国家自然科学基金(10872140)
- 作品数：11 被引量：26H指数：3
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- 实验性近视眼巩膜成纤维细胞力学特性的动态变化被引量：2
- 2012年
- 目的研究豚鼠镜片诱导型近视HI^（LIM）前部及后极部巩膜成纤维细胞的力学特性的动态变化。方法实验研究。取2周龄豚鼠30只，分为A、B、C三组，每组10只，用离焦的方法制备凹透镜诱导近视（LIM）动物模型，对侧眼为自身对照眼（SC眼），再随机选取5只（10眼）正常2周龄豚鼠不作任何干预，作为正常对照组（NC组），将A、B、C三组分别造模6、15、30d后，用组织块培养法培养每组豚鼠前部及后极部巩膜成纤维细胞，，并传2代。利用细胞微管吸吮的方法测定各组巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量和细胞表观黏性。各组数据结果计算记录为均数±标准误（E＋S）和等级资料表示，对照组与实验组问差异分别行配对t检验，组间差异行完全随机单因素方差分析。结果LIM各组问的细胞力学特性比较，及与SC组比较，发现无论是平衡杨氏模量还是细胞表观黏性，LIM组前部于诱导6d[（0．2252±0．0836）kPa，μ=（1．3119±0．4862）kPa．s]、15d[（0．2373±0．0903）kPa，（1．3583±0．5652）kPa．S]时与SC组[（0．2220±0．0593）kPa，（1．4122±0．4326）kPa]比较无明显变化，诱导30d[（0．3874±0．0965）kPa，（2．6278±0．8063）kPa．s]时与6、15d及SC组比较均增高，其差异有统计学意义（P〈O．05）；LIM组后极部于诱导6d[（0．3432±0．0786）kPa．（1．9237±0．5203）kPa．S]时与SC组[（0．2283±0．059）kPa，Ix=1．3248±0．3535）kPa．S]比较无明显变化，但诱导15d[（0．4797±O．1241）kPa，（3．3221±0．7179）kPa．S]、30d[（0．5663_＋0．1127）kPa，（4．6264_＋1．2205）kPa．s]时与6d组、SC组比较均增高，其差异有统计学意义（P〈0．05）。结论LIM组前部及后极部巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数分别在诱导30d和诱导15d后有明显升高．即有“硬化”现象。
- 陈博宇王超英马景学陈维毅郝岚刘迎庆仝春梅王彩荣
- 关键词：近视成纤维细胞巩膜微管吸吮细胞培养技术
- 豚鼠早期实验性近视眼巩膜成纤维细胞前部及后极部MMP-2 mRNA及蛋白表达变化的研究被引量：3
- 2011年
- 目的研究豚鼠早期实验性近视眼巩膜成纤维细胞(guineapig scleral fibroblast,GSF)前部及后极部基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的改变,探索近视的发病机制。方法 2周龄豚鼠30只作为实验组,另外再随机选取5只(10眼)正常2周龄豚鼠不作任何干预,作为正常对照眼。选取任意眼戴-10.00DS凹透镜,分别饲养6d、15d、30d后除去镜片,验光及测眼轴长度确定近视形成后,采用组织块培养法培养豚鼠的前部及后极部GSF,利用免疫细胞化学、实时荧光定量PCR、Western blot蛋白印迹法检测前部及后极部GSF中MMP-2表达变化。结果 MMP-2的表达定位于细胞浆和细胞核。实验组中前部GSF饲养15d阳性表达率较高,30d阳性表达率最高;后极部GSF饲养6d表达率开始较高,至15d阳性表达率最高,以后保持较高的阳性表达率,各诱导时间点之间两两比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05);自身对照组各组自身前部及后极部比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论体外培养的豚鼠GSF稳定表达MMP-2 mRNA及其蛋白,且前部GSF于诱导15d开始阳性表达率较高,后极部GSF于诱导6d开始阳性表达率较高,后极部GSF较前部表达明显增多。
- 陈博宇王超英安慧琴马景学陈维毅郝岚刘迎庆仝春梅
- 关键词：巩膜成纤维细胞免疫细胞化学
- TGF-β_2对豚鼠实验性近视眼后极部巩膜成纤维细胞MMP-2表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的明确转化生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)对豚鼠镜片诱导型近视眼后极部巩膜成纤维细胞基质金属蛋白酶(matrix metallo proteinase,MMPs)表达的影响。方法选择2周龄已脱离母乳喂养的豚鼠12只,随机选取12只中各一眼用镜片诱导法制备近视动物模型(实验组),对侧眼不予任何处理(自身对照组)。30 d后采用组织块培养法培养豚鼠后极部巩膜成纤维细胞,并传2代。将每只眼(两组24只眼)培养出的细胞分别分为空白对照组、1 ng/mlTGF-β2组、10 ng/ml TGF-β2组、100 ng/ml TGF-β2组,利用实时荧光定量聚合酶链反应、western-blot蛋白印迹法对各组细胞MMP-2、MMP-2mRNA进行定量分析。结果经30 d镜片诱导,实验组诱导出(-6.70±1.93)D的相对近视,眼轴相对延长(1.53±0.31)mm,实验前后比较差异有统计学意义(P<0.05)。实验组中空白对照组与自身对照组中空白对照组比较,MMP-2、MMP-2mRNA表达量增高,差异有统计学意义(P<0.05)。TGF-β2浓度为10 ng/ml时实验组和自身对照组细胞MMP-2、MMP-2mRNA的表达量最高,与本组其他浓度比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论凹透镜诱导可引起豚鼠明显轴性近视,TGF-β2能有效刺激MMP-2的表达。
- 陈博宇安慧琴王超英马景学陈维毅郝岚刘迎庆仝春梅
- 关键词：转化生长因子Β2近视巩膜成纤维细胞
- 拉伸刺激对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的影响被引量：2
- 2010年
- 通过FX-4000柔性基底加载系统对人舌鳞癌Tca8113细胞进行力学环境下的培养、流式细胞仪检测分析,研究力学刺激对Tca8113细胞增殖的影响。实验结果显示:细胞在不同力学刺激下(拉伸波形分别为方波、正弦波、三角波,拉伸幅度分别为5%、10%,频率为0.5 Hz,加载时间4 h),与静态对照组比较,方波组细胞的增殖速率得到明显的抑制,且方波10%组细胞的增殖速率明显小于方波5%组细胞的增殖速率;与静态对照组比较,正弦波5%组、10%组、三角波5%组的增殖速率无明显差异,三角波10%组细胞的增殖速率得到明显的抑制。研究表明:拉伸力学刺激的波形和幅度是影响Tca8113细胞增殖行为的重要因素。
- 谢永芳贾增强王国辉吴文周
- 关键词：波形TCA8113细胞增殖
- TGF-β_2对豚鼠实验性近视眼后极部巩膜成纤维细胞的增殖和超微结构的影响被引量：3
- 2011年
- 目的明确转化生长因子β2(TGF-β2)对豚鼠镜片诱导型近视眼后极部巩膜成纤维细胞的增殖和超微结构的影响。方法选择2周龄豚鼠10只,随机选取一只眼(实验组)用镜片诱导法制备近视动物模型,对侧眼为自身对照组。造模30 d后对两组进行屈光度和眼轴检测。培养豚鼠后极部巩膜成纤维细胞。将每只眼培养的细胞分为空白对照及TGF-β21、10、100 ng/ml浓度组,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组光吸收值(OD)和细胞增殖的程度;利用电镜观察TGF-β210 ng/ml时细胞的超微结构并对结果进行统计分析。结果凹透镜诱导后实验组屈光度和眼轴与诱导前比较差异均有统计学意义(P<0.05);实验组和自身对照组TGF-β2 100 ng/ml时OD值与空白对照比较差异无统计学意义(P>0.05),TGF-β2 1、10 ng/ml和空白对照两两比较差异有统计学意义(P<0.05),同浓度TGF-β2组间OD值和增殖率比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同浓度TGF-β2时细胞增殖率组内比较差异有统计学意义(P<0.05)。在10 ng/ml TGF-β2作用下巩膜成纤维细胞核外形不规则,粗面内质网扩张,细胞器减少,细胞界膜不清,部分界膜消失。结论 TGF-β2可有效地抑制豚鼠巩膜成纤维细胞的增长,其中10 ng/ml的刺激作用最强,可使细胞的超微结构发生变化。
- 陈博宇王超英马景学陈维毅安英杰郝岚刘迎庆
- 关键词：转化生长因子Β2巩膜成纤维细胞超微结构
- 力学刺激对巩膜成纤维细胞增殖活性及结缔组织生长因子表达的影响被引量：5
- 2010年
- 目的研究力学刺激对巩膜成纤维细胞增殖及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法组织块培养法获取新西兰大白兔巩膜成纤维细胞并培养,利用免疫细胞化学法进行细胞鉴定,通过FX-4000柔性基底拉伸加载系统对细胞进行正弦波(3%、6%拉伸幅度,0.1Hz,48h)拉伸力学环境的培养,采用ATP-生物荧光检测法检测细胞的增殖活性,应采用ELISA法检测细胞CTGF的表达。结果 3%拉伸组的增殖活性(2.352依0.123)和6%拉伸组的增殖活性(2.784依0.119)与静态组(1.901依0.092)比较有明显提高(P<0.05),且6%拉伸组细胞的增殖活性明显高于3%拉伸组(P<0.05);与各自静态对照组CTGF的表达比较,3%拉伸组(静态组:(0.291依0.118)μg/L,拉伸组:(1.623依0.276)μg/L和6%拉伸组(静态组:(0.260依0.112)μg/L,拉伸组:(3.205依0.287)μg/L)有显著提高(P<0.05)。结论力学刺激是影响巩膜成纤维细胞增殖活性和CTGF表达的重要因素。
- 王国辉陈维毅谢永芳
- 关键词：巩膜成纤维细胞增殖活性结缔组织生长因子
- 利用后巩膜加固术治疗家兔近视眼后成纤维细胞生物力学性能变化被引量：6
- 2010年
- 目的研究后巩膜加固术后家兔眼球不同时期成纤维细胞力学特性的变化,从生物力学的角度探讨后巩膜加固术的作用机制。方法 3周龄新西兰家兔45只随机选取一侧眼球用眼睑缝合方法制备近视动物模型,建模60天后,眼球随机分为两组,A组行后巩膜加固术(PSR),B组行相似手术(不放置加固条带)。分别于术后3个月和6个月取材培养培养巩膜加固区及过渡组织的成纤维细胞。用免疫细胞化学法对培养的细胞进行鉴定。利用微管吸吮方法结合半无限体细胞力学模型测定各组成纤维细胞的力学特性(包括成纤维细胞的平衡弹性模量E肄和表观黏性μ)。结果经统计学分析,两组巩膜成纤维细胞的平衡弹性模量及表观黏性均无统计学意义(P>0.05)。后巩膜加固术6个月,经统计学分析,两组巩膜成纤维细胞的平衡弹性模量及表观黏性均无统计学意义(P>0.05)。后巩膜加固术后3月组与6月组的巩膜成纤维细胞比较,E肄和μ的差异均无统计学意义(P>0.05)。后巩膜加固术后3个月与6个月组的过渡区成纤维细胞的力学特性,E肄分别为(289.2依84.3),(276.9依113.9)Pa;μ分别为(1575.2依459)Pa·s,(1492.2依562.6)Pa·s,其差异均无统计学意义(P>0.05)。结论后巩膜加固术的增强作用并不是原位巩膜成纤维细胞本身生物力学的加强,而是由于加固条带及引起过渡区的存在。
- 田海霞王超英陈维毅王国辉张全有
- 关键词：近视后巩膜加固术巩膜成纤维细胞微管吸吮
- 豚鼠早期实验性近视眼RPE细胞的培养及生长周期的变化被引量：1
- 2011年
- 目的研究豚鼠早期实验性近视眼视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞原代培养方法及生长周期的改变,探索近视的发病机制。方法 2周龄豚鼠30只随机分为A、B、C组,每组10只,另随机选取5只(10眼)正常2周龄豚鼠不做任何干预,作为正常对照眼。选取任意眼戴-10.00DS凹透镜,A、B、C3组分别饲养6d、15d、30d后除去镜片,验光及测眼轴长度确定近视形成后,采用细胞酶消化法培养豚鼠的前部及后部RPE细胞,取第3-6代RPE细胞检查细胞生长周期。结果前部RPE细胞于诱导15d后发现G0-G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);30d时G0-G1期细胞百分比又降低,S期升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。后极部RPE细胞分别于诱导6d、15d后出现G0-G1期细胞百分比明显升高,S期细胞百分比明显降低,与对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 RPE细胞的形态、生长周期及细胞因子等都在近视眼发生发展过程中起作用。
- 陈博宇王超英安慧琴马景学陈维毅郝岚刘迎庆仝春梅
- 关键词：视网膜色素上皮细胞流式细胞仪
- 透镜诱导豚鼠眼短期屈光状态改变的研究
- 2011年
- 目的:研究凹透镜对豚鼠眼短期屈光发展的影响,探讨短期透镜诱导性近视的发病特点和机制。方法:2周龄豚鼠30只随机分为A、B、C组,每组10只,再随机选取5只(10眼)正常2周龄豚鼠不作任何干预,作为正常对照眼。选取任意眼戴一10 DS凹透镜,分别饲养6 d、15 d、30 d后除去镜片,以屈光度、眼轴长度变化来评估透镜诱导的效应。结果:与对照眼比较,A组、B组、C组分别诱导出-1.90D、﹣3.83 D和﹣7.21 D的相对近视.眼轴较左眼分别延长(0.14±0.02)mm、(1.09±0.31)mm和(1.53±0.31)mm,其中前房深度无明显差异,主要是眼球后部,即:眼轴长度-前房深度的变化为主,且15 d、30 d的前房深度/眼轴长度-前房深度(ACD/AL-ACD)比较,有显著性差异(P<0.05)。结论:2周龄豚鼠单眼诱导6 d即可出现轴性近视,透镜诱导性近视是视觉引导的主动正视化机制调控眼球后巩膜变薄、扩张的结果。
- 郝岚陈博宇安惠琴王超英马景学陈维毅刘迎庆
- 关键词：透镜诱导
- 转化生长因子-β2对实验性近视眼后极部巩膜成纤维细胞力学特性的影响被引量：4
- 2011年
- 背景以往对近视眼巩膜力学特性变化的研究局限于其巩膜整体和条带的力学特性变化方面，目前对近视眼细胞水平力学特性的研究日益受到重视。目的明确TGF-β2对豚鼠镜片诱导型近视眼后极部巩膜成纤维细胞力学特性的影响。方法2周龄豚鼠12只，随机选取一侧眼用镜片诱导方法制备近视动物模型，对侧眼为对照。造模30d后，用组织块培养法培养豚鼠后极部巩膜成纤维细胞并传2代，采用免疫组织化学法以兔抗鼠波形蛋白、结蛋白、角蛋白、S-100抗体进行细胞鉴定。将不同质量浓度的TGF-β2（分别为0、1、10、100mg／L）加入无血清DMEM中作用24h，利用细胞微管吸吮的方法测定各组巩膜成纤维细胞的力学特性。结果模型眼0mg／LTGF—p：组与对照眼0mg／LTGF—p：组比较，模型眼的巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数明显升高，二者之间差异有统计学意义（P〈0．05）。模型眼与对照眼在TGF-β2作用下，0mg／L组与1mg／L组、10mg／组比较，细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异均有统计学意义（P〈0．05）。模型眼和对照眼培养细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数与TGF-β2的质量浓度均呈正相关（r=0．743、r=0．533；r=0．654、r=0．576），模型眼和对照眼中的0mg／L组与100mg／L组比较细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异均无统计学意义（P〉0．05），模型眼1mg／L组、10mg／L组与对照眼1mg／L组、10mg／L组比较，巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数之间差异有统计学意义（P〈0．05）；模型眼组100mg／LTGF-β2与对照眼的100mg／LTGF-β2组比较，巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异无统计学意义（P〉0．05）。结论随着TGF—B，质量浓度的增加，近视眼巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数值明显升高，1mg／L和10mg／LTGF-β2可以降低正
- 陈博宇王超英马景学陈维毅郝岚刘迎庆仝春梅王彩荣
- 关键词：近视转化生长因子-Β2巩膜成纤维细胞
