国家教育部博士点基金(20060246056)
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
- 相关作者：卢奕季樱红燕顺生孔祥银金红更多>>
- 相关机构：复旦大学中国科学院上海生命科学研究院新疆地方病防治研究所更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金上海市卫生局青年科研基金上海市卫生局科技发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠晶体蛋白质组的双向电泳和质谱鉴定研究被引量：1
- 2008年
- 目的应用双向电泳和质谱技术研究5周龄小鼠晶体蛋白质组。方法提取小鼠晶体总蛋白，进行固相pH梯度（IPG）等电聚焦双向电泳，胶体考马斯亮蓝R-250染色，使用PDQuest7．30图像分析软件分析电泳图像。选择主要蛋白点胶上酶解，应用基质辅助激光解析电离飞行时间／飞行时间（MALDI—TOF／TOF）仪器进行串联质谱（MS／MS）鉴定。结果上样量为882μg和190μg时，分别检测370±41蛋白点（n=3）和57±5个蛋白点（n=3）。高上样量能够较好地分离晶体低丰度蛋白，如念珠状纤维结构蛋白BFSP；低上样量可很好地分离高丰度蛋白-晶体蛋白（包括αA、αB；βA1～βA4；βB1～βB3；γA～γF和γS等）。质谱鉴定得到1种细胞骨架蛋白和16种高丰度晶体蛋白。结论双向电泳和质谱技术有效考察了晶体总蛋白质，为分析白内障形成过程中蛋白质的表达改变提供了新的方法和途径。
- 季樱红卢奕李娜金红杨芃原
- 关键词：蛋白质组双向凝胶电泳质谱
- 先天性γS基因突变小鼠晶状体的形态学和病理学改变被引量：4
- 2007年
- 目的了解先天性γS基因突变小鼠晶状体的形态学和病理学改变。方法采用先天性γS突变小鼠动物模型,其遗传方式为隐性遗传。将5周龄的突变小鼠和正常小鼠分为两组,扩瞳后进行眼部和肉眼生物裂隙灯显微镜照相。脊椎脱臼处死小鼠后摘除眼球,固定并制作组织病理石蜡切片,用HE染色后进行光镜观察。结果和正常小鼠相比,γS突变小鼠双眼都产生对称的核性白内障,晶状体核区完全被白色混浊所覆盖,而周边皮质透明。组织病理学上,突变小鼠的晶状体可出现Morgagnian(马氏)小体;前囊下皮质纤维排列疏松,出现空泡样改变;赤道部上皮细胞增殖明显,并向前后极迁移;核心部嗜伊红深染,纤维短缩,排列紊乱;后囊膜下出现空泡变性。结论γS基因突变影响了小鼠晶状体的正常发育,促进晶状体上皮细胞的增殖或使其向晶状体纤维细胞分化时脱核受阻,并直接或间接地影响晶状体纤维的排列,从而导致白内障的发生。
- 季樱红卢奕孔祥银燕顺生
- 关键词：突变株
- 晶状体上皮细胞启动子LEP503调控的自杀基因系统细胞特异性表达研究
- 2012年
- 目的探讨人晶状体上皮细胞（HLEC）特异性启动子LEP503调控的Cre／LoxP增强型自杀基因（HSV-tk／GCV）系统在眼内主要细胞中的特异性表达及杀伤作用。方法实验研究。利用分子克隆技术，构建HLEC特异性启动子LEP503调控的HSV—tk／GCV系统并进行慢病毒包装。分别在HLEC、视网膜色素上皮细胞（RPEC）、小鼠成纤维细胞（NIH3T3）、293T细胞中转人此系统，3d后观察4组细胞增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达情况，并收集HLEC和RPEC，通过RT-PCR检测HSV—tk的表达差异。20mg／L丙氧鸟苷（GCV）作用后，CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测HSV-tk／GCV系统对HLEC和RPEC的杀伤作用。采用单因素方差分析Scheffe两两比较法对各组RPEC活性进行比较。结果HSV-tk／GCV系统在RPEC、NIH3T3、293T细胞中EGFP表达效率分别为62．3％，68．3％，75．8％；在HLEC中EGFP表达效率为17．5％。RT—PCR检测显示HLEC内有较高的HSV—tk表达，相对灰度值为4．01，而RPEC中HSV-tk表达微弱，相对灰度值为0．29。20mg／LGCV作用72h后流式细胞仪检测：HLEC组的细胞凋亡率为76．51％，而RPEC组仅为2．44％。CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制情况显示：20mg／LGCV作用72h后LEP503调控的HSV—tk／GCV转染的RPEC活性0．9198±0．06与正常RPE组0．9672±0．02和阴性对照RPE组0．89274-0．07相比，差异无统计学意义[组间均数差值（MD）分别为MD1=-0．047，P=0．671；MD2=0．027，P=0．912]。结论HLEC特异性启动子LEP503调控的Cre／LoxP增强型自杀基因系统在HLEC中能特异性表达HSV．tk，GCV作用后可特异性抑制HLEC增殖，但对RPEC无明显杀伤作用。
- 蒋永祥卢奕刘天津杨晋吴新华
- 关键词：慢病毒属基因表达调控基因自杀DNA结合蛋白质类上皮细胞
- 遗传性白内障小鼠晶状体的比较蛋白质组分析被引量：1
- 2009年
- 目的:比较研究先天性遗传性白内障的晶状体蛋白质表达谱的改变。方法:采用自发的Crygs基因突变先天性隐性遗传白内障小鼠模型,分别提取白内障与正常小鼠晶状体总蛋白,进行固相pH梯度(IPG)等电聚焦双向电泳,R-250染色,使用PDQuest7.30图像分析软件分析电泳图像。选择部分差异蛋白点胶上酶解,应用MALDI-TOF/TOF仪器进行串联质谱(MS/MS)鉴定及分析。结果:上样量为882μg时,白内障和正常小鼠分别检测到(417±53)个蛋白点(n=3)和(370±41)个蛋白点(n=3)。上样量为190μg时,白内障和正常小鼠分别检测到(60±7)个蛋白点和(57±5)个蛋白点(n=3)。对γS、BFSP/filensin、γF、βA1、βB1、βB2和αB等7种差异蛋白进行了鉴定。突变小鼠晶状体正常γS、念珠状纤维结构蛋白(BFSP/filensin)缺失,γF表达下调(<4倍),异常βA1、βB1、βB2和αB表达上调(>4倍),分子量比正常小,提示βA1、βB1、βB2和αB可能发生裂解。结论:蛋白质的双向电泳和质谱分析有助于基因突变后下游蛋白的功能分析。Crygs基因突变导致γS晶状体蛋白的异常,并引起细胞骨架蛋白(BFSP/filensin)和其它晶状体蛋白(γF、βA1、βB1、βB2和αB等)继发改变,从而间接诱发白内障。
- 季樱红卢奕李娜金红杨芃原孔祥银燕顺生
- 关键词：小鼠蛋白质组
