国家科技重大专项(2014ZX09304314-003)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：蔡冉张素芬马颖潘英许桂丽更多>>
- 相关机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所中国药科大学南京医科大学更多>>
- 发文基金：江苏省社会发展科技计划江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 单纯疱疹病毒Ⅱ型gC2蛋白在CHO细胞中的表达、纯化及其免疫活性被引量：1
- 2014年
- 目的在CHO细胞中表达单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)Ⅱ型gC2蛋白,纯化后检测其免疫活性。方法利用ANTHEWIN等软件分析GenBank中HSVⅡ型gC2的氨基酸序列,筛选抗原表位富集、且亲水性较好的蛋白胞外区片段,选择真核和原核生物均偏爱的密码子,通过OptimumGene软件对基因进行序列优化,化学合成全新的基因序列HSV2-gC2,PCR扩增后,插入pMCE5载体,构建重组表达质粒pMCE5-gC2,转染至CHO细胞中进行真核表达。表达的重组gC2蛋白经亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。将纯化的重组gC2蛋白分别于第0、2、4周经腹腔免疫小鼠,以免疫PBS作为对照,采用间接ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平;酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测免疫小鼠脾淋巴细胞分泌IFNγ(代表Th1细胞因子)和IL-4(代表Th2细胞因子)的细胞频率。结果重组表达质粒pMCE5-gC2经菌落PCR、双酶切(EcoRⅠ/NotⅠ)及测序证实构建正确;纯化的重组gC2蛋白相对分子质量约为90 000,纯度约为85%,浓度为40μg/ml,可与小鼠抗His单克隆抗体特异性结合;通过3次免疫,小鼠产生了高水平的血清抗体,与免疫前相比,差异均有统计学意义(P<0.001);免疫小鼠脾细胞经特异性抗原刺激后,分泌IFNγ和IL-4的细胞频率分别为(13.46±2.832)/106和(19.2±2.48)/106个细胞,均显著高于对照组(P<0.001)。结论在CHO细胞中表达了重组gC2蛋白,纯化的蛋白能够激发小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,为进一步研制HSV亚单位疫苗奠定了基础。
- 周洁蔡冉徐悦玥潘英李素芹尚彦红许桂丽袁敬宇马颖张素芬李越希
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞免疫活性
- 重组单纯疱疹病毒Ⅱ型gC蛋白胞外区真核表达载体的构建及其在DG44细胞中的稳定表达
- 目的:构建含人类单纯疱疹病毒膜糖蛋白(gC2)基因的重组真核表达质粒并转染哺乳动物细胞DG44细胞系,为gC2蛋白的纯化及鉴定奠定基础。方法:筛选gC2蛋白胞外抗原富集区并化学合成,通过PCR加入酶切位点EcoR I和N...
- 徐悦玥马颖袁敬宇张素芬尚彦红李素梅李素芹潘英李越希
