吉林省科技发展计划基金(20080217)
- 作品数：5 被引量：28H指数：4
- 相关作者：贺文琦高丰赵魁陈克研宋德光更多>>
- 相关机构：吉林大学吉林正业生物制品股份有限公司吉林农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 羔羊外周血单个核细胞转化MTT比色法最佳检测条件的筛选被引量：6
- 2011年
- 为了建立羔羊外周血单个核细胞转化检测的MTT比色法,对影响MTT比色法的3个主要因素(包括刺激原、细胞浓度、培养时间)进行了探索性的研究。结果表明,MTT法检测的最佳条件为:植物血凝素(PHA)浓度为10μg/mL,细胞密度为1×107个/mL;或者刀豆蛋白A(ConA)浓度为40μg/mL,细胞密度为2×107个/mL。反应条件以37℃培养48 h为佳。
- 张冰冰赵魁贺文琦王栋臧德跃陈克研王改丽高丰
- 关键词：羔羊外周血单个核细胞MTT
- 1株长春地区羊传染性脓疱病毒的分离鉴定及F1L基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2010年
- 利用MDBK细胞从长春郊区一养羊户送检的出现典型"口疮"症状的病羊唇部痂皮中分离获得1株病毒,通过电镜观察、理化学测定、PCR检测、动物回归试验、间接免疫荧光(IFA)及病理组织学观察等方法对该株病毒进行了系统鉴定,证实该分离株为羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV),命名为ORFV-cc。参照GenBank中ORFVF1L基因的核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,成功地对ORFV-cc株F1L基因进行克隆、测序,并推导出其氨基酸序列。序列分析表明,获得的ORFV-cc分离株F1L基因片段长987bp,编码328个氨基酸,与ORFV-NZ2,ORFV-7,ORFV-20,ORFV-C2,ORFV-mi-90,ORFV-Torino株核苷酸序列同源性分别为97.5%,98.3%,97.9%,98.5%,98.4%,97.5%;氨基酸序列同源性分别为97.2%,97.2%,97.5%,98.8%,98.8%,97.9%。系统发育进化树结果表明,ORFV-cc分离株与参考毒株ORFV-C2和ORFV-mi-90的亲缘关系较近,表明不同地区分离毒株的F1L基因差异不大。
- 赵魁高丰贺文琦刘云志邵洪泽程荣华张希牧赵亚昕宋德光
- 关键词：羊传染性脓疱病毒
- 羊传染性脓疱病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5
- 2010年
- 针对羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因序列设计合成了1对引物,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测ORFV核酸的SYBRGreenⅠreal-timePCR方法。结果显示,该方法线性关系良好,标准曲线的相关系数为0.999;检测灵敏度可达9.4×104copies/μL;与绵羊痘病毒(SPV)不发生交叉反应,具有良好的特异性;组内Ct值相同,组间变异系数小于2%。应用建立的方法检测20份疑似羊传染性脓疱病病料,结果17份为阳性,同时用常规PCR进行检测,结果仅10份为阳性。结果表明,建立的实时荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可初步用于ORFV的检测。
- 李超赵魁赵权贺文琦宋德光李晶解胜男陈克研高丰
- 关键词：羊传染性脓疱病毒SYBR
- 绵羊IFN-γ和IL-2基因SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法的建立及应用被引量：5
- 2010年
- 为探讨传染性脓疱病毒感染后机体的细胞免疫应答,从分子水平对传染性脓疱病毒的免疫机制进行了深入探讨。首先针对Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2以及管家基因GAPDH的mRNA序列分别设计了1对特异性引物,扩增相应的基因片段并构建含有相应基因序列的重组质粒,以所构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了用于IFN-γ、IL-2及GAPDH检测的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法。该方法线性关系良好,IFN-γ、IL-2和GAPDH标准曲线的相关系数均达0.99以上;敏感性高,初始模板的检出下限均达1×103copies/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性融解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3%。应用该方法对传染性脓疱病毒感染羔羊外周血白细胞中的IFN-γ、IL-2 mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,建立的real-time PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优点,可用于绵羊Th1型细胞因子的检测及定量分析。
- 张冰冰赵魁宋德光臧德跃王栋贺文琦陈克研王改丽高丰
- 关键词：TH1型细胞因子荧光定量聚合酶链反应
- 羊传染性脓疱病毒松原分离株的分离鉴定及B2L基因的克隆与序列分析被引量：8
- 2008年
- 利用原代犊牛睾丸细胞从临床上表现口疮症状的羔羊痂皮材料中分离获得1株病毒,对该株病毒进行病毒形态学、理化学、PCR检测与动物回归试验等系统鉴定后,证实该分离株为羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV),命名为ORFV-sy。利用PCR方法克隆出其B2L基因,并将该基因序列和推导的氨基酸序列与6个不同来源的ORFV毒株进行同源性和亲缘关系的比较分析。结果表明,各毒株间核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.8%～99.5%和97.6%～99.5%;系统发育进化树结果表明,ORFV-sy毒株与印度分离绵羊株ORFV-Mukteswar67/04、ORFV-Izatnagar79/04的亲缘关系较近,表明不同地区分离毒株的B2L基因差异不大。
- 赵魁贺文琦宋德光孟伶俐陈克研张学慧高丰
- 关键词：B2L基因
- 羊传染性脓疱病毒长春分离株的分离鉴定及其B2L、F1L基因DNA疫苗表达载体的构建
- 通过病理组织学观察、免疫组化、间接免疫荧光(IFA)、病毒分离、电镜观察、PCR等方法对长春市某羊场3～6月龄羔羊出现"口疮"症状的病因进行研究分析,经系统鉴定后,证实该病毒株为羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORF...
- 赵魁贺文琦宋德光张冰冰李超高丰
- 关键词：B2L基因DNA疫苗
- 文献传递
