上海市自然科学基金(11ZR1406100)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
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- 特异性启动子LEP503介导的自杀基因系统对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用
- 2011年
- 目的构建晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)特异性启动子LEP503(lens epithelium gene product503)调控的Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP载体,观察慢病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙环鸟苷系统(herps simplex virus thymidine kinase/ganciclov-ir,HSV-tk/GCV)自杀基因系统对人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖的靶向性抑制作用。方法用RT-PCR方法从HLEC基因组中克隆LEP503启动子序列,构建单纯LEP503启动子调控HSV-tk基因表达的慢病毒载体Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP,同时构建广谱启动子巨细胞病毒(cytomegalo virus,CMV)调控的HSV-tk载体Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP。将特异性表达载体Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP分别转入HLEC和Hela细胞,用荧光显微镜观察荧光强度,用RT-PCR方法评估相关蛋白的组织特异性表达。将Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP和Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP分别转入HLEC,通过荧光显微镜观察EGFP的表达,用流式细胞仪及RT-PCR比较CMV与LEP503启动子介导下游靶基因HSV-tk的表达差异。结果 Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP能在HLEC中特异性表达,但Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP的表达效率明显低于Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP。转染Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP的HLEC在20mg·L-1GCV作用48h后EGFP阳性细胞的形态发生明显变化;GCV作用24h后Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP转染HLEC较正常HLEC和Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP转染Hela细胞活性有明显抑制,且随时间的延长抑制效果逐渐增强。结论 LEP503启动子能介导HSV-tk基因在HLEC中特异表达,并介导HSV-tk/GCV自杀基因系统靶向性抑制HLEC增殖,但该启动子表达效率较低,所介导的HSV-tk/GCV系统对HLECs增殖的抑制效率低于CMV启动子。
- 杨晋卢奕刘天津蒋永祥
- 关键词：胸苷激酶晶状体上皮细胞特异性启动子自杀基因系统
- 不同核硬度剥脱综合征性白内障超声乳化手术疗效观察被引量：6
- 2013年
- 目的:比较新疆喀什地区维吾尔族不同核硬度剥脱综合征性白内障(exfoliation syndrome combined cataract,XFSC)行超声乳化白内障摘除联合人工晶状体植入术的临床效果。方法:回顾性分析2012-01/12我院连续性XFSC手术患者52例53眼,其中Ⅱ级核11眼,Ⅲ级核27眼,Ⅳ级核15眼。行超声乳化联合人工晶状体植入术,分析术后裸眼及矫正视力、术中术后并发症、前囊撕囊口、人工晶状体位置。统计学方法采用χ2检验。结果:随访3～8mo,术眼裸眼视力≥0.5者XFSCⅡ级核7眼,Ⅲ级核7眼,Ⅳ级核3眼,三组裸眼视力≥0.5发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05);术后矫正视力≥0.8的XFSCⅡ级核8眼,Ⅲ级核9眼,Ⅳ级核4眼,三组矫正视力≥0.8发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。术中、术后发生并发症的XFSCⅡ级核1眼,Ⅲ级核9眼,Ⅳ级核11眼,三组并发症发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:XFSC早期手术视力恢复好、并发症少。术前仔细散瞳检查、术中小心操作并选择恰当的手术方法是手术成功的关键。
- 米尔沙力蒋永祥吐洪江古扎丽努尔
- 关键词：维吾尔族剥脱综合征超声乳化
- RNA干扰抑制端粒酶反转录酶对晶状体上皮细胞增殖的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨RNA干扰(RNAi)抑制端粒酶反转录酶(TERT)对晶状体上皮细胞(LEC)增殖的影响。方法收集培养的LEC和视网膜色素上皮细胞(RPEC),用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测二者内源性TERT的表达差异;人工合成TERT小分子干扰RNA(siRNA)片段,用LipofectamineTM2000转染LEC,实时PCR检测TERT基因表达的变化。LipofectamineTM2000TERTsiRNAi持续转染LEC和RPEC96h,细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测TERTsiRNAi对LEC和RPEC增殖的影响。结果 RPEC中未见TERT表达,LEC中有低水平TERT表达。TERTsiRNA转染LEC48h后,siRNA组TERT相对表达水平(0.20±0.01)与阴性对照组(1.00±0.03)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。TERTsiRNA转染LEC和RPEC96h后,CCK-8试剂盒检测细胞的增殖抑制情况显示:LECsiRNA组LEC活性(0.55±0.04)与LEC阴性对照组(0.79±0.02)相比,差异有统计学意义(P<0.05);转染的RPECsiRNA组RPEC活性(1.13±0.04)与阴性对照组RPEC活性(1.16±0.01)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论较长时间RNAiTERT能有效抑制LEC增殖,但对RPEC无明显抑制作用。
- 蒋永祥吴新华卢奕
- 关键词：端粒酶反转录酶RNA干扰晶状体上皮细胞
