号通路被激活,导致各种炎性因子及I型干扰素的大量表达。自身互补型rAAV诱导的TLR9依赖性天然免疫较单链rAAV更为强烈。本文重点对近期发现的激活天然免疫反应的宿主与rAAV的相互作用、涉及的信号通路、天然免疫对获得性免疫以及转基因表达的影响进行综述。
- 刁勇许瑞安
- 关键词：重组腺相关病毒基因治疗免疫信号通路
- 重组腺相关病毒基因药物的病毒滴度定量测定被引量：4
- 2010年
- 重组腺相关病毒(rAAV)具有免疫原性低、在各种细胞中介导的转基因表达时间长等优点,将成为最广泛应用的基因治疗载体之一。rAAV基因药物临床研究历经16年,其有效性和安全性已得到充分证实,但其准确、可靠的定量测定标准方法仍未建立。目前采用的rAAV滴度测定方法按照原理可分为生物测定和物理测定两大类。生物测定主要评估载体传递转基因的能力,包括转导和感染滴度测定。物理测定则基于其物理性质,可细分为病毒颗粒和基因组滴度测定。本文对现有rAAV滴度测定方法的基本概念、原理、优点、缺点和适用范围等作一详细介绍。
- 刁勇王启钊吕颖慧许瑞安
- 关键词：生物学鉴定法依赖病毒腺相关病毒
- Tm值差异型不对称PCR方法的建立及其在分子诊断中的应用
- 2016年
- 多数分子诊断方法对靶基因的检测都是以单链DNA为基础的,如何获得大量和高质量的单链靶DNA分子一直是研究热点.以包含BRCA1基因上3个单核苷酸多态性(SNP)的DNA片段为研究对象,通过调整不对称扩增引物碱基序列组成(5′-端引入错配或加入锁核苷酸(locked nucleic acid,LNA)),使用相差10倍浓度来增加不对称引物间Tm值差异,改进扩增条件(添加增强剂的扩增缓冲液,不同退火温度的二阶循环扩增程序)后,进行不对称扩增来产生大量单链靶DNA产物.结果表明Tm差异型不对称PCR(Tm difference asymmetric PCR,TDA-PCR)可有效提高单链DNA分子产率,降低引物设计难度,也扩大了模板序列的适用范围.此外,还针对禽流感病毒H5N1的血凝素(haemagglutinin)HA基因保守序列进行不对称扩增,用获得的单链DNA为模板进行焦磷酸测序检测,所得结果与参考序列一致且无明显干扰信号.因此,采用Tm值差异型不对称PCR可使焦磷酸测序等分子诊断流程更为简便,成本更低,效率更高,具有很好的通用性和实用性.
- 饶华春滕继云刁勇宋沁馨王立强杨会勇周国华
- 关键词：焦磷酸测序禽流感病毒
- 不同抗原修复方法对Ki-67蛋白检测结果的影响被引量：5
- 2011年
- 目的:探讨不同抗原修复对A549肿瘤组织内Ki-67蛋白检测结果的影响。方法:采用酶修复法、柠檬酸微波修复法、柠檬酸高压修复法、Tris/EDTA微波修复法、Tris/EDTA高压修复法等对肿瘤组织的石蜡切片进行修复,采用二步法进行免疫组织化学染色。结果:肿瘤组织的核蛋白Ki-67经柠檬酸微波修复后,染色效果较其他修复方法明显增强,且定位佳,对比度清晰。结论:在核蛋白Ki-67免疫组织化学染色中,柠檬酸微波修复法优于其他抗原修复方法。
- 邹金李亨芬邢咏梅聂金梅白如玉刁勇
- 关键词：免疫组织化学KI-67抗原修复
- 仅基于RNA元件构建可诱导哺乳动物细胞基因表达的调控系统被引量：3
- 2011年
- 大量的临床前和临床研究结果已表明基因治疗是理想的疾病治疗手段,然而如何实现治疗基因表达的精确调控仍然是研究人员面临的主要挑战。目前临床前研究常用的基因调控系统多基于控制转录,对反式转录激活因子和专门启动子元件的依赖限制了该系统的临床应用。最近,仅采用RNA元件构建的几种基因表达调控系统得到开发,其作用机制为核酶介导的RNA自我切割、RNA干扰、mRNA翻译启动或终止控制等。该类系统的调控活性由小分子配体反式控制,诱导基因表达的变化幅度可观,反应快速,在哺乳动物体内外均可实现。该系统结构模块化,调控活性可调节,可以克服现有转录调节系统的一些应用局限,对将来基因治疗的临床应用具有重要意义。
- 刁勇
- 关键词：基因表达基因治疗哺乳动物细胞
- 以VEGF/VEGFR为靶点的肺癌治疗药物研究进展被引量：2
- 2012年
- 目的:论述以血管内皮生成因子(VEGF)及其受体VEGFR为靶点的肺癌的研究现状,探讨VEGF及VEGFR与肺癌发生及发展的关系,为肺癌抗血管生成的治疗提供新的药物作用途径。方法:依据近年国内外的相关文献,进行归纳和分析,对VEGF及肺癌发生相关系统进行研究,并在此基础上,提出肺癌抗血管治疗的新思路。结果:研究发现,在肺癌的发生及发展过程中,VEGF出现过量表达。为达到抑制其促血管生成的作用,以VEGF/VEGFR为靶点,研制抑制VEGF活性的药物或干扰VEGFR的药物,可在一定程度上实现通过抑制相关抗血管生成治疗肺癌的目的。结论:利用新的抗血管途径有望在肺癌治疗中研发出新药,提高肺癌治疗效果。
- 白如玉李亨芬聂金梅邢永梅邹金刁勇
- 关键词：肺癌血管生成靶点VEGF
- M细胞模型及其在生物大分子药物口服递药研究中的应用被引量：4
- 2011年
- 如何克服胃肠道吸收屏障是蛋白质、多肽和核酸等生物大分子药物口服给药面临的重大挑战。M细胞是胃肠道上皮细胞内一种特殊的抗原摄取细胞,具有高内吞和低降解特征,可能对生物大分子药物的口服吸收发挥重要作用。M细胞体外共培养系统的开发,以及在其基础上建立的体外模型,促进了对M细胞本身以及大分子药物口服给药系统的研究。本文综述了M细胞特殊的结构、功能、形成及生物标志特点,讨论了M细胞体外模型在开发生物活性大分子药物口服给药系统的应用。
- 李亨芬邹金白如玉邢永梅聂金梅刁勇
- 关键词：M细胞体外模型大分子药物口服疫苗
- 重组人kallistatin蛋白在毕赤酵母中的高效表达及生物活性分析被引量：10
- 2010年
- 为了研究kallistatin(Kal)的生物活性,本实验构建了可分泌表达Kal的毕赤酵母菌株。首先通过PCR方法从pAAV-Kal中扩增出KalcDNA,并克隆至酵母表达载体pPIC9,得到甲醇酵母分泌型表达载体pPIC9-Kal,然后将载体线性化并电击转化毕赤酵母GS115(his4),通过MD平板筛选出阳性表达菌株。阳性表达菌株在BMMY培养基(pH7.0)中29℃培养,经2%甲醇诱导表达96h,摇瓶表达量可达14mg/L。表达上清经PhenylSuperose、Heparin SepharoseFF分离纯化,目的蛋白纯度达到98%,分子量为58kDa。生物活性实验显示,所得到的Kal蛋白具有较好的抗氧化活性,过氧化物酶活性达到(163±4)U/(mg·min),可有效降低H2O2对LX-2细胞的氧化损伤。另外,重组产生的Kal还能抑制HUVEC细胞的增殖。本研究首次成功地利用毕赤酵母表达系统分泌表达了有生物活性的Kal,为继续开展其抗肿瘤活性奠定了基础。
- 黄晓平王晓董浩赵小峰李招发王启钊许瑞安刁勇
- 关键词：KALLISTATIN毕赤酵母活性
- 重组腺相关病毒载体相关性杂质被引量：8
- 2011年
- 可以稳定表达治疗基因而无明显不良反应的重组腺相关病毒(rAAV)载体被认为是最有发展前景的基因治疗载体。但如何建立可以有效去除rAAV载体内具有潜在致病危害的杂质、产品质量符合临床使用要求的纯化工艺是研究人员面临的巨大挑战。其中针对载体相关性杂质的纯化工艺尤为关键,因为该类杂质的性质与真正的rAAV载体极其相似,一旦存在便难以去除,且会引起严重不良反应。以下总结了该类杂质形成的过程及有别于rAAV载体的特点,并对可以防止其生成或将其与rAAV载体有效分离的技术手段进行了评价。
- 刁勇王启钊肖卫东许瑞安
- 关键词：腺相关病毒纯化基因治疗
- 下调间隙连接蛋白43表达对血管内皮细胞生物功能的影响被引量：3
- 2015年
- 间隙连接蛋白43(Cx43)在伤口愈合过程中发挥重要作用。血管生成也是创伤修复的一个重要特征,但目前很少有关Cx43对血管内皮细胞功能影响的研究。本文采用小干扰RNA(si RNA)特异性减少Cx43在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的表达,研究Cx43的表达下调对HUVEC细胞间信号传递、活力、增殖、迁移以及血管生成活性的影响。结果表明,经si RNA处理后,HUVEC内Cx43的表达降低约80%(P<0.05),HUVEC细胞间信号传递功能减少约65%(P<0.05),细胞活力、增殖和迁移活性显著降低(P<0.05)、血管生成速度减缓。推测在创伤早期维持Cx43的低水平表达,抑制渗透性和炎性等异常血管的生成速度,是保证伤口愈合过程中各关键步骤协调进行的前提条件之一。
- 张才臻母晓凤徐先祥邱飞林俊生刁勇
- 关键词：间隙连接蛋白43伤口愈合内皮细胞血管形成
