广东省自然科学基金(S2011010003787)
- 作品数：2 被引量：23H指数：2
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- 环氧合酶2基因沉默诱导人肝癌细胞凋亡的作用观察被引量：6
- 2012年
- 目的观察作用于环氧合酶2(COX-2)mRNA的发卡状COX-2(COX-2 shRNA)真核表达质粒对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法设计靶向COX-2基因的RNA干扰序列,构建COX-2 shRNA表达载体,用阳离子脂质体Lipofectamine 2000转染体外培养的HepG2细胞。半定量RT-PCR检测COX-2 mRNA表达水平的变化,筛选有效抑制COX-2基因表达的序列。采用CCK-8细胞计数法检测COX-2 shRNA对细胞增殖的影响,流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期,Western blotting检测细胞内COX-2和Bcl-2蛋白表达水平。结果测序结果显示成功构建了2个表达COX-2 shRNA的质粒载体,转染HepG2细胞后COX-2 mRNA表达下降至阴性对照组的41.66%和77.79%。选择沉默效率较佳者转染细胞并经G418筛选,获得稳定表达COX-2 shRNA的细胞,胞内COX-2 mRNA表达水平下降了75.30%,细胞增殖活性下降了29.33%。在稳定表达COX-2 shRNA、错义序列以及未转染的细胞中,细胞凋亡率分别为17.83%、4.63%和4.47%,G0/G1期细胞比例分别为73.93%、61.2%和57.630%,而S期细胞比例分别为13.43%、26.03%和26.90%。Western blotting检测显示,表达COX-2 shRNA的HepG2细胞内COX-2蛋白水平下降至表达错义序列组的31.25%(P<0.01),Bcl-2蛋白水平下降至表达错义序列组的54.93%(P<0.01),而转染错义质粒组与未转染组之间比较差异无统计学意义。结论构建的真核表达载体pSilencer 2.1-U6-COX-2 shRNA能有效沉默人肝癌HepG2细胞内COX-2基因的表达,并具有抑制细胞增殖、促进细胞凋亡和细胞周期阻滞、降低胞内抗凋亡蛋白Bcl-2水平的作用。
- 郭丹陈娜娜吴曙光雷林生
- 关键词：环氧化酶2SHRNA细胞凋亡BCL-2相关X蛋白质
