吉林省科技发展计划基金(20080213)
- 作品数：10 被引量：67H指数：5
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- MEV、ADV和CAV三种病毒多重PCR检测方法的建立被引量：5
- 2009年
- 建立一种同时检测貂肠炎病毒(MEV)、貂阿留申病毒(ADV)和犬腺病毒(CAV)的多重PCR诊断方法。引用已有的CAV引物,并根据GenBank发表的MEV、ADV序列保守区域设计特异性引物进行PCR扩增,可同时得到扩增长度为795(MEV)、451(ADV)、1 019 bp(CAV)3条特异性片段,对猪细小病毒(PPV),犬瘟热病毒(CDV)进行PCR检测结果为阴性。各种模板、引物之间相互不构成干扰。敏感性试验证明,可以检测到模板中MEV101.5TCID50和CAV100.5TCID50的病毒含量,对ADV检测的敏感性更高。
- 罗彬易立王建科程世鹏
- 关键词：貂肠炎病毒犬腺病毒
- 犬细小病毒VP2蛋白的表达及间接ELISA方法的建立被引量：5
- 2010年
- 以犬细小病毒(Canine parvovirus virus,CPV)VP2基因的原核表达产物为抗原建立检测CPV抗体的间接ELISA方法。在分析CPV VP2基因稀有密码子(大肠杆菌系统)的基础上,克隆去除5′和3′端的稀有密码子的VP2基因,构建了VP2蛋白原核表达载体pET28a-VP2和pET32a-VP2,利用HIS标签对融合表达产物进行纯化。经SDS-PAGE和Western-blot检测证实该基因获得表达,并存在低相对分子质量产物,其中纯化后的pET28a-VP2具有良好的免疫学活性。以pET28a-VP2蛋白为基础,建立检测VP2抗体的i VP2-ELISA方法:抗原包被质量浓度为17.8 mg/L,血清最佳稀释度为1∶20,阳性判定标准初步定为:待测样品D值>0.367,且待测样品D值/阴性样品D值>2.0。采用i VP2-ELISA对20份背景清晰的犬血清样品进行检测,结果显示,i VP2-ELISA与HI试验的阴阳性符合率一致,但不呈现正比关系。本试验为犬场CPV抗体水平检测和进行CPV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。
- 易立程世鹏王建科柴秀丽罗彬张海玲吴威闫喜军
- 关键词：犬细小病毒原核表达VP2蛋白间接ELISA
- 犬细小病毒VP2基因的遗传变异分析被引量：14
- 2009年
- 为了分析中国部分省市犬细小病毒（Canine parvovirus,CPV）流行毒株的分子生物学特征,了解其遗传演化规律,查明中国目前CPV流行毒株现状,本项研究通过对2006-2008年武汉、南京和北京的宠物犬疑似犬细小病毒粪便样品进行检测,并对犬细小病毒PCR阳性产物进行RFLP分析,未发现宠物犬感染猫细小病毒的现象。从PCR检测犬细小病毒阳性标本15份以及广泛使用的犬细小病毒疫苗2株中克隆犬细小病毒VP2基因并进行序列分析,结果显示：检测到的15株犬细小病毒均属于CPV-2a亚型;与GenBank中的其他CPV-2a亚型相比,其中14株犬细小病毒存在独特的Ile324变异,并且国内主要使用的两个犬细小病毒疫苗株均属于CPV-2型,但是与CPV-2型原型毒株CPV-b相比,VP2蛋白氨基酸序列已经发生改变。通过构建基于犬细小病毒VP2蛋白氨基酸序列的系统发生树,发现在我国主要城市的宠物犬中流行的犬细小病毒CPV-2a亚型毒株单独构成一簇,并且与2008年的韩国分离株K001关系紧密,而与早期其他地区的犬细小病毒CPV-2a亚型流行株距离较远。这提示犬细小病毒流行株的变异具有某种时间和空间相关性。本研究对犬细小病毒流行株的主要衣壳蛋白VP2的编码蛋白进行遗传变异分析，为更好地预防和控制犬细小病毒提供基础。
- 易立程世鹏闫喜军王建科罗彬
- 关键词：犬细小病毒VP2基因
- 水貂病毒性肠炎巢式PCR,PCR-RFLP联合诊断方法的建立被引量：5
- 2008年
- 根据水貂肠炎细小病毒的VP2基因序列设计4条特异性引物,建立了检测水貂肠炎细小病毒的巢式PCR方法。采用一次扩增的敏感性来检测5个TCID50/mL的细小病毒MEVB株,二次扩增的敏感性来检测0.05个TCID50/mL的细小病毒MEVB株。同时,利用该方法第一轮PCR产物酶切,能够区分犬细小病毒与水貂肠炎细小病毒,具有重要的实用价值和应用的前景。
- 易立闫喜军罗彬王建科赵传芳吴威程世鹏
- 关键词：水貂肠炎细小病毒巢式PCRPCR-RFLP
- 犬瘟热病毒野毒株与疫苗株联合RT-PCR鉴别方法的建立被引量：3
- 2009年
- 为了建立快速、有效的鉴别犬瘟热病毒(CDV)野毒株与疫苗株的诊断方法,根据CDV野毒株与疫苗株N基因的保守区域以及H基因的多变区域设计特异性引物,建立了区分CDV野毒株与疫苗株的联合RT-PCR方法。结果表明,针对N基因的RT-PCR方法能同时检测CDV野毒株与疫苗株;而针对H基因的RT-PCR方法只能检测CDV野毒株,不能检测CDV疫苗株。根据2次RT-PCR反应结果,能够很好地区分CDV野毒株与疫苗株。同时,经过病毒电镜观察和H基因扩增片段的克隆测序结果的比对,进一步确认了该方法的特异性。表明,该方法具有快速、特异、实用等优点,可作为CDV鉴别诊断的有效手段。
- 易立程世鹏闫喜军王建科罗彬赵建军张海玲吴威
- 关键词：犬瘟热病毒反转录聚合酶链式反应野毒株疫苗株
- 犬瘟热病原学研究进展被引量：17
- 2009年
- 概述了犬瘟热病原学和犬瘟热病毒生物学特性的研究进展,为毛皮动物犬瘟热疫苗研制和预防控制犬瘟热的发生提供了理论基础。
- 程世鹏易立
- 关键词：犬瘟热病原学生物学特性
- 抗水貂肠炎病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定被引量：11
- 2009年
- 将水貂肠炎病毒SMPV-11株纯化后免疫4-6周龄雌性BALB／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经亚克隆和间接ELISA筛选，获得了8株稳定分泌抗水貂肠炎病毒SMPV-11株单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为D3、H5、F5、F4、A9、B7、H11和H8。经过鉴定：其腹水ELISA效价分剐在1：6.4×10^3和1：2.56×10^4之间；且与犬瘟热病毒、阿留中病病毒、犬腺病毒不发生交叉反应；而与水貂肠炎病毒、犬细小病毒和猫泛白细胞减少症病毒呈特异性反应；这8株单克隆抗体均为IgG类型。
- 王建科程世鹏闫喜军易立罗国良柴秀丽罗彬吴威赵传芳
- 关键词：水貂肠炎病毒单克隆抗体生物学特性
- 犬瘟热病毒F蛋白分子生物学研究进展被引量：2
- 2011年
- 犬瘟热病毒融合蛋白是囊膜糖蛋白,是产生中和抗体的主要保护性抗原,结构相对保守。融合蛋白介导病毒囊膜和细胞膜融合,决定病毒在宿主体内扩散的能力,在病毒的致病性及免疫原性上具有重要作用。因此,对犬瘟热融合蛋白基因及其蛋白的结构和功能进行研究具有重要的意义。本文从蛋白结构、蛋白功能、核酸序列比对等多方面对融合蛋白进行了阐述。
- 许红丽易立王建科杨莘程世鹏
- 关键词：犬瘟热病毒融合蛋白分子生物学
- 毛皮动物犬瘟热、细小病毒性肠炎和脑炎防治技术指南被引量：3
- 2010年
- 为了预防、控制和消灭毛皮动物犬瘟热、细小病毒性肠炎和脑炎,依据《中华人民共和国动物防疫法》及有关法律法规,制定毛皮动物犬瘟热、细小病毒性肠炎和脑炎防治技术指南,指导毛皮动物犬瘟热、细小病毒性肠炎和脑炎防控。
- 程世鹏易立陈立志司方方王建科
- 关键词：毛皮动物犬瘟热细小病毒性肠炎传染性脑炎防控技术
- 犬瘟热病毒核衣壳蛋白分子生物学研究进展被引量：6
- 2010年
- 核衣壳蛋白在犬瘟热病毒中含量丰富,高度保守,能够保护病毒RNA避免降解,对病毒的持续感染产生影响,是重要的抗原物质。本文从N蛋白及其编码基因分子生物学结构、功能、应用等方面进行了阐述。
- 罗彬易立王建科程世鹏
- 关键词：犬瘟热病毒核衣壳蛋白分子生物学
