山东省自然科学基金(2009ZRC03096)
- 作品数：6 被引量：9H指数：1
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- 致敏绵羊红细胞在EV71细胞嗜性研究中的应用被引量：1
- 2010年
- 目的以致敏绵羊红细胞为工具研究肠道病毒71型(EV71)的细胞嗜性,并探讨传代培养细胞表面EV71受体表达情况。方法 EV71致敏的绵羊红细胞与传代培养细胞作用,观察不同方法处理的培养细胞吸附致敏绵羊红细胞的情况,分析EV71的细胞嗜性,并探讨培养细胞表面EV71受体的表达情况。结果 EV71致敏绵羊红细胞能吸附在人喉癌上皮细胞(Hep-2)、恒河猴胚肾细胞(MA104)的细胞表面,并且胰酶能破坏MA104的吸附功能,对Hep-2却无影响,而狗肾细胞(MDCK)与EV71致敏的绵羊红细胞未见吸附现象,这与病毒直接感染细胞结果一致。结论该方法能直接、有效地反映病毒的细胞嗜性及培养细胞表面病毒受体的表达情况,在病毒学尤其是病毒受体研究中具有较强的可行性及应用价值。
- 李志会李鹏宋楠楠岳盈盈纪璇赵元昊孟红
- 关键词：绵羊红细胞细胞嗜性
- 枯草芽孢杆菌芽孢佐剂免疫途径及效果的动物实验观察被引量：1
- 2013年
- 目的探讨以表面展示免疫球蛋白结合蛋白功能域(FDIBP)的枯草芽孢杆菌芽孢制备的黏膜佐剂不同途径免疫的应用效果。方法分别将表面展示FDIBP的重组枯草芽孢杆菌芽孢及大肠杆菌不耐热毒素(LT)与人IgG(hIgG)作为佐剂共孵育制备疫苗,通过灌胃、滴鼻途径免疫BALB/c小鼠,5周后收集外周血、肺泡、小肠及阴道冲洗液。采用ELISA方法检测血清中IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、抗hIgG特异性IgG抗体,同时检测血清及肺泡、小肠、阴道冲洗液中抗hIgG特异性IgA抗体水平。结果与无佐剂免疫者比较,枯草芽孢杆菌芽孢佐剂滴鼻能有效提高小鼠体液免疫产生的抗原特异性抗体IgA及IgG水平(P<0.01),但未能有效刺激细胞免疫上调血清IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ水平;通过灌胃途径免疫者上述特异性抗体及细胞因子水平均无显著变化(P均>0.05)。结论展示FDIBP的枯草芽孢杆菌芽孢可用作滴鼻途径黏膜疫苗佐剂,能有效刺激机体产生特异性黏膜免疫反应。
- 李志会李鹏岳盈盈宋楠楠纪璇曹银光孟红
- 关键词：黏膜佐剂
- 肠道病毒71型VP1的原核表达及生物活性初步研究被引量：1
- 2012年
- 目的原核表达系统表达肠道病毒71型（Enterovirus71，Ev71）VP1蛋白，并探讨该基因工程蛋白阻断病毒感染及其制备抗体的中和活性。方法构建pET30a（＋）-VP1表达载体、IPTG诱导表达，Westernblot鉴定。His亲和纯化后，阻断试验分析该重组蛋白阻断病毒感染活性，免疫小鼠制备多抗分析多抗中和活性。结果构建的重组菌可有效表达VP1，用其免疫小鼠制备多抗ELISA效价达到1：3200，而中和活性只有1：16，并且该工程蛋白没有表现出阻断活性。结论本研究原核表达的VPl蛋白能刺激小鼠产生抗体，且抗体具有一定的中和活性，但是该蛋白没有阻断活性，表明该蛋白在原核表达系统中未能形成天然构象从而导致与受体结合的能力较差。
- 李志会宋楠楠岳盈盈李鹏纪璇曹银光孟红
- 关键词：肠道病毒71型VP1原核表达生物活性
- EV71 VP1黏膜疫苗制备及其诱导黏膜免疫的实验研究被引量：4
- 2011年
- 目的研究表面展示肠道病毒71型(EV71)结构蛋白VP1的枯草芽孢杆菌芽孢制备疫苗的可行性及应用价值。方法以表面展示EV71 VP1蛋白的重组枯草芽孢杆菌及野生型同基因株枯草芽孢杆菌制备疫苗,并分别通过灌胃+滴鼻途径免疫BALB/c小鼠(观察组和对照组各16只),4周后摘眼球取血,脱臼处死小鼠收集肺泡及小肠冲洗液,采用ELISA方法检测血清、肺黏膜、肠黏膜中VP1特异性IgA抗体水平。结果枯草芽孢杆菌经培养及溶菌酶处理后均以芽孢形式存在;观察组血清及肺黏膜中VP1特异性IgA抗体水平均显著高于对照组(P均<0.01),但两组肠黏膜中抗体水平无显著差异。结论展示EV71结构蛋白VP1的枯草芽孢杆菌芽孢可成功制备疫苗,且能有效刺激机体产生特异性黏膜免疫反应;此为EV71疫苗的研制提供了新思路。
- 李志会岳盈盈李鹏宋楠楠孟红
- 关键词：肠道病毒71型
- 制备肠道病毒71型黏膜疫苗的初步探索被引量：1
- 2012年
- 目的利用同源重组技术将肠道病毒71型衣壳蛋白VP1基因重组入枯草芽胞杆菌基因组,进而将VP1蛋白展示在其芽胞表面制备EV71黏膜疫苗。方法将枯草芽胞杆菌CotB基因与VP1基因连接后插入整合质粒pDG1662,得到重组质粒pDG1662-CotB-VP1,电转化法转化枯草芽胞杆菌1A771,抗生素抗性筛选,PCR、Westernblot、免疫荧光鉴定VP1基因重组及蛋白表达情况。结果 VP1基因成功重组入枯草芽胞杆菌基因组中,VP1蛋白在芽胞表面得到了有效表达。结论 EV71衣壳蛋白在枯草芽胞杆菌芽胞表面得到了有效表达,为研究EV71黏膜疫苗奠定基础。
- 李志会岳盈盈宋楠楠李鹏孟红
- 关键词：肠道病毒71型黏膜疫苗
- 通用黏膜免疫佐剂的制备被引量：1
- 2012年
- 目的采用同源重组技术制备通用黏膜佐剂。方法将枯草芽胞杆菌CotB基因与融合基因AB连接后插入整合质粒pDG1662得到重组质粒pDG1662-CotB-AB,电转化法将线性化重组质粒转化枯草芽胞杆菌1A771,抗生素抗性筛选,PCR、免疫荧光法鉴定免疫球蛋白结合蛋白基因重组及蛋白表达情况。结果 AB基因成功重组入枯草芽胞杆菌基因组中,免疫球蛋白结合蛋白在芽胞表面得到了有效表达,并具有结合免疫球蛋白的生物活性。结论本研究成功制备了黏膜免疫佐剂。
- 李志会李鹏岳盈盈宋楠楠纪璇曹银光孟红
